SAA通過TLR4信號通路促進類風濕關節(jié)炎血管新生的分子機制研究.pdf

1、目的:
　　類風濕性關節(jié)炎（RA）是一種慢性炎癥性疾病，其發(fā)病特點主要為對稱性的多關節(jié)滑膜炎和大量新生血管的形成。已有研究結果顯示血清淀粉樣蛋白 A（SAA）在其發(fā)病機制中發(fā)揮重要作用。本研究首先分析了TLR4在RA患者滑膜組織中的表達，并進一步檢測了SAA與TLR4的相互作用對HUVECs產(chǎn)生促血管生成因子VEGF，Ang-1，Ang-2的影響。最后，通過體外構建三維血管模型，深入探討SAA與TLR4結合介導的NFκB信號途徑在

2、RA新生血管形成機制中的作用。本研究旨在探究SAA促進RA血管新生的分子機制，為RA的臨床診斷和治療尋找新的可靠的靶點奠定實驗基礎。
　　方法:
　　1.免疫組織化學技術檢測RA和OA患者滑膜組織中TLR4的表達。
　　2.采用HUVECs體外細胞培養(yǎng)模型，細胞遷移實驗和MTT實驗分析SAA與TLR4的相互作用對內(nèi)皮細胞遷移、增殖的影響。
　　3.通過體外構建三維血管模型，分析SAA與TLR4的相互作用對內(nèi)皮細胞

3、形成新生血管的影響。
　　4. ELISA方法分析SAA與TLR4的相互作用對內(nèi)皮細胞產(chǎn)生促血管生成因子的影響。
　　5.采用western blot方法分析在人臍靜脈內(nèi)皮細胞（HUVECs）中SAA-TLR4相互作用對NFκB信號途徑活化的影響。
　　結果:
　　1.免疫組化結果顯示，TLR4廣泛表達于RA滑膜組織的襯里層及襯里下層，主要表達在血管內(nèi)皮細胞、成纖維細胞、巨噬細胞及血管周圍；而在OA則少量表達于滑

4、膜襯里層及成纖維細胞,且二者相比表達的量和位置均有顯著差異。
　　2.細胞遷移、MTT實驗以及體外三維血管模型結果分別顯示，SAA可顯著促進HUVECs的增殖和遷移，以及相互連接構成新生血管；在 TLR4被抑制后，SAA介導的內(nèi)皮細胞的遷移、增殖程度以及血管新生明顯受到抑制。
　　3. ELISA結果顯示SAA作用下HUVECs可產(chǎn)生VEGF、Ang-1、Ang-2等促進新生血管形成的因子，而TLR4被抑制后，VEGF的生成

5、明顯減少，其他幾種因子所受影響不明顯。
　　4.Western blot實驗結果顯示HUVECs受SAA刺激后，NFκB分子明顯活化，而一旦TLR4被抑制，NFκB的活化受到明顯抑制。
　　5.細胞遷移實驗以及體外三維血管模型結果分別顯示，在SAA作用下，HUVECs發(fā)生明顯的遷移，并且相互連接構成新生血管；上述結果在NFκB被抑制后，明顯受到抑制。
　　結論:
　　1. TLR4在RA滑膜組織中呈高表達，且TL