克雷伯桿菌質(zhì)粒耐藥性研究.pdf

1、目的： 本文研究作為本研究所研究課題的一部分，主要研究了臨床上常見也是很重要的致病菌肺炎克雷伯菌的耐藥質(zhì)粒。細(xì)菌耐藥性的改變，往往與細(xì)菌所攜帶的耐藥基因有關(guān)，而這些基因往往位于耐藥菌所攜帶的質(zhì)粒上，可通過質(zhì)?；蛸|(zhì)粒所攜帶的可移動(dòng)元件在細(xì)菌群體中播散。因此，我們通過對(duì)質(zhì)粒DNA序列的測(cè)定，分析質(zhì)粒所攜帶的功能基因，從基因組水平研究肺炎克雷伯菌質(zhì)粒DNA的結(jié)構(gòu)，質(zhì)粒與宿主菌的耐藥性和致病性等的關(guān)系，為進(jìn)一步分析肺炎克雷伯菌質(zhì)粒DNA

2、結(jié)構(gòu)的演變規(guī)律和分子進(jìn)化，以及肺炎克雷伯菌的耐藥性和致病性機(jī)理的研究打下基礎(chǔ)。 方法： 本課題從溫州醫(yī)學(xué)院附屬第一醫(yī)院臨床得到206株肺炎克雷伯菌作為本實(shí)驗(yàn)菌株來源。采用堿裂解法提取質(zhì)粒DNA，將全部質(zhì)粒DNA送交深圳華大基因組科學(xué)研究院進(jìn)行solexa測(cè)序，再用SOAP軟件對(duì)我們關(guān)心的耐藥基因進(jìn)行分析，得到分析結(jié)果的序列。通過BLAST比對(duì)我們關(guān)心的基因，通過生物信息的方法，研究所測(cè)肺炎克雷伯菌所有質(zhì)粒包含ESBLs的

3、SNP情況，從而得到不同位點(diǎn)的突變率和新的亞型。對(duì)于拼接好的序列，通過BLAST比對(duì)蛋白數(shù)據(jù)庫（NCBI庫）和COGs，確定蛋白家族。進(jìn)一步對(duì)這些基因進(jìn)行功能分析，并在基因組水平上研究肺炎克雷伯菌質(zhì)粒耐藥性的傳播、演變規(guī)律及分子進(jìn)化機(jī)制。 結(jié)論： 以上研究表明： 1．在肺炎克雷伯桿菌的質(zhì)粒中含有大量的耐藥基因。 2．所測(cè)數(shù)據(jù)中有大量與已知質(zhì)粒相同的基因，尤其是耐藥基因與結(jié)合轉(zhuǎn)移基因，可以認(rèn)為肺炎克雷伯菌的