貴州省鼠類動物鉤端螺旋體分子流行病學(xué)特征及其與人間疫情相關(guān)性研究.pdf

1、目的：了解貴州省鼠類宿主動物鉤端螺旋體（簡稱鉤體）帶菌情況、菌型分布、分子流行病學(xué)特征及其與人間鉤體病疫情的相關(guān)性，為貴州省鉤體病的預(yù)防和控制提供科學(xué)依據(jù)。
　　方法：1.對2010～2014年對貴州省黔東南州鉤體疫源地采用夜夾捕鼠法捕獲鼠類。無菌操作取鼠腎臟于EMJH培養(yǎng)基中培養(yǎng)分離鉤體。2.采用致病性鉤體特異的 PCR引物對分離的鉤體菌株進(jìn)行鑒定，進(jìn)一步運用血清群 PCR技術(shù)對其進(jìn)行血清群鑒定，并采用傳統(tǒng)的顯微鏡凝集試驗對分群

2、結(jié)果進(jìn)行驗證。3.選擇7個串聯(lián)重復(fù)序列VNTR位點，運用MLVA方法對分離的致病性鉤端螺旋體DNA進(jìn)行PCR擴(kuò)增，將擴(kuò)增產(chǎn)物采用2％瓊脂糖凝膠進(jìn)行電泳，凝膠成像系統(tǒng)成像拍照并計算出各 VNTR位點的擴(kuò)增長度，分析菌株各 VNTR位點的重復(fù)數(shù)目，采用聚類分析法分析分離株與參考菌株間的聚類關(guān)系。4.采用7個管家基因位點的MLST方法對分離菌株各管家基因位點進(jìn)行雙向測序，7個管家基因位點序列與參考序列進(jìn)行比對，獲得每株菌的等位基因譜并確定序列

3、ST型，將分離菌株等位基因譜與參考菌株構(gòu)建系統(tǒng)進(jìn)化樹，觀察菌株間親緣進(jìn)化關(guān)系。5.收集2010～2014年的貴州省病例報告數(shù)據(jù)，利用描述性流行病學(xué)方法進(jìn)行分析?？偨Y(jié)鉤體病人的血清學(xué)檢測、培養(yǎng)結(jié)果，并分析其與宿主動物鉤體菌株間的相關(guān)性及貴州省鉤體病的流行情況。
　　結(jié)果：1.2010～2014年貴州省鉤體監(jiān)測點布夾數(shù)6750夾次，共捕鼠646只鼠密度為9.57%，以黑線姬鼠最多（240只），占總數(shù)的37.15%。共培養(yǎng)出鉤端螺旋體菌

4、株56株，鼠類鉤體帶菌率為8.67%。黑線姬鼠帶菌率最高，達(dá)23.33%。2.PCR鑒定結(jié)果顯示，56株鉤體菌株均為致病性鉤端螺旋體。血清群PCR鑒定結(jié)果顯示56株菌株均為黃疸出血群菌株，顯微凝集試驗實驗結(jié)果與PCR方法鑒定結(jié)果一致。3. MLVA分析顯示，56株菌有VNTR4、 VNTR36、VNTR50位點出現(xiàn)重復(fù)數(shù)目差別，56株菌被分為6個MLVA型。聚類分析顯示，56株菌株與參考菌株黃疸出血群56601株聚類關(guān)系最近。4.MLS

5、T分型結(jié)果顯示，56株鉤體菌株的7個MLST位點完全一致，均為ST1型。聚類分析顯示，56株菌株與參考菌株黃疸出血群56601株聚類關(guān)系最近。5.貴州省2010～2014年報告的病例數(shù)共計73例，死亡8例，病死率10.96%。病例地區(qū)分布主要集中在黔東南州。病例以男性為主（95.89%）；職業(yè)以農(nóng)民為主。9月份為貴州省鉤體病的高發(fā)季節(jié)。病人血清抗體陽性率為38.89%，均為抗黃疸出血群鉤體抗體。病原學(xué)檢測從送檢的7份患者血液和尿液標(biāo)本中