HRC在肝星狀細胞活化及肝纖維化中的作用研究.pdf

1、目的：
　　肝纖維化是肝硬化的早期階段，如果纖維化未得到及時干預則會進入肝硬化階段。肝纖維化發(fā)生發(fā)展的一個關鍵環(huán)節(jié)是肝臟星狀細胞（HSC）的活化。鈣離子參與多種肝臟疾病的發(fā)生發(fā)展，在肝臟纖維化中也具有一定意義。HRC是一種鈣離子結合蛋白，在維持和調節(jié)人體內鈣離子穩(wěn)態(tài)中發(fā)揮重要作用。既往研究表明，HRC在心臟纖維化及肝癌的遷移增長中有一定作用,但目前在肝臟纖維化中的作用尚無研究。本研究旨在探討HRC是否在肝纖維化的發(fā)生機制中發(fā)揮作用

2、。
　　方法：
　　免疫組織化學、RT-PCR和Western blot檢測HRC在肝纖維化患者和TAA誘導肝纖維化模型大鼠肝臟中HRC的表達和分布。梯度離心方法分離大鼠原代肝星狀細胞；常規(guī)培養(yǎng)及用轉化生長因子(TGF)-β1刺激原代大鼠肝星狀細胞,檢測肝纖維化相關指標及HRC的表達變化。利用特異性siRNA HRC轉染LX-2細胞系來下調HRC的表達，利用RT-PCR和Western blot檢測肝纖維化相關指標、內質網(wǎng)應

3、激關鍵蛋白分子；用內質網(wǎng)應激（ERS）激動劑（TG）和抑制劑（4-PBA）處理LX-2細胞后，利用RT-PCR和Western blot檢測HRC、α平滑肌蛋白(α-SMA)、I型膠原（COL1A1）、IV型膠原（COL3A1）、CTGF、內質網(wǎng)應激關鍵蛋白分子，例如C/EBP蛋白（CHOP）、葡萄糖調節(jié)蛋白78（GRP78）、激活轉錄因子4（ATF4）。
　　結果：
　　HRC在肝纖維化患者和TAA誘導的纖維化模型大鼠肝臟

4、中表達水平較正常組增加（p<0.05）。在HSC培養(yǎng)過程中，細胞的活化會誘導HRC表達以及發(fā)生ERS。在大鼠原代HSC和LX-2細胞系培養(yǎng)過程中，與TGF-β共孵育可增加HRC的表達（p<0.05）且呈劑量依賴關系。在LX-2細胞系中抑制HRC的表達會降低肝星狀細胞的活化程度，減弱該細胞系的增殖和遷移能力（p<0.05）。另外，在LX-2細胞中抑制HRC的表達后內質網(wǎng)應激指標，包括ATF4、GRP78和CHOP，表達量顯著降低（p<0.