加減血癥湯抗腫瘤作用及相關機制的實驗研究.pdf

1、目的:
　　探討加減血癥湯抗腫瘤作用及相關機制。
　　方法:
　　1.應用液相色譜-質(zhì)譜聯(lián)用技術測定加減血癥湯總提物有效成分。
　　2.采用MTT法檢測加減血癥湯對體外培養(yǎng)的人胃癌細胞株SGC-7901不同濃度的增殖能力的抑制作用及其與時間的相關性。
　　3.采用AnnexinⅤ/PI熒光雙染法檢測加減血癥湯對人胃癌細胞株SGC-7901細胞凋亡的影響。
　　4.采用流式細胞儀檢測不同濃度加減血癥湯對

2、人胃癌細胞株SGC-7901細胞周期的影響。
　　5.通過雞胚尿囊膜技術及體外增殖實驗驗證加減血癥湯的抗血管生成作用。
　　6.采用RT-PCR法檢測SGC-7901細胞中VEGF、mTOR、PI3K、Akt等相關基因的表達變化及其濃度相關性。
　　7.運用Western Blot法檢測加減血癥湯體外作用于人胃癌細胞株SGC-7901相關蛋白表達的變化及其濃度相關性。
　　8.建立裸鼠胃癌皮下移植瘤模型，觀察加減

3、血癥湯對裸鼠胃癌皮下移植瘤的抑制作用，根據(jù)荷瘤裸鼠移植瘤的體積和重量計算加減血癥湯提取液的抑瘤率;HE染色光鏡觀察腫瘤組織的形態(tài)結構;免疫組織化學法檢測加減血癥湯提取液對腫瘤組織抗血管生成相關分子蛋白的表達。
　　結果:
　　1.加減血癥湯提取液主要的化學成分為:芍藥苷、阿魏酸、桂皮醛、芒柄花素、姜黃素、藁本內(nèi)酯、莪術醇、熊果酸、齊墩果酸，且醇提液的有效成分明顯高于水提液。
　　2.加減血癥湯對人胃癌細胞株SGC-79

4、01增殖能力抑制作用明顯，并且呈現(xiàn)明顯的濃度及時間相關性。
　　3.加減血癥湯能顯著誘導人胃癌細胞SGC-7901的凋亡。
　　4.不同濃度的加減血癥湯提取液干預人胃癌SGC-7901細胞生長48h后，G1期細胞明顯增多，并且隨著藥物濃度的增加，細胞比例也隨之增加，具有明顯的劑量依賴性。
　　5.加減血癥湯有明顯抗血管生成作用。
　　6.加減血癥湯可下調(diào)人胃癌SGC-7901細胞中VEGF、mTOR、PI3K、A

5、kt的mRNA的表達。
　　7.不同濃度加減血癥湯均對人胃癌SGC-7901細胞中VEGF、mTOR、PI3K、Akt蛋白的表達有下調(diào)作用。
　　8.加減血癥湯對接種人胃癌SGC-7901細胞裸鼠皮下移植瘤的生長具有明顯的抑制作用，大、中、小劑量組抑瘤率分別達到58.98％、45.02％，27.52％。免疫組化顯示加減血癥湯組VEGF、CD31、HIF-1α、PI3K、p-mTOR、p-AKT、COX-2蛋白表達降低，且隨著

6、劑量的增高，蛋白表達逐漸下降。
　　結論:
　　加減血癥湯能明顯抑制人胃癌細胞株SGC-7901的增殖，并誘導人胃癌細胞株SGC-7901的凋亡、調(diào)節(jié)細胞周期;加減血癥湯能下調(diào)入胃癌細胞株SGC-7901中VEGF、mTOR、PI3K、Akt等相關基因及蛋白的表達;加減血癥湯可降低接種人胃癌SGC-7901細胞裸鼠皮下移植瘤中VEGF、CD31、HIF-1α、PI3K、p-AKT、p-mTOR、COX-2蛋白表達，且呈劑量相