CCR5及其配體CCL5在川崎病外周血T淋巴細(xì)胞中的表達(dá)研究.pdf

1、目的：總結(jié)32例川崎?。↘awasaki Disease，KD）急性期患兒的臨床資料了解川崎病的臨床特點(diǎn)，分別以細(xì)胞免疫化學(xué)、蛋白免疫印跡法及流式細(xì)胞術(shù)檢測(cè)外周血T淋巴細(xì)胞中CCR5/CCL5的表達(dá)，以及使用CCR5配體拮抗劑后CCR5/CCL5的表達(dá)，探討CCR5/CCL5生物軸在KD炎癥急性期的可能作用，并通過CCR5與臨床炎癥因子的相關(guān)性分析，初步探討CCR5/CCL5與臨床炎癥表現(xiàn)的關(guān)系。
　　方法：(1)總結(jié)32例急性期

2、川崎病患兒臨床病史資料；(2)培養(yǎng)T淋巴細(xì)胞，MTT法確定PHA合適濃度，流式細(xì)胞術(shù)篩選確定T淋巴細(xì)胞；(3)用細(xì)胞免疫組化、蛋白免疫印跡法和流式細(xì)胞術(shù)分別檢測(cè)外周血T淋巴細(xì)胞中CCR5、CCL5的表達(dá)；(4)用流式細(xì)胞術(shù)檢測(cè)加入CCR5配體拮抗劑后CCR5/CCL5的表達(dá)；(5)分析CCR5與臨床炎癥因子的相關(guān)性。
　　結(jié)果：(1)32例川崎病患兒中男性20例，女性12例，男女比為1.7:1；年齡在6月到7.5歲，平均年齡(2.

3、10±1.83)歲，其中<1歲5例（15.6％），1歲~5歲24例（75%），>5歲3例（9.4%）；分組中冠狀動(dòng)脈損害（CAL）者8例（25%），無冠脈損害者24例（75%）；熱程均超過5天，平均熱程為7.82±1.35天；楊梅舌16例（50%）；手足硬腫、指趾端、肛周脫屑18例（56.2%）；皮疹19例（59.3%）；結(jié)膜充血24例（75.0%）；頸淋巴結(jié)腫25例（78.1%）；唇紅、皸裂27例（84.3%）；輔檢可見白細(xì)胞總數(shù)及C

4、反應(yīng)蛋白、血小板計(jì)數(shù)均增高，血沉明顯增快；與NCAL患兒相比較，CAL患兒外周血PLT和ESR有明顯增加﹝PLT(×10^9/L)432.9±85.6 vs367.4±70.3，ESR（mm/h）54.4±17.3 vs42.8±13.8，P<0.05，而 WBC、CRP、Hb、LDH在兩者間均無明顯差異（P>0.05）；此次彩超觀察發(fā)現(xiàn)在KD-CAL患兒中以冠狀動(dòng)脈擴(kuò)張最常見，冠狀動(dòng)脈瘤本次所搜集資料中未發(fā)現(xiàn)，在合并冠狀動(dòng)脈擴(kuò)張的患兒

5、中，可同時(shí)伴有瓣膜的反流，乳頭肌回聲增強(qiáng)，心包積液等心臟其他改變。(2)PHA可刺激淋巴細(xì)胞的增殖，MTT法檢測(cè)發(fā)現(xiàn)使T淋巴細(xì)胞產(chǎn)生增殖的最適PHA濃度為1μg/m1。(3)CCR5表達(dá)于外周血T淋巴細(xì)胞表面，健康組及KD組均能檢測(cè)到陽性表達(dá)，KD組較健康組高表達(dá)CCR5。(4)用CCR5配體拮抗劑Maraviroc處理后，與前期未加入拮抗劑時(shí)相比，CCL5、CCR5在健康組表達(dá)無顯著變化，而二者在KD組的表達(dá)均顯著下降。(5)CCR5

6、的表達(dá)水平與CRP、ESR、PLT呈正相關(guān)。
　　結(jié)論：(1)本次病例收集發(fā)現(xiàn)：KD常見于男性患兒，1-5歲高發(fā)；臨床上除均有高熱外，以唇紅皸裂、球結(jié)膜充血、頸淋巴結(jié)腫大最為常見；心臟彩超檢查發(fā)現(xiàn)8例冠脈擴(kuò)張中以左主干為主；實(shí)驗(yàn)室檢查中WBC，CRP，ESR，PLT升高的同時(shí)可合并有心肌酶譜升高、血紅蛋白下降，其中PLT及ESR的增高在有冠脈損害的患兒中尤為明顯；此次收集的資料分析結(jié)果可能有助于早期診斷川崎病提供更多臨床依據(jù)。(2

7、)證實(shí)了CCR5及其配體CCL5在KD患兒外周血T淋巴細(xì)胞上有明確表達(dá)，CCR5表達(dá)于胞膜；有望將CCR5作為KD的免疫檢測(cè)和治療的靶標(biāo)物質(zhì)。(3)KD患兒CCR5、CCL5的表達(dá)水平均高于健康兒童；加入CCR5配體拮抗劑阻斷后，CCR5、CCL5在KD患兒中的表達(dá)均顯著下降；CCR5的表達(dá)水平與臨床炎性因子CRP、ESR、PLT呈正相關(guān)；推測(cè)川崎病急性期的炎癥反應(yīng)與CCR5/CCL5生物軸的活化有關(guān)，并且CCR5配體CCL5可能在CC