慢病毒介導的CYP17A1基因沉默對膠質(zhì)瘤細胞生物學活性的影響.pdf

1、目的：檢測不同病理級別膠質(zhì)瘤組織中CYP17A1的表達，及CYP17A1和AR共表達的意義。建立CYP17A1基因沉默膠質(zhì)瘤細胞株，并研究CYP17A1基因沉默對膠質(zhì)瘤細胞生物學活性的影響，為進一步研究雄激素信號通路在膠質(zhì)瘤發(fā)生發(fā)展中的作用奠定了基礎(chǔ)。
　　方法：①采用免疫組化、Real time-PCR、Western blot實驗方法，檢測55例膠質(zhì)瘤組織及10例正常腦組織中 CYP17A1的表達情況。②采用免疫組化的方法檢測

2、CYP17A1及AR在膠質(zhì)瘤組織中的共表達。③通過慢病毒包裝的CYP17A1特異性shRNA表達載體，建立CYP17A1表達沉默的細胞株，并通過Real time-PCR實驗檢測該細胞株中CYP17A1的mRNA的表達情況。④通過Western blot、CCK-8、Transwell細胞遷移侵襲實驗、流式細胞術(shù)、裸鼠成瘤實驗等方法檢測 CYP17A1基因沉默對膠質(zhì)瘤細胞生物學活性的影響。
　　結(jié)果：①與正常腦組織相比，在膠質(zhì)瘤組

3、織中 CYP17A1基因在蛋白質(zhì)水平和mRNA水平的表達量明顯增高，差異有統(tǒng)計學意義（P<0.05）。② CYP17A1蛋白和AR蛋白在膠質(zhì)瘤組織明顯高表達，在正常組織中不表達或低表達，并隨著病理級別升高而表達增強（P<0.05）。③成功建立CYP17A1基因沉默細胞株，并用Real time-PCR檢測T98G-CYP17A1組與空白對照組及空質(zhì)粒組CYP17A1mRNA的表達，T98G-CYP17A1組的 CYP17A1的 mRNA

4、表達水平明顯降低（F=15.44，P<0.05）。④與空白對照組和空質(zhì)粒組相比，T98G-CYP17A1組膠質(zhì)瘤細胞在增殖水平、侵襲和遷移能力均明顯下降，細胞凋亡明顯增加；T98G-CYP17A1異位移植瘤的裸鼠皮下成瘤能力明顯弱于空白對照組及空質(zhì)粒組（P<0.05）。
　　結(jié)論：①在膠質(zhì)瘤組織中CYP17A1在蛋白質(zhì)和mRNA水平的表達量明顯高于正常腦組織。② CYP17A1蛋白和AR蛋白在膠質(zhì)瘤組織中高表達提示雄激素通路參與了