CircHIPK2-miR-124-σ-1R軸在星形膠質細胞活化中的作用機制研究.pdf

1、目的:中樞神經系統(tǒng)疾病大多伴有嚴重的神經炎性反應，早期研究結果表明，神經炎性反應在腦內病理過程中起重要作用。星形膠質細胞作為哺乳動物腦內分布最為廣泛的細胞，在神經炎性反應過程中扮演重要角色，但調控星形膠質細胞活化的具體分子機制還不甚明確。本研究從競爭內源性RNA(ceRNA)機制出發(fā)，闡明環(huán)狀RNA(circular RNA，circRNA)對microRNA(miRNA)的海綿吸附作用，進而調控星形膠質細胞的活化過程。本研究結果不僅為

2、甲基苯丙胺所致神經炎性反應提供潛在的治療靶點，同時也為其它神經炎性疾病的治療提供指導意義。
　　方法:應用Western blot檢測膠質纖維酸性蛋白(glial fibrillary acidic protein，GFAP)、σ-1受體(σ-1R)、內質網應激和自噬相關蛋白表達水平;應用real-timePCR檢測circular RNA HIPK2(circHIPK2)、miRNA124(miR-124)和σ-1R mRNA表

3、達水平;應用熒光素酶報告基因驗證miR-124對σ-1R mRNA的調控作用;應用RNA pull down和原位雜交共定位實驗驗證circHIPK2與miR-124存在相互結合;運用慢病毒轉染和小鼠腦微注射技術，結合Western blot和免疫熒光染色技術，在離體和整體水平上驗證circHIPK2/miR-124/σ-1R軸在星形膠質細胞活化中的作用。
　　結果:1）σ-1R參與調控星形膠質細胞活化;2）miR-124負調控σ

4、-1R表達;3）細胞水平上，miR-124通過靶向調控σ-1R，抑制甲基苯丙胺引起的星形膠質細胞活化;4）整體水平上，Anti-miR-124促進野生型（wide type，WT）小鼠海馬腦區(qū)星形膠質細胞活化，但在σ-1R敲除(knockout，KO)小鼠上未發(fā)現(xiàn)明顯差異;5）circHIPK2結合吸附miR-124;6）細胞水平上，敲低circHIPK2抑制星形膠質細胞活化;7）整體水平上，敲低circHIPK2抑制甲基苯丙胺/脂多糖

5、(lipopolysaccharide，LPS)引起的小鼠海馬腦區(qū)星形膠質細胞活化;8）甲基苯丙胺誘導星形膠質細胞自噬和內質網應激的發(fā)生;9）敲低circHIPK2抑制星形膠質細胞自噬的發(fā)生;10）敲低circHIPK2抑制星形膠質細胞內質網應激的發(fā)生;11)內質網應激促進甲基苯丙胺引起的星形膠質細胞活化，而自噬抑制甲基苯丙胺引起的星形膠質細胞活化;12）甲基苯丙胺引起的內質網應激促進星形膠質細胞自噬的發(fā)生，自噬抑制甲基苯丙胺引起的內質