PinX1在三陰型乳腺癌中的功能及機(jī)制的初步研究.pdf

1、乳腺癌女性最常見(jiàn)的惡性腫瘤，全球每年乳腺癌的新發(fā)病例遠(yuǎn)超過(guò)150萬(wàn)人，形勢(shì)嚴(yán)峻。根據(jù)雌激素受體、孕激素受體、人表皮生長(zhǎng)因子受體-2以及Ki-67的表達(dá)情況，乳腺癌被劃分為四種不同亞型，依次為:管腔A型、管腔B型、HER2陽(yáng)性型及三陰型乳腺癌。近些年，乳腺癌早期篩查及治療方法的不斷改進(jìn)提高顯著降低了Luminal型及HER2陽(yáng)性型乳腺癌的死亡率。但是，三陰型乳腺癌的死亡率仍居高不下，令人堪憂。深入了解乳腺癌的異質(zhì)性，完善針對(duì)乳腺癌不同分子

2、亞型的特異的診斷及治療方法，尋找三陰型乳腺癌特異性的生物分子標(biāo)志物，以實(shí)現(xiàn)個(gè)體化的綜合診治，降低三陰型乳腺癌的死亡率，提高患者的生存質(zhì)量，是當(dāng)今亟待解決的難題。
　　PinX1是一個(gè)大小為45KD，由328個(gè)氨基酸構(gòu)成的端粒蛋白復(fù)合體(shelterin)相關(guān)蛋白。越來(lái)越多的研究表明，PinX1在多種腫瘤中表達(dá)下降，可能通過(guò)與端?；蚨肆Ｃ赶嗷プ饔靡种颇[瘤生長(zhǎng)，是一個(gè)潛在的腫瘤抑制因子。目前，人們對(duì)于PinX1與三陰型乳腺癌的關(guān)系仍

3、知之甚少，PinX1在三陰型乳腺癌的預(yù)后、診斷及治療等方面的臨床價(jià)值仍有待進(jìn)一步研究。
　　本研究首先通過(guò)實(shí)時(shí)熒光定量PCR及Western Blot檢測(cè)了PinX1在乳腺癌組織及其配對(duì)癌旁組織中的表達(dá)情況，結(jié)果表明PinX1在乳腺癌組織中低表達(dá);其次，通過(guò)組織芯片及免疫組織化學(xué)染色，進(jìn)一步探究PinX1表達(dá)與乳腺癌臨床病理參數(shù)間的關(guān)系。在59例浸潤(rùn)性導(dǎo)管癌中，PinX1的表達(dá)與患者ER表達(dá)狀態(tài)、PR表達(dá)狀態(tài)、組織病理學(xué)分級(jí)具有顯

4、著相關(guān)性(P＜0.05)，而與臨床分期、pT分期、年齡、P53狀態(tài)及HER2狀態(tài)無(wú)顯著相關(guān)性(P＞0.05);然后，通過(guò)分層分析探究了PinX1表達(dá)與乳腺癌不同亞型間的關(guān)系，結(jié)果發(fā)現(xiàn)，PinX1的表達(dá)與三陰型乳腺癌密切相關(guān)，在三陰型乳腺癌中表達(dá)降低。
　　最后，選取一株人三陰型乳腺癌細(xì)胞系(MDA-MB-231)，采用G418篩選及CRISPR-Cas9技術(shù)構(gòu)建過(guò)表達(dá)及敲除PinX1的穩(wěn)定細(xì)胞系，通過(guò)劃痕、CCK-8、流式、Tra

5、nswell等功能試驗(yàn)，以進(jìn)一步驗(yàn)證PinX1可能的作用機(jī)制。CCK-8實(shí)驗(yàn)結(jié)果表明，過(guò)表達(dá)PinX1抑制了細(xì)胞的增殖，而敲除PinX1則在一定程度上促進(jìn)了細(xì)胞的增殖(P＜0.05);劃痕及Transwell試驗(yàn)驗(yàn)證了過(guò)表達(dá)PinX1抑制細(xì)胞遷移，而PinX1敲除則促進(jìn)細(xì)胞遷移(P＜0.05);流式檢測(cè)結(jié)果提示，過(guò)表達(dá)PinX1對(duì)細(xì)胞的凋亡具有一定的促進(jìn)作用，而敲除PinX1則抑制了細(xì)胞的凋亡。此外，利用Western Blot檢測(cè)凋亡