RhoA在缺氧誘導的乳腺癌新生血管形成中的功能及其機制研究.pdf

1、乳腺癌是全球女性發(fā)病率最高的惡性腫瘤。由于乳腺癌細胞異常的增殖能力，遠處臟器的轉移能力，以及對現(xiàn)有治療藥物的抵抗能力，使其成為嚴重危害女性健康的“頭號殺手”。盡管乳腺癌的早期診斷、治療手段和預后檢測水平不斷提高，但是乳腺癌患者的死亡率仍舊得不到有效的控制?？寡苌芍委熥鳛橐环N腫瘤生物治療手段越來越受到重視，它不僅可以切斷腫瘤原發(fā)灶的營養(yǎng)供給，而且可以通過抑制新生血管的生成而控制腫瘤的遠處轉移。但是，目前有關腫瘤新生血管的研究相對較少，

2、其分子機制還不完全清楚，尋找到血管生成通路上游的開關分子意義重大。
　　RhoA作為小G蛋白家族中的一員，參與了腫瘤的轉移、侵襲、增殖、凋亡和周期調控等多個環(huán)節(jié)，并且扮演著眾多信號通路分子開關的角色。然而，有關RhoA在腫瘤新生血管中的作用機制尚無明確的定論。缺氧作為一種應激因素，貫穿于腫瘤發(fā)生發(fā)展的全過程。缺氧不僅可以影響腫瘤相關因子的轉錄表達，而且為新生血管的發(fā)生提供了“溫床”。那么，RhoA是否在缺氧誘導的腫瘤新生血管中發(fā)揮

3、作用呢？我們能否從RhoA入手去調控血管生成的信號通路呢？帶著這樣的疑問，我們進行了RhoA在缺氧誘導的乳腺癌新生血管形成中的功能及其機制的研究。
　　研究方法和結果：
　　1、RhoA在乳腺癌細胞系中的表達分析及對腫瘤細胞惡性生物學行為的影響：（1）通過RT-PCR和westernblot分別檢測七株乳腺癌細胞系中RhoA的表達情況；（2）轉染針對人RhoA的小干擾RNA，westernblot和RT-PCR驗證其干涉效率

4、；（3）通過MTT實驗、單層細胞劃痕實驗、細胞周期和凋亡檢測實驗觀察siRhoA對MCF-7細胞增殖、遷移、細胞周期和凋亡的影響；（4）通過裸鼠移植瘤內注射siRhoA實驗和免疫組化分析，觀察siRhoA對移植瘤生長和VEGF表達的影響。結果：RhoA在乳腺癌細胞系中差異性表達，這種表達的差異性與細胞的侵襲轉移能力有關；siRhoA能夠有效地逆轉腫瘤細胞的惡性生物學行為，并且體外瘤內注射同樣能夠發(fā)揮抑瘤和抑制血管的作用。
　　2、

5、RhoA在缺氧誘導的乳腺癌新生血管形成中的生物功能分析：（1）ELISA檢測缺氧條件下，MCF-7細胞中RhoA對VEGF分泌水平的影響；（2）建立MCF-7/HUVEC共培養(yǎng)模型，觀察在缺氧刺激下，MCF-7細胞中RhoA活性的變化對HUVEC增殖、遷移、管腔和F-actin形成的影響。結果：缺氧條件下，活性RhoA可以促進MCF-7細胞VEGF的分泌，沉默RhoA可以抑制VEGF的分泌；在共培養(yǎng)模型中，當MCF-7細胞中RhoA活化

6、時，可以促進HUVEC增殖、遷移、管腔和F-actin的形成，而MCF-7細胞中RhoA沉默時，則HUVEC的上述生物學行為受到抑制。
　　3、RhoA在缺氧誘導的乳腺癌新生血管形成中的分子機制研究：（1）westernblot檢測缺氧對RhoA、p53、HIF-1α和VEGF蛋白水平的影響及RhoA對這三個分子的調控作用；（2）共聚焦顯微鏡觀察缺氧情況下RhoA對p53核轉位的影響；（3）westernblot和免疫共沉淀檢測R

7、hoA調控p53的信號通路。結果：缺氧可以抑制p53的表達，促進RhoA、HIF-1α和VEGF的表達；RhoA激活后能夠抑制p53的表達，促進HIF-1α和VEGF的表達，而RhoA沉默后能夠上調p53的表達，下調HIF-1α和VEGF的表達；缺氧條件下，RhoA的活化可以促進p53的入核，而沉默RhoA則p53的入核作用明顯減弱；Akt/MDM2和泛素-蛋白酶體通路可能參與了RhoA對缺氧誘導腫瘤血管生成的分子機制中。
　　結

8、論：（1）RhoA在七株乳腺癌細胞系中差異性表達，這可能與細胞的轉移侵襲能力有關；（2）siRhoA可以逆轉腫瘤細胞的惡性生物學行為，移植瘤內注射可以抑制腫瘤的生長和VEGF的表達；（3）在缺氧刺激下，RhoA可能通過調控VEGF的表達水平，間接地影響HUVEC細胞的增殖、遷移、管腔和F-actin形成能力，從而參與腫瘤新生血管的形成過程中；（4）缺氧條件下，RhoA通過對血管抑制因子p53的調節(jié)來影響血管生成因子HIF-1α和VEGF