小膠質(zhì)細(xì)胞P2X4受體促進慢性內(nèi)臟痛脊髓中樞的敏化.pdf

1、目的：
　　探究小膠質(zhì)細(xì)胞P2X4受體對慢性功能性內(nèi)臟痛脊髓中樞敏化作用,為慢性內(nèi)臟痛的藥物治療提供新的作用靶點和治療方向。
　　方法：
　　新生SD大鼠出生第3～21天，每天固定時間給予3小時母嬰分離，建立腸易激綜合征（IBS）慢內(nèi)臟痛大鼠模型。通過檢測大鼠腹外斜肌對結(jié)直腸擴張的放電反應(yīng)來評估IBS模型建立是否成功，并記錄大鼠腹外斜肌在鞘內(nèi)給予P2X4受體阻斷劑5-BDBD、激動劑C5-TDS前后對于結(jié)直腸擴張的放電

2、幅值；采用Western blot方法檢測大鼠脊髓P2X4受體以及腦神經(jīng)營養(yǎng)因子（BDNF）的表達(dá)情況；借助免疫組化的方法檢測大鼠脊髓背角離子鈣接頭蛋白1（Iba-1）表達(dá)情況來觀察小膠質(zhì)細(xì)胞的活化狀態(tài)；通過免疫熒光雙標(biāo)方法觀察大鼠脊髓背角P2X4受體與Iba-1蛋白表達(dá)部位是否一致來確認(rèn)P2X4受體是否在小膠質(zhì)細(xì)胞上表達(dá)。
　　結(jié)果：
　　與正常大鼠相比較，IBS大鼠腹外斜肌對結(jié)直腸擴張刺激反應(yīng)顯著增強（p<0.05）；鞘

3、內(nèi)給予P2X4受體阻斷劑5-BDBD可抑制IBS和正常大鼠腹外斜肌對結(jié)直腸擴張的放電反應(yīng)，同等劑量下，其對IBS大鼠的阻斷反應(yīng)更明顯（p<0.05），而且在IBS大鼠該阻斷劑表現(xiàn)出明顯的劑量依賴效應(yīng)；鞘內(nèi)給予P2X4激動劑C5-TDS后，IBS和正常大鼠腹外斜肌對結(jié)直腸擴張刺激放電反應(yīng)顯著增強，同等劑量下，對IBS大鼠的激動作用更明顯（p<0.05），而且在IBS大鼠該激動劑表現(xiàn)出明顯的劑量依賴效應(yīng)；Western blot結(jié)果顯示，與

4、正常大鼠相比較，IBS大鼠脊髓胸腰段和腰骶段P2X4受體顯著表達(dá)（p<0.05）及 BDNF蛋白顯著表達(dá)（p<0.05）；而且鞘內(nèi)給予P2X4受體阻斷劑后，BDNF在IBS大鼠脊髓表達(dá)的抑制程度顯著高于正常大鼠（p<0.05）；免疫組化結(jié)果顯示，與正常大鼠相比較，IBS大鼠脊髓背角 Iba-1蛋白顯著表達(dá)（p<0.05），形態(tài)發(fā)生不同程度的肥大，而且鞘內(nèi)給予P2X4受體阻斷劑后，Iba-1在IBS大鼠脊髓背角的表達(dá)抑制程度顯著高于正常大