成肌細(xì)胞分化過程中KIF5B對CDO信號通路的時空調(diào)控機制研究.pdf

1、成肌細(xì)胞是未分化的肌肉前體細(xì)胞，可以分化融合形成肌管(Myotube)，在肌肉生成中扮演著重要的角色。Cdo-p38MAPK信號通路是調(diào)控骨骼肌生成過程的主要信號通路之一，在成肌細(xì)胞分化過程中細(xì)胞表面受體蛋白Cdo可通過與支架蛋白BNIP-2和JLP相結(jié)合激活p38MAPK進(jìn)而促進(jìn)成肌細(xì)胞的分化和肌管的形成，但是其中的時空調(diào)控機制尚不清楚。
　　本研究中我們發(fā)現(xiàn)KIF5B蛋白（又被稱為Kinesin-1的分子馬達(dá)蛋白）可與支架蛋白

2、BNIP-2相互作用并參與其在成肌細(xì)胞C2C12內(nèi)的轉(zhuǎn)運，調(diào)控BNIP-2促進(jìn)成肌細(xì)胞分化的作用。首先我們通過蛋白GST-Pull down實驗、蛋白質(zhì)譜分析、蛋白免疫共沉淀實驗發(fā)現(xiàn)和確認(rèn)KIF5B蛋白通過其motor和tail結(jié)構(gòu)域與BNIP-2蛋白的BCH結(jié)構(gòu)域相互結(jié)合。其次，通過免疫熒光和活細(xì)胞成像實驗我們發(fā)現(xiàn)在成肌細(xì)胞中BNIP-2蛋白定位于細(xì)胞早期內(nèi)涵體，并且BNIP-2蛋白沿細(xì)胞微管順行性運動。同時我們還發(fā)現(xiàn)在細(xì)胞中過量表達(dá)

3、KIF5B蛋白的motor或tail結(jié)構(gòu)域均可阻礙BNIP-2蛋白的這種順行性運動，并且通過siRNA干擾降低KIF5B蛋白的表達(dá)也可以抑制BNIP-2蛋白在成肌細(xì)胞C2C12中的順行性運動。由此可以確認(rèn)KIF5B蛋白對BNIP-2蛋白在細(xì)胞中的順行性運動起著致關(guān)重要的作用。然后，我們在成肌細(xì)胞分化過程中通過穩(wěn)定過量表達(dá)和siRNA干擾實驗發(fā)現(xiàn)蛋白KIF5B可以通過激活p38MAPK的活性進(jìn)而促進(jìn)成肌細(xì)胞分化，更重要的是我們研究中還發(fā)現(xiàn)