芽胞桿菌發(fā)酵液中抗菌脂肽的定量檢測方法及應(yīng)用.pdf

1、抗菌肽(Antirnierobial Peptides)是生物體內(nèi)經(jīng)誘導(dǎo)產(chǎn)生的生物界中廣泛存在的一類生物活性小肽，是兩性分子，常帶正電荷。根據(jù)來源不同，可分為動物體來源、植物體來源和微生物來源。抗菌脂肽是芽孢桿菌屬產(chǎn)生的微生物來源的抗菌肽，具有抗細(xì)菌、真菌、病毒和支原體的功能，在抗菌的同時又不破壞動物體內(nèi)的正常細(xì)胞，對人體安全，在生物醫(yī)藥方面具有重要的應(yīng)用價值。此外，脂肽作為一種生物表面活性劑在石油工業(yè)、食品、化妝品和農(nóng)業(yè)上有著廣泛的應(yīng)

2、用價值。本文著重研究了抗菌脂肽的高效液相色譜定量檢測方法，為抗菌脂肽的應(yīng)用奠定基礎(chǔ)。 本研究包括以下四方面內(nèi)容： 1.用管碟法建立了青霉素效價的標(biāo)準(zhǔn)曲線Y=0.0057x+2.6048，相關(guān)系數(shù)達(dá)到0.9955。重復(fù)3次制作標(biāo)準(zhǔn)曲線，曲線間的相對標(biāo)準(zhǔn)偏差小于4％。以此標(biāo)準(zhǔn)曲線測定得1g抗菌脂肽粗樣效價達(dá)到0.93×106 IU。 2.建立了一種以高效液相色譜測定發(fā)酵液中表面活性素(surfactin)含量的新方法

3、。采用COSMOSIL5C18-AR-II(4.6×250mm)色譜柱，以乙腈(含0.1％三氟乙酸)和水(含0.1％三氟乙酸)為流動相，流速0.84mL/min梯度洗脫，210nm紫外檢測，在20min內(nèi)檢測到surfactin。結(jié)果表明，運用本方法在1～100mg/L范圍內(nèi)surfactin濃度與積分面積之間具有良好的相關(guān)性(r=0.9998)，精密度為1.5％，檢出限為1mg/L，回收率達(dá)到96.59％。 3.自制了芬薺素(

4、fengycin)相對純品，并且建立了一種以高效液相色譜測定發(fā)酵液中fengycin含量的新方法。采用COSMOSIL5C18-MS-II(4.6×250mm)色譜柱，以乙腈(含0.1％三氟乙酸)和水(含0.1％三氟乙酸)為流動相，流速0.8mL/min梯度洗脫，230nm紫外檢測，在30min內(nèi)檢測到fengycin。結(jié)果表明，運用本方法在5～300mg/L范圍內(nèi)fcngycin濃度與積分面積之間具良好的相關(guān)性(r=0.9921)，精