8-羥基脫氧鳥嘌呤的選擇性化學(xué)修飾及其納米孔單分子檢測(cè).pdf

1、8-羥基脫氧鳥嘌呤（8-oxoG，OG）是由活性氧引發(fā)的最常見的DNA氧化損傷之一，因其體內(nèi)生成量相對(duì)較高、存在普遍、穩(wěn)定、能用靈敏度較高的分析方法檢測(cè)等特點(diǎn)，被視為DNA氧化損傷的生物標(biāo)志物。研究發(fā)現(xiàn)，人體中OG含量的升高會(huì)誘發(fā)基因突變和提高致癌的風(fēng)險(xiǎn)，因此，OG含量的檢測(cè)對(duì)于疾病的早期檢測(cè)和監(jiān)控有著重要的意義。
　　本論文擬將化學(xué)修飾方法與納米孔單分子檢測(cè)技術(shù)結(jié)合，使用化學(xué)修飾方法，在單鏈DNA中的OG位點(diǎn)修飾上主客體復(fù)合物，

2、繼而利用納米孔單分子技術(shù)，
　　記錄修飾雜化體穿越α-溶血毒素納米孔的電信號(hào)，通過特征信號(hào)的類型和信號(hào)頻率，定性和定量檢測(cè)DNA氧化損傷。
　　論文主要內(nèi)容如下：
　?。?）篩選最優(yōu)修飾路線。以高選擇性、高修飾率和高度特征信號(hào)為準(zhǔn)則，確定最終修飾路線。修飾路線分兩步完成：首先OG在Na2IrCl6催化下與1,12-二氨基十二烷反應(yīng)，然后與金剛烷衍生物Ad-C3-NHS發(fā)生酰胺反應(yīng)，兩步反應(yīng)均表現(xiàn)較高的修飾率，修飾產(chǎn)物與

3、葫蘆脲[7]共孵育后形成雜化體DNA-Ad?CB[7]，利用納米孔單分子技術(shù)進(jìn)行檢測(cè)。
　　（2）納米孔單分子實(shí)驗(yàn)得到的特征信號(hào)主要有兩部分組成：電流阻滯接近100％、長(zhǎng)阻滯時(shí)間的Level1和電流來回振蕩的Level2-2’，部分信號(hào)還有Level M。該特征信號(hào)的產(chǎn)生與α-溶血毒素蛋白的三個(gè)氨基酸有關(guān)。
　?。?）定性和定量檢測(cè)OG。通過與普通堿基A、T、G、C的對(duì)照組實(shí)驗(yàn)，發(fā)現(xiàn)只有OG發(fā)生了化學(xué)反應(yīng)，而且與修飾后使用納

4、米孔單分子技術(shù)檢測(cè)到的特征信號(hào)形成對(duì)應(yīng)關(guān)系，因此該方法可用于OG的定性檢測(cè)。使用不同濃度的標(biāo)準(zhǔn)樣本建立濃度與特征信號(hào)頻率的標(biāo)準(zhǔn)曲線，發(fā)現(xiàn)模擬實(shí)際樣品的信號(hào)頻率與之吻合度良好。我們首次使用納米孔單通道技術(shù)得到DNA氧化損傷的定量信息，可檢測(cè)的OG最低含量為5%。
　　（4）研究升溫對(duì)特征信號(hào)的影響。DNA鏈長(zhǎng)會(huì)增加Level1的阻滯時(shí)間，通過升溫的手段縮短Level1的阻滯時(shí)間，完成長(zhǎng)鏈DNA的OG氧化水平的檢測(cè)，并嘗試使用升溫對(duì)D