多糖類物質(zhì)的離子色譜檢測技術(shù)研究.pdf

1、離子色譜(IC)是高效液相色譜(HPIC)的一種，是分析陰離子和陽離子的一種液相色譜方法。對難以用其他儀器和方法分析的常見陰離子、陽離子、有機酸和有機胺類等組分的分析，離子色譜法具有選擇性好，靈敏度高，快速，簡便，并可同時測定多組分等的突出優(yōu)點。基于上述優(yōu)點，離子色譜法自1975年問世以來發(fā)展迅速，已經(jīng)在環(huán)境監(jiān)測、電力、半導(dǎo)體工業(yè)、食品、石油化工、醫(yī)療衛(wèi)生和生化等領(lǐng)域得到廣泛應(yīng)用，已有數(shù)十項成為有關(guān)權(quán)威機構(gòu)的標(biāo)準(zhǔn)方法。鑒于糖類化合物分子

2、具有電化學(xué)活性及在強堿溶液中呈離子化狀態(tài)，Roxklin等于1983年首先報道了用陰離子交換色譜柱分離，脈沖安培檢測器測定糖的新方法(簡稱HPAEC)[1]。用離子色譜法檢測糖類，尋求操作簡單，結(jié)果準(zhǔn)確的檢測體系，值得每一位分析化學(xué)學(xué)者進行深入研究。 本文包括兩個部分。第一部分是文獻綜述，這部分結(jié)合多糖的利用價值及提取方法，評述了近十年離子色譜檢測技術(shù)的發(fā)展以及其它相關(guān)領(lǐng)域在多糖類物質(zhì)檢測中的研究和應(yīng)用。第二部分是研究報告。首先

3、研究了綠茶中茶葉多糖的最佳提取方法和離子色譜檢測茶葉多糖中的2種單糖的技術(shù)，在建立了高效，便捷的分析方法的同時選擇了最佳的提取條件。利用溫水浸提綠茶茶葉，超聲輔助乙酸水解綠茶粗多糖，以METROSEPCARB1(150×4.0mm)陰離子交換柱為分離柱，以6.0mmol/L NaOH溶液為洗脫液，在32℃的條件下對綠茶粗多糖水解液進行檢測，實現(xiàn)了對綠茶粗多糖中的葡萄糖和甘露糖兩種單糖的完全分離和定量檢測。在此研究基礎(chǔ)上，對其他不同種類茶

4、葉多糖進行了分析研究，進一步優(yōu)化實驗條件，由對單純兩種單糖的分析拓展到同時分析檢測四種單糖，取得了良好的試驗效果，并且打破了多種單糖需要進行梯度淋洗才可實現(xiàn)分離的復(fù)雜方法，實現(xiàn)了固定濃度淋洗液直接分離多種單糖的高效方法。基于此，將該法的應(yīng)用延伸到真菌類和中藥領(lǐng)域，分別檢測了香菇多糖和山藥多糖，取得了良好的實驗效果；從而進一步驗證了該方法的應(yīng)用價值。但在以上研究過程中，存在著對多糖水解液果糖檢測方面的不足，突出表現(xiàn)為靈敏度低、分析時間過長

5、等缺點。為了完善檢測方法，繼續(xù)優(yōu)化實驗條件，對果糖的檢測方法進行改進，建立快速、高效檢測多糖中的果糖的離子色譜檢測方法，實驗取得了很好的效果，得到了高的靈敏度和準(zhǔn)確度，以及低的檢測限。 一．綠茶中茶多糖的提取與離子色譜檢測方法研究 本文在不同浸提條件下提取綠茶粗多糖的基礎(chǔ)上，建立了用高效陰離子交換分離一脈沖安培檢測(HPAE—PAD)，在32℃的條件下分離測定綠茶茶葉多糖中的葡萄糖和甘露糖2種單糖的分析方法。以METRO

6、SEP CARB1(150×4.0mm)陰離子交換柱為分離柱，6.0 mmol/L NaOH溶液為淋洗液，淋洗液流速為1.0mL/min，總分析時間為35min。在優(yōu)化的分離條件下，葡萄糖和甘露糖的檢出限分別為0.125mg/L和2.0mg/L(進樣體積20μL，峰高定量)。用20 mg/L葡萄糖和甘露糖的混標(biāo)溶液連續(xù)7次進樣，兩種單糖峰高的相對標(biāo)準(zhǔn)偏差分別為5.79％和14.15％，保留時間的相對標(biāo)準(zhǔn)偏差分別為2.08％和2.19％。

7、樣品測定的回收率為94.9％-97.5％。用所建立的方法快速、有效分離了綠茶茶葉多糖中的葡萄糖和甘露糖，同時確定了茶葉多糖的最佳提取條件。 二．離子色譜法測定各種茶葉中的茶多糖研究 建立了用高效陰離子交換分離—脈沖安培檢測分離測定不同種茶葉多糖中的半乳糖、葡萄糖、甘露糖和果糖的分析方法。以METROSEP CARB1(150x4.0mm)陰離子交換柱為分離柱，以6.0mmol/L—NaOH溶液為淋洗液在32℃的條件下將4

8、種單糖從分離柱上洗脫，淋洗液流速為1.0mL/min，總分析時間為45min。在優(yōu)化的分離條件下4種單糖的檢出限為0.125mg/L～2.0mg/L(進樣體積20μL，峰高定量)。用20mg/L的半乳糖、葡萄糖、甘露糖和30mg/L的果糖混標(biāo)溶液連續(xù)7次進樣，峰高的相對標(biāo)準(zhǔn)偏差為5.82％～14.19％，保留時間的相對標(biāo)準(zhǔn)偏差為2.03％～2.26％。樣品測定的回收率為91.8％～99.3％。用所建立的方法快速、有效分析了4種常見茶葉多

9、糖，得到了滿意的檢測結(jié)果。 三．香菇多糖和山藥多糖的離子色譜檢測方法研究 建立了離子色譜法分離測定香菇多糖和山藥多糖的分析方法。以METROSEP CARB1(150×4.0mm)陰離子交換柱為分離柱，脈沖安培檢測，以7.0mmol/L NaOH溶液為淋洗液，淋洗液流速1.0mL/min，總分析時間為35min。在優(yōu)化的分析條件下，3種單糖的檢測限分別為半乳糖0.125mg/L，葡萄糖0.5mg/L，甘露糖1.0mg/L

10、(進樣體積20μL，峰高定量)，用30mg/L的標(biāo)準(zhǔn)樣品混合溶液連續(xù)進樣6次，峰高的相對標(biāo)準(zhǔn)偏差為1.79％～3.52％，保留時間的RSD為3.07％～3.29％，樣品測定的回收率為96.3％～99.5％。運用上述方法分離檢測香菇多糖和山藥多糖，得到了良好的分離效果和較高的檢測靈敏度，分析結(jié)果令人滿意。 四．離子色譜法檢測多糖水解液中果糖的研究 建立了陰離子交換分離—脈沖安培檢測分析檢測多糖水解液中的果糖的離子色譜方法，

11、并且分別討論了峰高和峰面積兩種不同分析定量方法的準(zhǔn)確度。用METROSEP CARB1(150×4.0mm)陰離子交換柱為分離柱，以100mmol/L NaOH溶液為淋洗液，流速為1.0mL/min，總分析時間為13min。在優(yōu)化的色譜條件下，果糖的最低檢出限為0.4mg/L(進樣體積20μL)。用10mg/L果糖標(biāo)準(zhǔn)溶液連續(xù)進樣7次，峰高的相對標(biāo)準(zhǔn)偏差為1.64％。峰面積的RSD為3.43％，保留時間的RSD為0.36％。樣品的加標(biāo)回