基于硅殼熒光納米顆粒的免疫雙標(biāo)成像法應(yīng)用胃癌細(xì)胞檢測研究.pdf

1、胃癌是威脅人類健康最常見的惡性腫瘤之一，而從原位病灶逃脫的胃癌細(xì)胞進(jìn)而轉(zhuǎn)移至其他器官是導(dǎo)致術(shù)后胃癌患者死亡的重要原因之一，因此，胃癌細(xì)胞的檢測和成像對于有效預(yù)防和治療胃癌具有非常重要的臨床意義。本論文基于包被聯(lián)釕吡啶配合物(RuBpy)的硅殼熒光納米顆粒(RFSiNPs)和包被異硫氰酸熒光素(FITC)的硅殼熒光納米顆粒(FFSiNPs)發(fā)展的免疫熒光雙標(biāo)激光共聚焦顯微成像法，圍繞MGC-803胃癌細(xì)胞的識別與檢測，開展了以下三個方面工

2、作： 1、基于硅殼熒光納米顆粒免疫熒光雙標(biāo)成像法對MGC-803胃癌細(xì)胞的識別基于傳統(tǒng)免疫標(biāo)記技術(shù)的基本原理，聯(lián)合利用修飾了抗CEA抗體的FFSiNPs和修飾了抗CK19抗體的RFSiNPs，對胃癌細(xì)胞相關(guān)抗原CEA和CK19進(jìn)行同步檢測，并以此發(fā)展了一種硅殼熒光納米顆粒免疫熒光雙標(biāo)激光共聚焦顯微成像法應(yīng)用于MGC-803胃癌細(xì)胞的識別與成像。實驗結(jié)果表明，基于抗體修飾的FSiNPs的免疫熒光雙標(biāo)法具有優(yōu)越的選擇性，能夠利用不同

3、細(xì)胞抗原表達(dá)上的特異性，成功地實現(xiàn)對不同種類腫瘤細(xì)胞的精確區(qū)分，大大提高對靶腫瘤細(xì)胞的檢測準(zhǔn)確性。此外，通過與熒光染料標(biāo)記方法的光穩(wěn)定性進(jìn)行比較，基于抗體修飾的FSiNPs的免疫熒光雙標(biāo)法進(jìn)一步展示出在抗光漂白性能上的優(yōu)勢。 2、基于硅殼熒光納米顆粒的外周血以及活體胃癌細(xì)胞檢測研究為了考察基于抗體修飾的FSiNPs的免疫熒光雙標(biāo)法用于外周血中胃癌轉(zhuǎn)移細(xì)胞檢測的可行性，分別采用激光共聚焦顯微成像法和流式細(xì)胞術(shù)定性、定量地檢測了外周

4、血中MGC-803胃癌細(xì)胞，以及建立了MGC-803胃癌荷瘤裸鼠模型，采用基于硅殼熒光納米顆粒的激光共聚焦免疫雙標(biāo)法對裸鼠接種成瘤后通過原代組織塊培養(yǎng)獲得的胃癌細(xì)胞進(jìn)行了成像檢測，并進(jìn)一步將修飾抗CK19抗體的RFSiNPs導(dǎo)入荷瘤裸鼠體內(nèi)，以期發(fā)展一種可用于活體胃癌細(xì)胞檢測的成像技術(shù)。研究結(jié)果表明，該方法對于復(fù)雜生物體系具有良好的適應(yīng)性，能夠?qū)崿F(xiàn)對外周血中MGC-803胃癌細(xì)胞以及活體胃癌細(xì)胞的高特異性識別，有望被應(yīng)用于腫瘤的早期診斷

5、及癌細(xì)胞轉(zhuǎn)移等研究領(lǐng)域。同時，活體初步成像考察結(jié)果表明，經(jīng)抗體修飾的硅殼熒光納米顆粒能在腫瘤區(qū)域聚集，形成最佳成像效果，初步顯示了硅殼熒光納米顆粒進(jìn)一步應(yīng)用于活體成像研究的可行性。 3、小鼠腎細(xì)胞對熒光硅殼納米顆粒的吞噬研究在硅殼熒光納米顆粒具有活體成像潛力的基礎(chǔ)上，選取硅殼納米顆粒在生物體內(nèi)的排泄作為研究方向，利用硅殼熒光納米顆粒的熒光信號同步指示作用，研究了小鼠腎小球系膜細(xì)胞MC細(xì)胞和小鼠腎小管上皮細(xì)胞NRK細(xì)胞對硅殼熒光納