改良親和酶標(biāo)法檢測乳腺癌細(xì)胞er

1、<p>　　改良親和酶標(biāo)法檢測乳腺癌細(xì)胞ER</p><p>　　作者：陶秦渝　張盈華　張利朝　楊紅斌 </p><p>　　【關(guān)鍵詞】 親和酶標(biāo)法 </p><p>　　關(guān)鍵詞: 親和酶標(biāo)法;乳腺癌;雌激素受體;抗原修復(fù) </p><p><b>　　0 引言 </b></p><

2、;p>　　乳腺癌術(shù)后選擇何種治療方法，主要依據(jù)乳腺癌組織中雌激素受體（ER）的檢測決定的.ER陽性者選擇內(nèi)分泌治療，其有效率為50%～75%;ER陰性者，治療有效率只有8%～10%，一般采取其他治療方法.為了提高檢測ER親和酶標(biāo)法的靈敏度和準(zhǔn)確度，我們以經(jīng)典DCC法作參照，對親和酶標(biāo)法進(jìn)行改良，獲得了較好的結(jié)果. </p><p><b>　　1 材料和方法 </b></p>

3、;<p>　　1.1 材料 本院普外科經(jīng)臨床及病理確診、手術(shù)切除的乳腺癌患者標(biāo)本18例，立即取癌組織約1g送生化室作ER的生化測定（DCC法）［1］ ，同時(shí)取癌組織（≥0.5mm×0.5mm×0.3mm）1～2塊作石蠟包理.連續(xù)切片，片厚5μm. </p><p><b>　　1.2 方法 </b></p><p>　　1.2.1

4、 原實(shí)驗(yàn)方法 脫蠟至水（依次使用二甲苯，無水乙醇，950mL&#12539;L-1 乙醇，蒸餾水），10mL&#12539;L-1 ，H </p><p>　　2 O2 ，30℃，孵育30min，PBS洗滌3次，每次5min，50mL&#12539;L-1 山羊血清封閉30min，滴加E2 -HRP標(biāo)記抗體50μL.滴加標(biāo)記抗體后，將所有實(shí)驗(yàn)組切片放置濕盒，4℃冰箱過夜（放置時(shí)間不少于18

5、h），取出PBS洗滌后，DAB顯色10min，蘇木素復(fù)合染色，在顯微鏡下觀察結(jié)果. </p><p>　　1.2.2 改良實(shí)驗(yàn)法 脫蠟至水后，10mL&#12539;L-1 H2 O2 ，30℃孵育30min，PBS洗滌5min×3次，微波爐法進(jìn)行抗原修復(fù)（pH6.0檸檬酸鹽緩沖液，90～95℃10min，室溫冷卻15min），PBS洗滌3次，50mL&#12539;L-1 山羊血清孵育

6、30min，滴加E2 -HRP標(biāo)記抗體50μL.其他同前. </p><p>　　陽性病例的判斷:計(jì)數(shù)500個(gè)腫瘤細(xì)胞內(nèi)每100個(gè)細(xì)胞的陽性細(xì)胞數(shù)大于或等于30個(gè)為陽性病例. </p><p><b>　　2 結(jié)果 </b></p><p>　　2.1 原實(shí)驗(yàn)法與改良實(shí)驗(yàn)法比較 18例乳腺癌標(biāo)本中，原實(shí)驗(yàn)方法組ER陽性4例，陽性率20

7、%;改良實(shí)驗(yàn)法組ER陽性14例，陽性率80%.兩組之間有顯著差異（χ2 =7.2，P&lt;0.01）. </p><p>　　2.2 改良實(shí)驗(yàn)法與DCC法比較 18例乳腺癌標(biāo)本中，DCC法陽性（&gt;10pmol&#12539;g-1 ）病例12例，與改良實(shí)驗(yàn)法結(jié)果比較陽性一致率為100%;6例DCC法陰性（≤10pmol&#12539;g-1 ），與改良實(shí)驗(yàn)法結(jié)果比較陰性一

8、致率為67%，總符合率為80%. </p><p><b>　　3 討論 </b></p><p>　　乳腺為性激素的靶器官，其生長、發(fā)育和功能均依賴性激素的支持，因此乳腺癌的激素治療已經(jīng)成為手術(shù)切除癌腫后的主要輔助療法.ER的測定結(jié)果與乳腺癌的治療有關(guān)，很受臨慶醫(yī)生歡迎.ER的檢測方法大致有生化法（DCC法）、熒光法、組化法3種，前兩者需要專用儀器，價(jià)格昂貴，大

9、多數(shù)普通實(shí)驗(yàn)室無法開展，組化法簡便易行，價(jià)格低廉，應(yīng)用最為廣泛［2］ .其中親和酶標(biāo)法試劑制作簡單，不需免疫動(dòng)物，能避免在繁雜的制作過程中抗體滴度下降甚至失活而導(dǎo)致的假陰性結(jié)果;而原親和酶標(biāo)實(shí)驗(yàn)方法因固定劑影響，使得在石蠟標(biāo)本中檢測ER的陽性率大大降低并且癌細(xì)胞陽性反應(yīng)減弱、消失或呈彌漫均一性深黃色，背景深度黃染，無法判斷標(biāo)記結(jié)果;而在改良實(shí)驗(yàn)法中應(yīng)用了免疫組化法中較新的抗原修復(fù)步驟，使ER陽性檢測率高達(dá)80%，且與DCC法符合率為80

10、%.因此應(yīng)用改良親和酶標(biāo)法檢測乳腺癌中ER，準(zhǔn)確度與生化法符合率較高，方法不象生化法繁雜，能夠?yàn)榕R床患者的診治提供可靠依據(jù)，易于在一般實(shí)驗(yàn)室開展，值得推廣應(yīng)用. </p><p><b>　　參考文獻(xiàn): </b></p><p>　?。?］劉尚廉，沈鎮(zhèn)宙，唐錦霞.乳腺癌雌激素受體的酶聯(lián)雌二醇組化標(biāo)記法［J］.腫瘤，1986;6（5）:104-106. </p&g