分子印跡聚合物的應(yīng)用--作為人工抗體和制備識(shí)別腫瘤細(xì)胞特征跨膜蛋白的納米微球.pdf

1、本博士論文以分子印跡技術(shù)為基礎(chǔ),在我組前期引入了輔助識(shí)別聚合物鏈(Assistant recognition polymer chains,ARPCs)探討印跡技術(shù)的基礎(chǔ)上進(jìn)一步研究。本論文共分兩部分,第一部分用ARPC合成的蛋白質(zhì)印跡聚合物(Protein-imprinted polymer,PIP)作為人工抗體來(lái)純化天然高分子量微量蛋白、同時(shí)PIP還可以用作人工抗體研究蛋白質(zhì)之間的相互作用；第二部分探討了利用分子印跡制備可以識(shí)別腫瘤

2、表面細(xì)胞的特征跨膜蛋白的納米微球。
　　 在論文的第一部分工作中,我們以克隆的(immunoglobulin binding protein,BiP)BiP蛋白為模板、用帶有芳香性基團(tuán)吡啶的ARPC來(lái)制備PIP。BiP是內(nèi)質(zhì)網(wǎng)中的一種高分子量微量蛋白,在內(nèi)質(zhì)網(wǎng)(Endoplasmic Reticulum,ER)中含量很低,ER提取液中的BiP只有0.0590％；而PIP的特異性吸附ER提取液后,BiP的含量可達(dá)2.620％,富集

3、了45倍。這是我組首次利用印跡聚合物的方法富集“高分子量”的天然微量蛋白。我組曾利用免疫共沉淀法證明了BiP和FKBP23在ER中特異性結(jié)合,該結(jié)合同時(shí)還受鈣離子濃度的調(diào)節(jié)。在本課題中,我們利用PIP來(lái)替代免疫共沉淀法研究BiP和FKBP23之間的相互作用,其結(jié)果與免疫共沉淀的結(jié)果一致,在鈣離子濃度較高時(shí)(>3mM)二者不結(jié)合,而在鈣離子濃度較低時(shí)(<2mM)二者特異性結(jié)合。
　　 在論文的第二部分工作中,我們以腫瘤(eryth

4、roblastosis B2,ErbB-2)表面的一段特異性多肽為研究對(duì)象,研究利用帶有印跡功能的納米微球。ErbB2所屬的表皮生長(zhǎng)因子受體家族具有廣泛的生物活性,其基因的活化表達(dá)和多種癌癥相關(guān)。首先,利用硅烷試劑把ErbB2膜外一段特異性多肽鍵合到玻璃板上。然后,使用不同的方法在沒(méi)有多肽的條件下合成了殼聚糖納米微球,微球的尺度在50nm-150nm之間。最后,在載體玻璃板上多肽存在的情況下,在多肽的末端輔以ARPC合成了聚殼聚糖-丙烯