海洋類苯甘氨酸HDAC抑制劑的設計、合成、生物活性評價.pdf

1、目的：
　　運用計算機輔助設計方法，針對已提取出的天然產(chǎn)物，進行必要的結構修飾與改造，使化合物靶向作用于組蛋白去乙?；?HDAC),以得到新型靶向性的抗腫瘤HDAC抑制劑。
　　方法：
　　運用Sybyl、DS2.5軟件構建HDAC3分子模型，運用Gold軟件對接設計的化合物與HDAC受體，形成可視化的對接構象，通過Chimara軟件作圖，分析化合物與受體大分子的對接模型，指導設計HD系列化合物的設計；查閱文獻，尋找

2、可行的合成線路;運用Boc保護、酰胺縮合、脫Boc保護、肟化反應等技術合成所設計的化合物；運用薄層色譜法初步確定化合物的純度以及反應程度，用核磁共振氫譜最終確認化合物結構；運用HDAC酶試劑盒檢測待測化合物對HDAC酶的抑制能力，并結合化合物對接結果，討論苯甘氨酸系列化合物的構效關系，發(fā)現(xiàn)與靶點作用的關鍵結構以及氨基酸殘基，指導下一輪的化合物設計；運用CCK8法檢測各待測化合物在2.5μM濃度下對腫瘤細胞K562、U937、MDA-MB

3、-231、PC3的抑制能力，初步判斷各化合物的體外抗增殖能力；選出活性較好的化合物，檢測其對腫瘤細胞PC3、U937、MDA-MB-231、HL60、K562、SK-OV-3的IC50值。
　　結果：
　　計算機模擬結果表明，HD系列化合物的脂肪鏈linker可進入HDAC口袋，羥肟酸與HDAC3口袋底部的鋅離子特異性螯合，苯甘氨酸的Cap結構與HDAC酶表面產(chǎn)生疏水作用；薄層色譜顯示所有HD化合物跑板后在紫外燈下呈現(xiàn)單個濃

4、點，存在拖尾現(xiàn)象，加入一滴冰醋酸后拖尾消失，遇三氯化鐵溶液變?yōu)樽霞t色，表明所合成終產(chǎn)物均為純凈的異羥肟酸衍生物；核磁共振氫譜結果表明，所有化合物結構正確，苯甘氨酸苯環(huán)的五個氫信號約在δ7.2-7.5，而苯甘氨酸的H信號位于δ5.70左右，形成Double峰，羥肟酸上的兩個氫出現(xiàn)在δ8.8、δ10.2左右，均為Single峰，linker側鏈的三個-CH2分別在δ1.3、δ1.8、δ2.8左右，形成多重峰；酶活結果表明，含有炔烴側鏈的先導

5、化合物HD1對HDAC酶的抑制能力較海洋類提取物O1強，但弱于其他HD系列化合物(IC50=13μM)；該系列化合物中HD9、HD10的活性最高，IC50分別為76、108 nM,活性好于陽性對照SAHA(IC50=146 nM);引入磺酰Cap結構后化合物的酶結合能力有所下降，說明該結構降低了受體-配體間的作用，而含有叔丁基苯磺酰胺的HD20活性較強，IC50為0.17μM，在苯磺酰胺結構苯環(huán)上的對位溴取代可增強化合物的活性，其次為氯

6、取代、硝基取代、氟取代；CCK8結果表明，HD系列化合物均可在低濃度(μM)抑制各種腫瘤細胞的增殖，其抗體外增殖能力與待測化合物的酶抑制能力呈正相關；并且該系列化合物對白血病細胞的抑制能力強于實體瘤細胞，該結論與國內外文獻報道一致；HD9、HD10的活性最高，HD9對U937、K562、HL60、MDA-MB-231、PC-3、SK-OV-3的IC50值分別為0.51、0.83、0.76、2.94、3.66、3.17μM，均好于陽性對照