保健食品中黃酮類功效成分的LC-MS檢測(cè)技術(shù)研究.pdf

1、目的:
　　采用液質(zhì)聯(lián)用技術(shù)對(duì)保健食品中黃酮類功效成分進(jìn)行快速篩選，建立準(zhǔn)確可靠的定性定量方法，為保健食品的質(zhì)量標(biāo)準(zhǔn)研究提供一定的研究思路和方法示范。所建立的方法可應(yīng)用于生產(chǎn)企業(yè)，也可應(yīng)用于檢測(cè)、監(jiān)管機(jī)構(gòu)，從而更好地對(duì)保健食品進(jìn)行質(zhì)量控制和監(jiān)管，打擊假冒偽劣商品，規(guī)范保健食品市場(chǎng)。
　　方法:
　　對(duì)13個(gè)含銀杏葉保健食品、13個(gè)含大豆異黃酮保健食品、葛根枳棋軟膠囊和蜂膠液進(jìn)行示范性研究。
　　1、保健食品樣品收

2、集。從市面上收集具有代表性的不同批號(hào)、不同廠家、不同包裝、不同劑型同一主要原料的保健食品，按照原標(biāo)準(zhǔn)《保健食品檢驗(yàn)與評(píng)價(jià)技術(shù)規(guī)范》（2003年版）收載項(xiàng)下的質(zhì)量評(píng)價(jià)方法進(jìn)行檢測(cè)，判斷是否為合格產(chǎn)品。
　　2、采用超高效液相色譜-四極桿-飛行時(shí)間質(zhì)譜法快速篩查保健食品中多種黃酮類化合物。分別對(duì)色譜柱、流動(dòng)相體系、數(shù)據(jù)采集模式、離子源參數(shù)和碰撞能量等參數(shù)進(jìn)行優(yōu)化，并通過(guò)與對(duì)照品對(duì)比、數(shù)據(jù)庫(kù)匹配及文獻(xiàn)數(shù)據(jù)分析，明確保健食品中所含的黃酮類

3、成分。
　　3、采用超高效液相色譜-三重四極桿質(zhì)譜法建立同時(shí)測(cè)定保健食品中多種黃酮類化合物的定量分析方法。采用負(fù)離子電噴霧選擇反應(yīng)監(jiān)測(cè)（SRM）模式，分別對(duì)管鏡補(bǔ)償電壓、碰撞能量和定量離子對(duì)等參數(shù)進(jìn)行優(yōu)化，同時(shí)進(jìn)行檢測(cè)限、定量限、線性范圍、精密度、重復(fù)性、穩(wěn)定性和加樣回收率等方法學(xué)考察。
　　4、以相關(guān)功效成分及其含量為指標(biāo)，對(duì)不同來(lái)源含銀杏葉保健食品和含大豆異黃酮保健食品的差異進(jìn)行比較研究。
　　5、對(duì)所檢測(cè)的每個(gè)黃

4、酮類化合物的裂解途徑進(jìn)行解析，總結(jié)黃酮類化合物電噴霧質(zhì)譜(ESI-MSn)特征裂解規(guī)律，為建立黃酮類成分目標(biāo)物的精確分子量、二級(jí)MS2質(zhì)譜圖的數(shù)據(jù)庫(kù)及一定色譜條件下保留時(shí)間的數(shù)據(jù)庫(kù)奠定基礎(chǔ)。
　　結(jié)果:
　　1、參照原質(zhì)量標(biāo)準(zhǔn)方法進(jìn)行檢測(cè)，市場(chǎng)上部分保健食品的功效成分含量未達(dá)到企業(yè)標(biāo)準(zhǔn)中功效成分的標(biāo)示量。
　　2、采用超高效液相色譜-四極桿-飛行時(shí)間質(zhì)譜法快速篩查了13個(gè)含銀杏葉保健食品中16種黃酮類化合物、13個(gè)含大

5、豆異黃酮保健食品中6種異黃酮類化合物、葛根枳棋軟膠囊中20種黃酮類化合物及蜂膠液中16種黃酮類化合物。
　　3、采用超高效液相色譜-三重四極桿質(zhì)譜聯(lián)用法同時(shí)檢測(cè)含大豆異黃酮保健食品中6種異黃酮化合物的含量:在4分鐘內(nèi)完成了對(duì)大豆苷、黃豆黃苷、染料木苷、大豆苷元、黃豆黃素和染料木素6種異黃酮化合物的定量檢測(cè);并將結(jié)果與采用普通高效液相色譜法測(cè)得的數(shù)據(jù)進(jìn)行比較，結(jié)果表明，本方法快速、簡(jiǎn)便可靠、專一性好。
　　4、比較了不同來(lái)源保

6、健食品成分與含量的差異:同一產(chǎn)品，由不同經(jīng)銷商售賣時(shí)更換包裝，價(jià)格偏差幅度大，產(chǎn)品質(zhì)量無(wú)明顯差異;不同批號(hào)的同一產(chǎn)品，存大較大的質(zhì)量差異，這可能與生產(chǎn)企業(yè)內(nèi)部質(zhì)量控制力度不夠有關(guān);含同一主要原料的不同保健食品，所含功效成分存在較大差異，這可能與原料采集、制備工藝、儲(chǔ)存條件等諸多因素有關(guān)。
　　5、黃酮類化合物裂解規(guī)律:黃酮苷元的碎片離子裂解主要發(fā)生在C環(huán)，產(chǎn)生系列C環(huán)裂解的i,jA-與i,jB-特征離子，包括Retro Diels

7、-Alder(RDA)裂解;同時(shí)伴隨著丟失CH3、CO、CO2、 H2O、C3O2等中性分子。黃酮O-糖苷的質(zhì)譜裂解主要為糖苷鍵的斷裂、糖糖鍵的斷裂和糖環(huán)的交叉環(huán)切除裂解。黃酮C-糖苷負(fù)離子模式下的質(zhì)譜裂解與黃酮O-糖苷的裂解差別較大，黃酮C-糖苷多以糖環(huán)的交叉環(huán)切除裂解為主，幾乎不產(chǎn)生苷元離子，同時(shí)也伴隨著丟失中性分子。負(fù)離子模式下，己糖裂解產(chǎn)生[M-H-120]-及[M-H-90]-碎片離子，戊糖裂解產(chǎn)生[M-H-60]-及[M-H

8、-90]-碎片離子。
　　結(jié)論:
　　本研究采用液質(zhì)聯(lián)用技術(shù)對(duì)保健食品中黃酮類功效成分進(jìn)行了快速篩選，建立了準(zhǔn)確可靠的定性定量方法，明確了相關(guān)保健食品中黃酮類成分;通過(guò)比較市面上同一主要原料不同來(lái)源的保健食品中黃酮類功效成分的差異，表明了保健食品存在參差不齊的現(xiàn)象和質(zhì)量標(biāo)準(zhǔn)不統(tǒng)一的問(wèn)題。提示應(yīng)加強(qiáng)保健食品的質(zhì)量監(jiān)管，加大保健食品功效成分的基礎(chǔ)性研究工作，努力提高檢測(cè)分析水平，為規(guī)范保健食品市場(chǎng)提供技術(shù)支持。本課題所建立的方法