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文檔簡介
1、初步研究色氨酸作為共振能量轉(zhuǎn)移(FRET)的供體,吖啶衍生物作為熒光配體中的接受體,通過非輻射的共振能量轉(zhuǎn)移造成供體熒光猝滅和接受體熒光發(fā)射,從而進行均相親和分析的可能性;此技術(shù)可用于非競爭結(jié)合檢測蛋白含量、競爭結(jié)合測定配體含量或配體親和力。
用二苯胺、乙酸等以Bemthsen法合成系列9-甲基吖啶衍生物,但是這類衍生物穩(wěn)定性很低。用鄰氯苯甲酸、苯胺等通過取代、縮合合成了吖啶、吖啶酮、9-氯吖啶等一系列吖啶衍生物,通過與其
2、他基團的連接獲得蛋白的熒光配體作為FRET探針;其中9-氨基吖啶衍生物和吖啶-9-羧酸衍生物具有較好穩(wěn)定性。
用9-氨基吖啶和月桂酸生成酰胺,嘗試作為白蛋白的FRET探針,其對人血清白蛋白中色氨酸的熒光有一定猝滅作用。用吖啶-9-羧酸和生物素乙二胺生成酰胺作為鏈親和素的FRET探針,能夠有效猝滅鏈親和素熒光;但吖啶熒光對微環(huán)境敏感,其在疏水環(huán)境的量子產(chǎn)率顯著降低,與蛋白形成復(fù)合物后探針中吖啶特征發(fā)射無明顯增強。據(jù)此FRET
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