白蛋白共振能量轉(zhuǎn)移探針的設(shè)計、合成及表征.pdf

1、以蛋白質(zhì)中色氨酸或酪氨酸殘基為熒光共振能量轉(zhuǎn)移供體,熒光探針作為FRET接受體可進(jìn)行均相親和分析。本文建立構(gòu)效關(guān)系模型預(yù)測白蛋白FRET探針的親和力,篩選有高親和力的FRET探針,合成并對其表征,考察其用于測定白蛋白含量的可行性。
　　 FRET探針可包含熒光團和蛋白特異性配體兩部分。據(jù)蛋白質(zhì)中色氨酸殘基的熒光性質(zhì),符合要求的FRET探針中可用熒光團有甲萘胺、7-氨基香豆素及丹磺酰胺;考慮穩(wěn)定性、溶劑效應(yīng)及其激發(fā)光譜與色氨酸發(fā)射

2、光譜的重疊度,甲萘胺更理想。脂肪酸可與白蛋白結(jié)合,可用做白蛋白的FRET探針中的配體部分。
　　 預(yù)測FRET配體與白蛋白的親和力的模型中HAS配體解離常數(shù)-7.63～-2.49,用MM2候選FRET探針的幾何構(gòu)型,Chemoffice計算其ClogP、DIPY、G、HF、H及Vc等20個常見性質(zhì)的定量描述符,并采用逐步回歸法進(jìn)行多重線性回歸篩選自變量,得到預(yù)測能力最好的模型,模型中按斜率絕對值排序為ClogP＞DIPY＞G＞H

3、F＞H＞Vc。
　　 用絲氨酸、乙醇胺與乙二胺分別將萘胺和不同脂肪酸鏈鏈接,用上述優(yōu)選模型預(yù)測出親和力最高的化合物。脂肪酸鏈的增長,化合物的預(yù)測親和力越高;用絲氨酸連接的化合物比乙醇胺和乙二胺連接化合物的親和力更好。本文用三種連接方式,分別用丁酸、辛酸和月桂酸三種脂肪酸為白蛋白配體合成FRET探針,并對其進(jìn)行表征。
　　 只有N-(萘替甘酰)-O-辛酰絲氨酸(NAAC-SER-CA)能與HAS或BSA發(fā)生有效的熒光共振能

4、量轉(zhuǎn)移。N-萘替甘酰絲氨酸(NAAC-SER)和N-萘替甘酰-O-辛酰乙醇胺(NAAC-EA-CA)均能能淬滅白蛋白的熒光,但是在其特有的發(fā)射波長下熒光強度無敏化增強。說明脂肪酸鏈對FRET探針必不可少。與NAAC-SER-CA相比,丁二酸單酰萘替乙二胺(NEDA-Su)及丁二酸單酰萘替甘酰乙二胺(NAAC-EDA-Su)與白蛋白形成復(fù)合物無明顯的熒光變化,表明羧基與熒光團的距離要足夠近。NAAC-SER-CA與N-萘替甘酰O-月桂酰絲