復(fù)雜蛋白樣品的芯片自由流等電聚焦電泳微量分離制備.pdf

1、蛋白質(zhì)組學(xué)研究是基因組學(xué)研究的重要補(bǔ)充和延伸，蛋白質(zhì)組與基因組研究相結(jié)合將更有助于闡明細(xì)胞整體功能。血漿蛋白質(zhì)組是人類蛋白質(zhì)組計(jì)劃的核心內(nèi)容，越來越受到人們的關(guān)注。血漿中蘊(yùn)含著生命機(jī)體的所有信息，只有徹底了解血漿中的蛋白質(zhì)種類，才能利用血漿來預(yù)測人體對疾病的易感度并監(jiān)控疾病的進(jìn)程，達(dá)到對疾病進(jìn)行早診斷早治療的目的。目前，血漿蛋白質(zhì)組學(xué)以二維電泳-質(zhì)譜（2-DE-MS）為核心分離鑒定技術(shù)。但血漿蛋白的復(fù)雜性和高豐度蛋白的存在使血漿蛋白質(zhì)組

2、學(xué)的研究受到很大限制。因此，有必要對樣品進(jìn)行預(yù)處理以提高2-DE對低豐度蛋白的檢測靈敏度和質(zhì)譜鑒定的可靠性。本文特別針對芯片自由流電泳等電聚焦方法去除血漿中高豐度蛋白進(jìn)行了研究。
　　本文在原有實(shí)驗(yàn)的基礎(chǔ)上對芯片自由流電泳系統(tǒng)進(jìn)行了改進(jìn)，制作了一種凝膠隔離型微流控自由流電泳芯片，用3M雙面膠封合芯片，同時(shí)搭建分離通道，簡單易行。瓊脂糖凝膠可有效將分離室和電極池隔開，避免了電解產(chǎn)物對分析過程的干擾。使用載體兩性電解質(zhì)在分離室內(nèi)建立了

3、線性的pH梯度，以熒光染料和酸堿指示劑為探針，用直接成像法對形成的pH梯度進(jìn)行了表征。
　　在等電聚焦電泳分離模式下，成功實(shí)現(xiàn)了牛血紅蛋白和細(xì)胞色素C兩種蛋白質(zhì)的聚焦分離。將該方法用于去除人血漿中的高豐度蛋白，并用SDS-PAGE凝膠電泳測定，結(jié)果表明該方法可有效去除血漿中的白蛋白，同時(shí)實(shí)現(xiàn)了血漿低豐度蛋白的濃縮富集。本文最后對在微流控芯片分離通道內(nèi)建立整體材料固定化pH梯度進(jìn)行了探索研究，原位聚合了具有通透性的整體材料，初步結(jié)果