基于微流控芯片的二維電泳分離及蛋白質(zhì)預(yù)富集研究.pdf

1、由于生物樣品的復(fù)雜性，對不同組分的分離是對樣品進一步分析的必須前提。
　　 在蛋白質(zhì)組學(xué)研究中尤其如此，迫切需要高效分離技術(shù)的鼎力支持。傳統(tǒng)的單一分離模式所能獲得的分辨率十分有限，因此將相關(guān)性低的不同分離模式聯(lián)用可以獲得更高的分辨率。
　　 本文自行搭建了一套基于微流控芯片的二維電泳分離系統(tǒng)，該系統(tǒng)對于熒光素樣品的濃度檢測限可達5×10-10M，3次連續(xù)進樣-分離所對應(yīng)的信號峰的RSD＜0.5％，具有良好的靈敏度和重現(xiàn)性

2、。通過在微流控芯片的進樣和分離切換上引入雙電動閥系統(tǒng)，采用MEKC和CZE 聯(lián)用的分離模式，通過對電泳條件的優(yōu)化，對20種標準氨基酸進行了定性和定量分析，這在文獻報道中尚屬首次。系統(tǒng)的線性范圍超過3個數(shù)量級，線性相關(guān)系數(shù)γ＞0.99，氨基酸樣品的檢測限在μM 量級。在此基礎(chǔ)上對市售的氨基酸口服液進行了分析，結(jié)果表明本文中自行構(gòu)建的系統(tǒng)定量結(jié)果可靠，可以用于食品、醫(yī)藥保健品等產(chǎn)品的氨基酸含量分析。以牛血清蛋白胰酶降解產(chǎn)物——即多肽混合物為

3、樣品進行芯片二維電泳分離，結(jié)果表明系統(tǒng)對牛血清蛋白胰酶降解產(chǎn)物的峰容量約為330，在二維電泳圖譜中可以辨認出22個樣品點跡，為蛋白質(zhì)組學(xué)研究中多肽樣品的分離分析提供了一種新思路。
　　 在蛋白質(zhì)組學(xué)研究中，由于蛋白質(zhì)含量的不均一性，某些極低表達量的蛋白質(zhì)難以檢測，需要行之有效的預(yù)富集方法對其處理以滿足檢測的需求。本文自行設(shè)計制作了兩種基于不同原理的蛋白質(zhì)富集芯片，在對富集條件進行優(yōu)化之后，以FITC標記的牛血清蛋白為樣品進行了芯