三種人參屬藥用植物熒光原位雜交技術(shù)及核型分析.pdf

1、人參(Panax ginseng C.A.Mey)、西洋參(P.quinquefolius L.)、三七(P.notoginseng(Burk.)F.H.chen)三種是人參屬代表性藥用植物，具有較高的藥用價(jià)值和經(jīng)濟(jì)價(jià)值，受到研究學(xué)者的高度重視。然而，目前有關(guān)三者的研究工作多集中在栽培、生理、藥理藥化等方面，而對其遺傳特性方面的研究相對較少，從而制約了一些分子生物技術(shù)在人參屬藥用植物中的應(yīng)用。本文以三種人參屬藥用植物不同分生組織為試材，

2、優(yōu)化了各物種材料的染色體制片技術(shù)，以PCR法篩選到的rDNA序列為探針，對三種人參屬藥用植物進(jìn)行雙色熒光原位雜交，并分析其核型和親緣關(guān)系。主要研究結(jié)果如下:
　　1.通過對人參屬藥用植物不同材料染色體制片的影響因素進(jìn)行對比研究，優(yōu)化了不同材料染色體制片技術(shù)。結(jié)果表明:染色體制片取材是關(guān)鍵，組培苗根尖長至2cm，種子根尖長至1.5cm，參苗根尖長至1cm，愈傷組織繼代后6-9d時(shí)，取材適宜。三種根尖經(jīng)0℃冰水預(yù)處理10-15h或2m

3、mol/L8-羥基喹啉預(yù)處理2-6h，染色體形態(tài)清晰，愈傷組織0℃放置24h，染色體聚縮程度適中。37℃水浴條件下，組培苗根尖和參苗根尖經(jīng)2％纖維素酶+1％果膠酶酶解90min，種子根尖和愈傷組織酶解120min酶解程度高，染色體分散且背景干凈。染色方法采用卡寶品紅染液和45％醋酸較好。本試驗(yàn)條件下，種子根尖適合采用滴片法制片，其他材料適合采用壓片法。
　　2.本文采用PCR法篩選人參屬藥用植物rDNA探針，對人參、西洋參、三七進(jìn)

4、行熒光原位雜交，完善了人參屬藥用植物熒光原位雜交技術(shù)。結(jié)果表明:篩選到的8種rDNA探針，其中高度保守的p18S、p45S1、p45S2探針在三個(gè)物種染色體上各有一對雜交位點(diǎn)，p5S1探針在人參、西洋參染色體上各有兩對雜交位點(diǎn)，p5S2探針在人參、西洋參染色體上各有一對雜交位點(diǎn)，p5S3、p5S5探針在人參、西洋參染色體上各有兩對雜交位點(diǎn)，在三七染色體上有一對雜交位點(diǎn)，p5S4探針在西洋參染色體上有一對雜交位點(diǎn)。
　　3.本文采用

5、雜交信號好、雜交位點(diǎn)多的探針，對三種人參屬藥用植物進(jìn)行雙色熒光原位雜交，結(jié)合染色體特征參數(shù)和rDNA分布位點(diǎn)，分析了人參、西洋參、三七核型及物種間親緣關(guān)系。結(jié)果表明:人參染色體核型公式為2n=48=30m+14sm+2st+2T，p18S探針在人參第1對染色體隨體上有一對清晰的雜交位點(diǎn)，p5S1探針有兩對雜交信號，一對信號較強(qiáng)，位于第14對染色體短臂靠近著絲粒位置，一對信號較弱，位于第3對染色體長臂緊挨著絲粒位置;西洋參染色體核型公式為

6、2n=48=22m+22sm+2st+2T，p18S探針在西洋參第五對染色體短臂上有一對清晰的雜交位點(diǎn)，p5S3探針有兩對雜交信號，一對信號較強(qiáng)，位于第9對染色體短臂靠近著絲粒位置，一對信號較弱，位于第6對染色體長臂緊挨著絲粒位置;三七染色體核型公式為2n=24=20m+4sm，p18S探針在三七第1對染色體短臂中間位置有一對信號較強(qiáng)雜交位點(diǎn)，p5S3探針在第11對染色體短臂中間位置有一對信號較弱雜交位點(diǎn)。核型似近系數(shù)聚類分析及rDNA