植物乳桿菌亞油酸異構(gòu)酶的純化及其應(yīng)用研究.pdf

1、本文研究了一株植物乳桿菌產(chǎn)亞油酸異構(gòu)酶的適宜條件，分離純化了該亞油酸異構(gòu)酶，確定了該酶的基本性質(zhì)，并初步探索了菌株及酶在提高豆渣中共軛亞油酸(ConjugatedLinoleicAcid，CLA)含量的應(yīng)用。　　L.plantarumLT2-6能夠在細(xì)胞內(nèi)誘導(dǎo)生成亞油酸異構(gòu)酶，具有將亞油酸(LA)轉(zhuǎn)化成CLA的能力。實驗結(jié)果表明，菌株L.plantarumLT2-6產(chǎn)亞油酸異構(gòu)酶的適宜條件為：溫度37℃，初始pH6.5，微氧環(huán)境，搖床

2、轉(zhuǎn)速120r/min，LA濃度0.075％(誘導(dǎo)酶的生成)，發(fā)酵時間22～24h，生成的CLA為cis,trans-9,11-CLA。在發(fā)酵液中加入適量青霉素(28.8～115.2×10-3U/ml)，易于細(xì)胞破壁，并不會顯著降低亞油酸異構(gòu)酶的生成。　　離心發(fā)酵液收集細(xì)胞，經(jīng)超聲波破碎、硫酸銨分段鹽析、陰離子交換層析和凝膠過濾層析，分離純化得到亞油酸異構(gòu)酶，在聚丙烯酰胺凝膠電泳(PAGE)和SDS-聚丙烯酰胺凝膠電泳上均呈現(xiàn)一條蛋白帶

3、，分子量約為43kDa。酶學(xué)性質(zhì)研究結(jié)果表明，該酶最適反應(yīng)條件為：溫度30℃，pH6.0，LA濃度1.5×10-5gLA/ml；Co2+、Fe2+提高酶的活性，Cu2+、Zn2+抑制酶的作用；以亞油酸為底物時，酶的K,=2.53×10-5mol/L，Vmax=2.57×10-8mol/(min·mg)?！　±肔.plantarumLT2-6發(fā)酵提高豆渣中CLA含量的適宜條件為：溫度30℃，水分80％，加入1％CoCl2，發(fā)酵3天以上