冷藏凡納濱對蝦特定腐敗菌群體感應現(xiàn)象與致腐能力的研究.pdf

1、群體感應是細菌之間的一種細胞密度依賴型信息交流機制，越來越多的研究證明，群體感應參與了食品腐敗變質過程的調控。本論文旨在確定群體感應對冷藏凡納濱對蝦腐敗微生物致腐能力的調控，并嘗試采用群體感應抑制劑來延長冷藏凡納濱對蝦的貨架期。本文的主要研究內(nèi)容及取得的成果如下:
　　1、冷藏凡納濱對蝦中的群體感應信號分子(AIs)與腐敗進程
　　采用生物檢測法（報告菌株:根癌農(nóng)桿菌A136和哈氏弧菌BB170）和氣相色譜—質譜聯(lián)用儀器法，

2、從4℃貯藏凡納濱對蝦中檢測到了高絲氨酸內(nèi)酯(AHLs，包括C6-HSL、C6-HSL、C8-HSL和O-C6-HSL)、呋喃硼酸內(nèi)酯(AI-2)和環(huán)二肽(DKPs，包括 cyclo-(L-Pro-L-Leu)、 cyclo-(L-Leu-L-Leu)和cyclo-(L-Pro-L-Phe))三類AIs，它們的活性均隨著貯藏時間的延長而顯著升高。外源AIs能夠調控冷藏凡納濱對蝦的腐敗進程:C6-HSL和cyclo-(L-Pro-L-Leu

3、)分別將冷藏凡納濱對蝦腐敗微生物的延滯期縮短了38.3％和12.1％，加速了蝦肉中TVB-N和腐敗氣味物質的產(chǎn)生;AI-2的前體物質4，5-二羥基-2，3-戊二酮(DPD)延長了腐敗微生物的延滯期，降低了腐敗微生物的最大生長速率，減緩了蝦肉中TVB-N和腐敗氣味物質的產(chǎn)生。
　　2、冷藏凡納濱對蝦的特定腐敗菌(SSO)
　　分析了冷藏凡納濱對蝦腐敗前后的菌相變化，并測定了主要腐敗菌的致腐能力。鮮活凡納濱對蝦的優(yōu)勢菌群為氣單胞

4、菌屬、發(fā)光桿菌屬、希瓦氏菌屬和色桿菌屬;4℃貯藏5d至貨架期終點后，其主要菌相轉變?yōu)橄Ｍ呤暇鷮?、假單胞菌屬、不動桿菌屬和奈瑟菌屬;在反接種試驗中，希瓦氏菌的TVB-N產(chǎn)量因子約為假單胞菌的2倍，約為不動桿菌的3倍，表明希瓦氏菌是冷藏凡納濱對蝦的SSO。外源AIs能夠調控冷藏凡納濱對蝦SSO的生長繁殖:C6-HSL和cyclo-(L-Pro-L-Leu)顯著縮短了SSO的延滯期，增強了SSO對冷藏環(huán)境的適應能力，而DPD對SSO的生長繁殖

5、無顯著影響;貯藏5d后，C6-HSL、AI-2和cyclo-(L-Pro-L-Leu)將SSO的比例從空白組的44.6±3.7％分別提高至70.1±4.9％、68.5±2.8％和77.5±3.9％。
　　3、冷藏凡納濱對蝦SSO的群體感應系統(tǒng)
　　通過檢測冷藏凡納濱對蝦SSO的AIs分泌和感受系統(tǒng)，發(fā)現(xiàn)其具有非常特殊的群體感應系統(tǒng):不能分泌AHLs，但含有AHLs的受體基因luxR，能夠竊聽周圍環(huán)境中的AHLs;能夠分泌AI

6、-2，但不能感受環(huán)境中的AI-2; SSO菌株SA02能夠分泌并感知cyclo-(L-Pro-L-Leu)，而SSO菌株SS01則可以竊聽cyclo-(L-Pro-L-Leu)。冷藏凡納濱對蝦SSO的生物膜形成和胞外蛋白酶活力受其群體感應系統(tǒng)的調控:AHLs和cyclo-(L-Pro-L-Leu)的生物效應與AIs種類和菌株類別有關;DPD、cyclo-(L-Leu-L-Leu)和cyclo-(L-Pro-L-Phe)無顯著調控效果。<

7、br>　　4、冷藏凡納濱對蝦中群體感應竊聽現(xiàn)象的初步研究
　　SA02能夠竊聽冷藏凡納濱對蝦第三主要腐敗菌—不動桿菌菌株ACI分泌的AHLs（包括了C4-HSL、O-C6-HSL和O-C8-HSL）。該現(xiàn)象給SA02在營養(yǎng)貧瘠環(huán)境中的生長帶來了競爭優(yōu)勢:SA02和ACI在稀釋100倍的胰蛋白胨大豆肉湯培養(yǎng)基中混合培養(yǎng)時，SA02的生長繁殖速度提高了40倍左右。激光共聚焦分析結果證明，SA02通過竊聽現(xiàn)象干擾了環(huán)境中AHLs的濃度，

8、進而調控自身及ACI生物膜的形成量、厚度和致密性。兩株菌混合接種于冷藏凡納濱對蝦中時，SA02對ACI分泌的AHLs的竊聽促進了SA02在冷藏凡納濱對蝦上的生長繁殖，加速了蝦肉中揮發(fā)性鹽基氮和腐敗氣味物質的產(chǎn)生，縮短了樣品的貨架期。
　　5、肉桂醛對冷藏凡納濱對蝦主要腐敗菌群體感應和致腐能力的調控
　　亞抑菌濃度的肉桂醛能夠抑制ACI分泌AHLs，但不干擾SA02感受外源AHLs。肉桂醛顯著抑制了冷藏凡納濱對蝦中的AHLs和