冷藏凡納濱對(duì)蝦特定腐敗菌群體感應(yīng)現(xiàn)象與致腐能力的研究.pdf

1、群體感應(yīng)是細(xì)菌之間的一種細(xì)胞密度依賴型信息交流機(jī)制，越來越多的研究證明，群體感應(yīng)參與了食品腐敗變質(zhì)過程的調(diào)控。本論文旨在確定群體感應(yīng)對(duì)冷藏凡納濱對(duì)蝦腐敗微生物致腐能力的調(diào)控，并嘗試采用群體感應(yīng)抑制劑來延長冷藏凡納濱對(duì)蝦的貨架期。本文的主要研究內(nèi)容及取得的成果如下:
　　1、冷藏凡納濱對(duì)蝦中的群體感應(yīng)信號(hào)分子(AIs)與腐敗進(jìn)程
　　采用生物檢測(cè)法（報(bào)告菌株:根癌農(nóng)桿菌A136和哈氏弧菌BB170）和氣相色譜—質(zhì)譜聯(lián)用儀器法，

2、從4℃貯藏凡納濱對(duì)蝦中檢測(cè)到了高絲氨酸內(nèi)酯(AHLs，包括C6-HSL、C6-HSL、C8-HSL和O-C6-HSL)、呋喃硼酸內(nèi)酯(AI-2)和環(huán)二肽(DKPs，包括 cyclo-(L-Pro-L-Leu)、 cyclo-(L-Leu-L-Leu)和cyclo-(L-Pro-L-Phe))三類AIs，它們的活性均隨著貯藏時(shí)間的延長而顯著升高。外源AIs能夠調(diào)控冷藏凡納濱對(duì)蝦的腐敗進(jìn)程:C6-HSL和cyclo-(L-Pro-L-Leu

3、)分別將冷藏凡納濱對(duì)蝦腐敗微生物的延滯期縮短了38.3％和12.1％，加速了蝦肉中TVB-N和腐敗氣味物質(zhì)的產(chǎn)生;AI-2的前體物質(zhì)4，5-二羥基-2，3-戊二酮(DPD)延長了腐敗微生物的延滯期，降低了腐敗微生物的最大生長速率，減緩了蝦肉中TVB-N和腐敗氣味物質(zhì)的產(chǎn)生。
　　2、冷藏凡納濱對(duì)蝦的特定腐敗菌(SSO)
　　分析了冷藏凡納濱對(duì)蝦腐敗前后的菌相變化，并測(cè)定了主要腐敗菌的致腐能力。鮮活凡納濱對(duì)蝦的優(yōu)勢(shì)菌群為氣單胞

4、菌屬、發(fā)光桿菌屬、希瓦氏菌屬和色桿菌屬;4℃貯藏5d至貨架期終點(diǎn)后，其主要菌相轉(zhuǎn)變?yōu)橄Ｍ呤暇鷮?、假單胞菌屬、不?dòng)桿菌屬和奈瑟菌屬;在反接種試驗(yàn)中，希瓦氏菌的TVB-N產(chǎn)量因子約為假單胞菌的2倍，約為不動(dòng)桿菌的3倍，表明希瓦氏菌是冷藏凡納濱對(duì)蝦的SSO。外源AIs能夠調(diào)控冷藏凡納濱對(duì)蝦SSO的生長繁殖:C6-HSL和cyclo-(L-Pro-L-Leu)顯著縮短了SSO的延滯期，增強(qiáng)了SSO對(duì)冷藏環(huán)境的適應(yīng)能力，而DPD對(duì)SSO的生長繁殖

5、無顯著影響;貯藏5d后，C6-HSL、AI-2和cyclo-(L-Pro-L-Leu)將SSO的比例從空白組的44.6±3.7％分別提高至70.1±4.9％、68.5±2.8％和77.5±3.9％。
　　3、冷藏凡納濱對(duì)蝦SSO的群體感應(yīng)系統(tǒng)
　　通過檢測(cè)冷藏凡納濱對(duì)蝦SSO的AIs分泌和感受系統(tǒng)，發(fā)現(xiàn)其具有非常特殊的群體感應(yīng)系統(tǒng):不能分泌AHLs，但含有AHLs的受體基因luxR，能夠竊聽周圍環(huán)境中的AHLs;能夠分泌AI

6、-2，但不能感受環(huán)境中的AI-2; SSO菌株SA02能夠分泌并感知cyclo-(L-Pro-L-Leu)，而SSO菌株SS01則可以竊聽cyclo-(L-Pro-L-Leu)。冷藏凡納濱對(duì)蝦SSO的生物膜形成和胞外蛋白酶活力受其群體感應(yīng)系統(tǒng)的調(diào)控:AHLs和cyclo-(L-Pro-L-Leu)的生物效應(yīng)與AIs種類和菌株類別有關(guān);DPD、cyclo-(L-Leu-L-Leu)和cyclo-(L-Pro-L-Phe)無顯著調(diào)控效果。<

7、br>　　4、冷藏凡納濱對(duì)蝦中群體感應(yīng)竊聽現(xiàn)象的初步研究
　　SA02能夠竊聽冷藏凡納濱對(duì)蝦第三主要腐敗菌—不動(dòng)桿菌菌株ACI分泌的AHLs（包括了C4-HSL、O-C6-HSL和O-C8-HSL）。該現(xiàn)象給SA02在營養(yǎng)貧瘠環(huán)境中的生長帶來了競(jìng)爭(zhēng)優(yōu)勢(shì):SA02和ACI在稀釋100倍的胰蛋白胨大豆肉湯培養(yǎng)基中混合培養(yǎng)時(shí)，SA02的生長繁殖速度提高了40倍左右。激光共聚焦分析結(jié)果證明，SA02通過竊聽現(xiàn)象干擾了環(huán)境中AHLs的濃度，

8、進(jìn)而調(diào)控自身及ACI生物膜的形成量、厚度和致密性。兩株菌混合接種于冷藏凡納濱對(duì)蝦中時(shí)，SA02對(duì)ACI分泌的AHLs的竊聽促進(jìn)了SA02在冷藏凡納濱對(duì)蝦上的生長繁殖，加速了蝦肉中揮發(fā)性鹽基氮和腐敗氣味物質(zhì)的產(chǎn)生，縮短了樣品的貨架期。
　　5、肉桂醛對(duì)冷藏凡納濱對(duì)蝦主要腐敗菌群體感應(yīng)和致腐能力的調(diào)控
　　亞抑菌濃度的肉桂醛能夠抑制ACI分泌AHLs，但不干擾SA02感受外源AHLs。肉桂醛顯著抑制了冷藏凡納濱對(duì)蝦中的AHLs和