細胞周期的流式檢測方法

1、1細胞周期的流式檢測方法細胞周期（cell cycle）是指細胞從一次分裂完成開始到下一次分裂結束所經歷的全過程，分為 G0/G1 期、S 期、G2/M 期。在科研實踐中，很多實驗具有對細胞群體的周期分布進行檢測的需求。細胞群體周期測定的方法有很多種，最常用的是 PI（碘化丙啶）滲入DNA 進行染色，然后通過流式細胞儀檢測 PI 從而測定細胞群體的周期分布。因此，下面筆者主要通過 BD（Becton＆Dickinson）公司生產的 BD

2、 FACSCalibur 流式細胞儀測定 PI 標記的細胞群體為例，對細胞周期的流式檢測方法進行闡述。一、PI 染色步驟概略1、單細胞懸液離心，1500rpm , 5min，棄上清。2、PBS 1ml 離心，棄上清。3、70%酒精 2ml，4℃，30min，離心，棄上清液。4、PBS 1ml 離心，棄上清。5、RNase A 的 PBS 溶液 (20ug/ml)，500ul，37℃，30min，離心棄上清。6、PBS 1ml 離心，棄上

3、清。 7、PI 的 PBS 溶液(50ug/ml)，500ul，室溫避光孵育 30min。8、吹打混勻，300 目篩網過濾至流式管中，4℃保存，待測。二、Calibur 儀器設置及數據收集1、依次打開 Calibur 機器電源、電腦開關和 CellQuest Pro 軟件，按快捷鍵 Command+B 連機，按快捷鍵 Command+1、2、3、4 調出 Detectors/Amps 面板、Threshold 面板、Compensati

4、on 面板和 Status 面板，軟件的操作界面如圖 1 所示。圖 1. Cell Quest Pro 軟件操作界面2、建立實驗模板，包括 FSC/SSC 散點圖、FL2-W/FL2-A 散點圖和 FL2-A 直方圖。因為 PI在 Calibur 上是由 488nm 的激光器激發(fā)，530/30 濾光片收集信號，所以選擇 FL2 通道進行檢測。細胞周期是 2N 和 4N 的循環(huán)，所以 FL2 通道的 Mode 參數應設置為 Lin 模式，

5、同時閾值（Threshold）的 Primary Param 參數設置為 FL2-H，Four Color DDM Param 參數設置3圖 5. Acquisition 面板4、在圖 6 所示的操作面板中，勾選 Setup 選項，點擊 Acquire 按鈕進行數據收集并調節(jié)FL2 通道的電壓值使得周期圖位于 FL2 直方圖中合適的位置。調好電壓后，將 Setup 選項勾掉，點擊 Acquire 按鈕收集數據。數據以.FCS 格式保存在