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文檔簡介
1、流式細胞儀檢測細胞周期操作步驟流式細胞儀檢測細胞周期操作步驟取對數(shù)生長期的A549細胞，按1106cellsmL以1mL接種于100mm培養(yǎng)皿內(nèi)↓24h后，進行所需的處理（比如加藥照射）↓特定時間后終止培養(yǎng)，進行下一步的實驗↓收集原培養(yǎng)液，洗后的PBS和消化后的細胞，將三者混勻放入15ml離心管中↓1000rpm離心5min（短時低速離心）↓棄上清，用1.5ml預(yù)冷PBS，1000rpm離心5min后去除PBS和細胞懸液內(nèi)的細胞碎片↓加
2、入1.5ml預(yù)冷PBS在渦旋狀態(tài)下加入3.5ml無水乙醇，混勻后，于4℃固定30min或20℃長期保存?！?000rmin離心5min↓↓流動室內(nèi)充滿鞘液，細胞排成單列由噴嘴中心噴出，形成細胞液柱↓液柱與激光束相交，細胞上的熒光染料被激發(fā)產(chǎn)生熒光（488nm激發(fā)光源）↓熒光信號變成電信號輸出到計算機，軟件分析（熒光染料和細胞DNA分子特異性結(jié)合，可以檢測出細胞周期各時相細胞比例）↓在用第三方軟件分析之前，將流式結(jié)果按如下所示導(dǎo)出結(jié)果分析
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