一株依氏交替假單胞菌HZ胞外多糖的研究.pdf

1、隨著海洋產(chǎn)業(yè)的快速發(fā)展，海洋活性物質(zhì)逐漸為人所知，海洋細(xì)菌及其多糖也引起了更多研究者的重視。本實驗所用菌株為依氏交替假單胞菌HZ（Pesudoalteromonas issachenkoniiHZ），其所產(chǎn)胞外多糖命名為EPS-PII，本文主要對產(chǎn)EPS-PII的發(fā)酵培養(yǎng)基組成和發(fā)酵條件進(jìn)行優(yōu)化，分離純化EPS-PII，并對EPS-PII進(jìn)行了結(jié)構(gòu)鑒定與相關(guān)功能研究。主要結(jié)果如下：
　　首先對Pesudoalteromonas i

2、ssachenkoniiHZ發(fā)酵培養(yǎng)基碳源、氮源、海鹽和眾多發(fā)酵因素進(jìn)行了單因素試驗；接著采用Plackett-Burman方法篩選出了三個影響EPS-PII產(chǎn)量的顯著性因素，分別為接種量、培養(yǎng)時間和搖床轉(zhuǎn)速；再通過Box-Behnken響應(yīng)面方法模擬得到線性擬合方程和響應(yīng)面圖形，獲得最佳發(fā)酵條件。發(fā)酵培養(yǎng)基組成為：葡萄糖30g/L，酵母浸膏4.5g/L，海鹽35g/L；最佳發(fā)酵條件為：培養(yǎng)時間33.8h，接種量8.8％，搖床轉(zhuǎn)速170

3、r/min。EPS-PII平均產(chǎn)量可達(dá)2.603±0.022g/L。
　　本實驗提取多糖方法為水提醇沉法，然后采用Sevage法純化多糖，除去雜蛋白，通過紫外掃描檢測多糖純度，EPS-PII溶液在220nm處出現(xiàn)了多糖的特殊吸收峰，在260和280nm處均無核酸和蛋白質(zhì)吸收峰出現(xiàn)，粗多糖EPS-PII分別通過陰離子交換柱（DEAE-52）和葡聚糖凝膠柱（Sephadex G-100）進(jìn)行過濾除雜和分級純化，通過高效凝膠滲透色譜（H

4、PGPC）法測定EPS-PII的數(shù)均分子量（Mn）為2.26×105g/mol，重均分子量(Mw)為2.81×105g/mol，分散系數(shù)為1.24，表明EPS-PII相對純度均一。
　　冷凍干燥后得到灰色EPS-PII多糖粉末，水溶性一般。GC-MS分析得出EPS-PII主要由五種單糖組成，分別為D-木糖、阿拉伯糖、D-吡喃葡萄糖、甘露糖和巖藻糖，其中木糖占58%以上；EPS-PII通過元素分析測得其中C、H、O、N、S的百分含量

5、分別為：3.901、2.584、25.56、0.485、0.402；再利用傅里葉紅外光譜（IR）、核磁共振波譜（NMR）以及EPS-PII甲基化反應(yīng)分析得出EPS-PII的糖苷鍵構(gòu)型為α構(gòu)型，多糖中含氧甲基和甲基糖，幾乎不含糖醛酸和糖蛋白，推測多糖主鏈結(jié)構(gòu)為：D-木糖以α-1,4糖苷鍵連接。
　　對EPS-PII粗多糖進(jìn)行功能方面的研究，主要包括其吸濕保濕性，抗氧化性和吸附重金屬離子三個方面。在相對濕度為73%條件下，EPS-PI

6、I吸濕能力較強(qiáng)，略小于透明質(zhì)酸鈉和殼聚糖，而在相對濕度32%時，EPS-PII吸濕能力較弱；在充有硅膠的干燥器中，EPS-PII的保濕性能最佳，超過了殼聚糖和透明質(zhì)酸鈉，在相對濕度32%的條件下，EPS-PII的保濕性能略高于透明質(zhì)酸鈉但稍低于殼聚糖。對EPS-PII的抗氧化性實驗表明，EPS-PII在0.5 mg/mL時，對?OH的清除率能達(dá)到11.89%，EPS-PII對O2-?的抗氧化實驗發(fā)現(xiàn)EPS-PII和Vc的IC50分別為0