gas41蛋白的表達(dá)、抗體制備及其亞細(xì)胞定位

1、第 1 4 卷第 6 期 2 0 0 5年 1 2月 激 光 生 物 學(xué) 報(bào) AC T A L AS E RB I OL OGYS I NI CAVo 1 ． 1 4No ． 6De c ． 2 0 0 5· 基礎(chǔ)研 究 ·G A S 41 蛋 白的 表達(dá) 、 抗 體 制備 及 其 亞 細(xì)胞 定 位 丁小風(fēng) ， 胡 翔 ， 張 健 ( 湖 南師 范大學(xué)生命科學(xué)學(xué)院 ， 中國(guó)湖 南 長(zhǎng) 沙 4 1 0 0 8 1 )

2、摘 要 ： G A S 4 1 是新發(fā)現(xiàn)的與神經(jīng)膠質(zhì)瘤密切相關(guān)的基因。為 r 對(duì)該基因進(jìn)行深入的功能研究， 成功地將 G A S 4 1基 因構(gòu)建于原核表達(dá)載體 p Q E — N 3 ， 轉(zhuǎn) 化 B L 2 1 ( D E 3 ) 獲 得融 合表達(dá) 產(chǎn)物 。對(duì) 含融合 蛋 白的包 含體進(jìn) 行溶 解和 復(fù)性 ， 通過(guò)免疫新西蘭大 白兔獲得兔抗 G A S 4 1 多克隆抗 體。采用 We s t e r n印跡技術(shù) ， 用該 抗體檢 測(cè)

3、 G A S 4 1 基因 的原 核和真核表達(dá)產(chǎn)物 ， 證 明該抗體有較好 的針 對(duì) G A S 4 1 蛋 白的專一性 ， 可 用于對(duì) G A S 4 1 的結(jié) 構(gòu)和 功能研究 。同時(shí) ，用該抗體通過(guò)熒光免疫細(xì)胞進(jìn)行定位分析發(fā) 現(xiàn) ， G A S 4 1 蛋 白均勻分 布于 C O S 7細(xì)胞 的細(xì)胞 核 中， 提示 G A S 4 1 可 能 是一個(gè)重要的轉(zhuǎn) 錄因子。關(guān)鍵 詞 ： G A S 4 1 ； 表達(dá)； 抗 G A S 4

4、1 多抗； 亞細(xì)胞定位 中圖分類號(hào)： R 3 9 2文獻(xiàn) 標(biāo)識(shí) 碼 ： A文章編號(hào) ： 1 0 0 7 - 7 1 4 6 ( 2 0 0 5 ) 0 6 - 0 4 1 1 - 0 5S u b c e l l u l a rLo c a t i o no fGAS 41b yI t sEx p r e s s i o na n dP r e p a r a t i o no fAn t i s e r u m D I N GX i

5、a o - f e n g ， H UX X a n g ， Z H A N GJ i a n( C o l l e g eo fL i f eS c i e n c e ，H u n a nN o r m a lU n i v e r s i t y ， C h a n g s h a4 1 0 0 8 1 ， Hu n a n ， C h i n a )Ab s t r a c t ： G A S 4 1i sar e c e n

6、t l yi d e n t i f i e dg e n es l i g h t l yr e l a t e dt og l i o m a ．I no r d e rt os t u d yt h ee x p r e s s i o n ， s u b e e l l u l a rd i s —t r i b u t i o na n dt h ef u n c t i o no fG AS 4 1p r o t e i n

7、 ， t h ec o d i n gr e g i o no fh u ma nG A S 41g e n ew a ss u c c e s s f u l l ys u b c l o n e di n t ot h ep r o k a r y o t i ce x p r e s s i o nv e c t o rp Q E — N 3 ．T h ev e c t o rw a st h e ni n t r o d u c

8、 e di n t oE ．c o l iB L 2 1 ( D E 3 ’ ) c e l l sf o rh i g h l ye ~c i e n te x p r e s s i o n ．Hi s — f u s i o np r o t e i no f3 0k Dw a sd e t e c t e di nt h ei n c l u s i o nb o d y ． A f t e rr e f o l d e da

9、n dp u r i f i e d， t h i sp r o t e i nw a su s e dt oi mmu n i z eNe wZe a l a n dw h i t er a b b i tt op r o d u c ep o l y c l o n a la n t i b o d i e s ．T h es p e c i f i c i t yo ft h ea n t i — G A S 41a n t i

10、b o d ywa ss u c c e s s f u l l yp r o v e db yWe s t e r n b l o t t i n ga n da n a l y s i so nb o t ho ft h ep r o k a r y o t i ea n de u k a r y o t i ce x p r e s s e dp r o d u c t so fG AS 41p r o t e i n ． Mo

11、 r e o v e r ， t h eG A S 41i mmu n o r e a c t i v ec e l l swe r ef o u n dt ob eu n i f o r ml yd i s t r i b u t e di nt h en u c l e o l u s ， t h i ss u g —g e s t sG A S 41ma yb ea ni mp o r t a n tt r a n s c r i

12、 p t i o nf a c t o r ．Ke ywo r d s ：G A S 4 1 ； e x p r e s s i o n ； a n t i s e r u ma g a i n s tt oG A S 4 1 ；s u b e e l l u l a rl o c a l i z a t i o nG A S 4 1 ( g l i o m aa m p l i f i e ds e q u e n c e4 1 )

13、基 因是我們 通過(guò)酵母雙雜交方法從 H e L ac D N A文庫(kù)中篩選與 A P 一2 B 相互作用的蛋白找到的一個(gè)基 因。該基因 G A S 4 1處于染色體 1 2 q 1 3 - 1 5區(qū)域， 包括 7個(gè)外顯子， 從人類 基金項(xiàng) 目： 國(guó)家 自然科學(xué)基金項(xiàng) 目( 3 0 2 7 0 7 2 3 ) 。收稿 日期 ： 2 0 0 5 - 0 6 - 06 ； 修 回 日期 ： 2 0 0 5 - 09 - 01通訊作者 神經(jīng)膠質(zhì)

14、瘤中擴(kuò)增而來(lái) ， c D N A全長(zhǎng)為 l 4 4 4b p ， 編碼 一 個(gè)由2 2 7 個(gè)氨基酸組成， 分子量為 2 6 ． 5k D的蛋白質(zhì) 。通過(guò)蛋白質(zhì) B L A S T 分析人 、 果蠅 、 線蟲、 酵母和雞的 G A S 4 1 ， 可知它是一個(gè)高度保守的蛋 白質(zhì)， 尤其在 維普資訊 http://www.cqvip.com 第 6 期 丁小鳳等 ： G A S 4 1 蛋 白的表達(dá)、His 一$ 4 121M6 ． 2

15、k Dlk D1 ． 5k D圖 21 3 ％ S D S — P A G E 分 析 誘 導(dǎo) 表 達(dá) 的G A1蛋 白 M： m a r k e r ； 1 ： I P T G誘導(dǎo)； 2 ： 未加 I P T G誘導(dǎo)。F i g ． 213 ％ S DS — P AGEa n a l y s i so fe x p r e s s e dG A S 41p r o t e i nM ： ma r k e r ；1 ：i n d u c

16、 ewi t hI P T G；2：wi t h o u tI pG．|j2lM圖 31 5 ％S D S — P A G E分析純化的 G A S 4 1 蛋白M： m a r k e r ； 1 ， 2 ， 3， G A S 4 1蛋 白 F i g ．315 ％ S DS — P AG Ea n a l y s i so fp u r i f i e dG A S 41p r o t e i nM ： ma r k e r ； 1