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文檔簡(jiǎn)介
1、基因工程: 基因工程:按照預(yù)先設(shè)計(jì)好的藍(lán)圖,利用現(xiàn)代分子生物學(xué)技術(shù),特別是酶學(xué)技術(shù),對(duì)遺傳物質(zhì) DNA 直接進(jìn)行體外重組操作與改造,將一種生物(供體)的基因轉(zhuǎn)移到另外一種生物(受體)中去,從而實(shí)現(xiàn)受體生物的定向改造與改良。遺傳工程: 遺傳工程:廣義:指以改變生物有機(jī)體性狀為目標(biāo),采用類似工程技術(shù)手段而進(jìn)行的對(duì)遺傳物質(zhì)的操作,以改良品質(zhì)或創(chuàng)造新品種。包括細(xì)胞工程、染色體工程、細(xì)胞器工程和基因工程等不同的技術(shù)層次。狹義:基因工程。限制性核酸
2、內(nèi)切酶: 限制性核酸內(nèi)切酶:是可以識(shí)別 DNA 的特異序列,并在識(shí)別位點(diǎn)或其周圍切割雙鏈 DNA 的一類內(nèi)切酶,簡(jiǎn)稱限制酶回文結(jié)構(gòu): 回文結(jié)構(gòu):每條單鏈以任一方向閱讀時(shí)都與另一條鏈以相同方向閱讀時(shí)的序列是一致的,例如 5'GGTACC3' 3'CCATGG5'.同裂酶 同裂酶(isoschizomer) (isoschizomer)或異源同工酶 或異源同工酶:不同來(lái)源的限制酶可切割同一靶序列(BamH I
3、 和 Bst I 具有相同的識(shí)別序列 G↓GATGC)同尾酶 同尾酶(isocaudiners) (isocaudiners):來(lái)源不同、識(shí)別序列不同,但產(chǎn)生相同粘性末端的酶。兩個(gè)同尾酶形成的黏性末端連接之后,一般情況下連接處不能夠再被其任何一種同尾酶識(shí)別。BamH I 識(shí)別序列: G?GATCCBgl II 識(shí)別序列: A?GATCT黏性末端 黏性末端 (cohesive (cohesive terminus/sticky t
4、erminus/sticky ends) ends):DNA 末端一條鏈突出的幾個(gè)核苷酸能與另一個(gè)具有突出單鏈的 DNA 末端通過互補(bǔ)配對(duì)粘合,這樣的 DNA 末端,稱為黏性末端。平末端( 平末端(blunt blunt ends ends): DNA 片段的末端是平齊的。星活性( 星活性(star star activity activity): ):指限制性內(nèi)切酶在非標(biāo)準(zhǔn)條件下,對(duì)與識(shí)別序列相似的其它序列也進(jìn)行切割反應(yīng),導(dǎo)致出現(xiàn)非特
5、異性的 DNA 片段的現(xiàn)象。易產(chǎn)生星活性的內(nèi)切酶用*標(biāo)記。如:EcoR I*底物位點(diǎn)優(yōu)勢(shì)效應(yīng) 底物位點(diǎn)優(yōu)勢(shì)效應(yīng): 酶對(duì)同一個(gè) DNA 底物上的不同酶切位點(diǎn)的切割速率不同。連桿 連桿/銜接物( 銜接物(linker linker): ):化學(xué)合成的 8~12 個(gè)核苷酸組成的寡核苷酸片段。以中線為軸兩邊對(duì)稱,其上有一種或幾種限制性核酸內(nèi)切酶的識(shí)別序列,酶切后可產(chǎn)生一定的粘性末端,便于與具有相同粘性末端的另一 DNA 片段連接。銜接頭 銜接頭
6、/接頭( 接頭(adaptor adaptor): ):化學(xué)合成的寡核苷酸,含有一種以上的限制性核酸基因在受體細(xì)胞內(nèi)的高效表達(dá)探針質(zhì)粒: 探針質(zhì)粒:篩選克隆或?qū)ふ一蛟ǔQb有一個(gè)可以定量測(cè)定其表達(dá)的標(biāo)記基因,如抗性基因。溶菌生長(zhǎng) 溶菌生長(zhǎng):噬菌體感染宿主細(xì)胞后,大量增殖子代噬菌體顆粒,使宿主細(xì)胞裂解,釋放出來(lái)的病毒顆粒又再感染其它細(xì)胞,這種周而復(fù)始的生命過程(生活周期)稱溶菌生長(zhǎng)。烈性噬菌體: 烈性噬菌體:噬菌體感染宿主細(xì)胞后,D
7、NA 不整合到宿主染色體,只進(jìn)行溶菌生長(zhǎng),這樣的噬菌體稱烈性噬菌體。溶原生長(zhǎng): 溶原生長(zhǎng):噬菌體感染細(xì)菌,DNA 整合到寄主染色體中,隨寄主細(xì)胞染色體的復(fù)制而復(fù)制,寄主細(xì)胞仍然正常分裂,并不死亡,這種生命過程叫作溶原生長(zhǎng)。溫和噬菌體( 溫和噬菌體(temperate temperate phage phage): ):病毒感染宿主細(xì)胞后 DNA 整合到寄主染色體中,無(wú)感染其它細(xì)胞的能力,這樣的病毒,稱溫和噬菌體。溶原性細(xì)菌( 溶原性細(xì)菌
8、(lysogen lysogen): ):細(xì)菌染色體中整合有噬菌體基因組的細(xì)菌。對(duì)同種噬菌體具有免疫性。溶原化( 溶原化(lysogenization lysogenization): ):用溫和噬菌體感染細(xì)菌使之成為溶原性細(xì)菌的過程。原噬菌體( 原噬菌體(prophage prophage): ):在溶原性細(xì)菌內(nèi)存在的整合噬菌體 DNA ,稱原噬菌體。cos cos 位點(diǎn) 位點(diǎn)(cohesive (cohesive end end
9、site) site) :指在連接酶的作用下,連接上述黏性末端結(jié)合形成的雙鏈 DNA 區(qū)段。又稱黏性末端位點(diǎn)??滤官|(zhì)粒載體或稱粘粒 柯斯質(zhì)粒載體或稱粘粒(cosmid) (cosmid):是一類人工構(gòu)建的含有入 DNA cos 位點(diǎn)、噬菌體包裝有關(guān)的 DNA 短序列(具有噬菌體的高感染性) 、質(zhì)粒 DNA 復(fù)制子、抗生素標(biāo)記基因等元件的特殊質(zhì)粒載體。在宿主細(xì)胞中可以作為正常噬菌體進(jìn)行復(fù)制,但不表達(dá)噬菌體的任何功能。人工染色體 人工染色體
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