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1、中文 中文 6250 字出處: 出處:Yahia E M, Soto-Zamora G, Brecht J K, et al. Postharvest hot air treatment effects on the antioxidant system in stored mature-green tomatoes[J]. Postharvest Biology Agarwal Rao Yahia Yahia &Ort
2、ega, 2000)而不是其他影響因素,如改善冷害等。熱處理對果蔬的抗氧化成分具不利影響(Jonsson, 1991),然而,降低氧分壓可防止這些消極影響。本實驗就是研究西紅柿在 34℃或 38℃大氣條件下或 5%O2,38℃條件下采后熱空氣處理 24h 后,西紅柿的質(zhì)量和抗氧化劑的改變。上清液并通過 0.2 毫米的尼龍膜篩選。通過 HPLC 4.6×150mm YMC 類胡蘿卜素 C-30 列(YMC, Inc., Wilm
3、ington, NC, USA)和光電二極管檢測器來測定番茄紅素的含量。流動相用的是三丁基甲基醚:水:甲醇從 15:4:81 到 90:4:6 的線性梯度處理 90 分鐘,流量為一分鐘 0.75 毫升。然后測其在 471nm 處的吸光度。根據(jù) Zapata 和 Dufour(1992)提取抗壞血酸和異抗壞血酸。通過有二極管陣列檢測器的HPLC 配備和一個 10 微米的 mBondapak C18 柱(3.9×300㎜2) ,1
4、0 微米的 mBondapak C18 柱(3.9×20㎜2)來進(jìn)行量化。流動相為甲醇:水(5:95)的混合溶液,其中含 5 毫升溴化十六烷和 50毫升的磷酸二氫鉀,流量為每分鐘 1.5 毫升。在 261nm 處測其吸光度。根據(jù) Farris 和 Reed (1987)的方法以及一些修改方法,來測定半胱氨酸,減少的氧化型谷胱甘肽的含量。取 0.25g 的凍干組織于含有 2.5 毫升濃度為 10g/kg 的高氯酸和 1 毫升磺酸
5、的水溶液中勻質(zhì),然后作為樣品。將勻漿液在 4℃,7800×gn 離心機離心 20 分鐘,重新收集上清液中的顆粒然后進(jìn)行相同的提取工藝,并將上清液合并。向甲提取物加 50 微升的γ-谷氨酰-谷氨酸(0.5 毫米) ,用 50 微升 100 毫米羧甲基碘乙酸縮合,用 0.2mM 間甲酚紫溶解,加 KOH (2 M)和 KHCO3 (2.4 M),使溶液的PH 達(dá)到 9-10,然后暗處理 15 分鐘。再向樣品中加入 1
6、毫升 1%的 2,4 -硝基- 1 -氟苯,并在 4℃暗處理一個晚上。第二天將它們在 13000×gn 下離心 15 分鐘,在進(jìn)行高效液相色譜法前將它們通過 0.2 毫米的尼龍膜過濾。流動相 A 加 80g/kg 甲醇流動相 B 加 800 毫升溶液,這種溶液中每448 毫升水中含 1kg 醋酸鈉,3.2 升 80%的甲醇中加入 1.39 升冰醋酸。高效液相色譜法開始運行,80%A 和 20%B5 分鐘,隨后 10 分鐘
7、有一個線性漸變遵循的 1%A 和 99%B,保持 2 分鐘,然后恢復(fù)到初始條件,超過 5 分鐘的線性梯度,為重新平衡分列條件在這種情況下保持 15 分鐘。一個 50 毫升的樣本提取,羧甲基化和衍生到一個 5 毫米的所有領(lǐng)域氨基柱(2504.6 平方毫米)注射,流速為 1 分鐘 1mL,在 365 nm 讀取吸光度。為測谷胱甘肽還原酶(EC1.6.4.2)的活性,取 0.15 克凍干組織勻漿樣品在 2.5 0.1M 的磷酸鹽緩沖液(pH
8、7.0) ,其中加入 1 毫米 EDTA,1 毫米的二巰基乙醇,0.5%的 Triton X - 100,和 ML 2g,1kgPVPP,并在 17,400×gn 離心 20 分鐘。反應(yīng)介質(zhì)含有 1000 微升鉀磷酸鹽緩沖液(0.2 米,pH 值 7.5) ,150 微升的 NADPH(2 毫米) ,150 微升 20 納米氧化型谷胱甘肽,100 微升酶提取液,600 微升水溶液。(Iio, Kawaguchi, Sakot
9、a, Otonari, &Nitahara, 1993).以測谷胱甘肽還原酶同樣的方式檢測谷胱甘肽 S -轉(zhuǎn)移酶(EC2.5.1.18) 。反應(yīng)介質(zhì)中包含1585 微升的 0.1M 的磷酸鉀緩沖液(pH 值 7.0) ,其中含 1 毫米的 EDTA,15 微升 150mM CDNB(1 -氯-2,4 二硝基苯) ,100 微升 75 mM 還原型谷胱甘肽(GSH) ,300 微升酶提取物(Iio et al., 1993).
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