混合側(cè)鏈磷脂酰甘油的酶催化合成及表面活性性能研究.pdf

1、磷脂酰甘油(Phosphatidylglycerol，簡稱PG)作為肺表面活性物質(zhì)的重要組分，能夠降低肺表面張力，能夠較好地維持肺泡結(jié)構(gòu)和功能的穩(wěn)定，在新生兒呼吸窘迫綜合癥等肺部疾病診療中具有應(yīng)用潛力。PG作為天然表面活性劑在組織防凍、皮膚養(yǎng)護(hù)等領(lǐng)域也有應(yīng)用前景。天然來源的PG同其他磷脂組分相同，結(jié)構(gòu)上呈現(xiàn)不同脂肪側(cè)鏈特點(diǎn)，動(dòng)植物組織含量低，來源有限。本文利用磷脂酶D(Phospholipase D，簡稱PLD)催化磷脂?；D(zhuǎn)移反應(yīng)，由

2、易于獲得的大豆磷脂酰膽堿（Phosphatidylcholine，簡稱PC）制備混合側(cè)鏈磷脂酰甘油（Different Fatty Acids Phosphatidylglycerol，簡稱DFA-PG），研究提高產(chǎn)品產(chǎn)率的反應(yīng)條件，以硅膠柱層析分離純化DFA-PG工藝過程;表征所制備DFA-PG的脂肪酸組成、表面活性劑特性及其聚集行為，為工業(yè)化生產(chǎn)及應(yīng)用提供參考。
　　通過單因素實(shí)驗(yàn)優(yōu)化雙液相體系中PLD催化磷脂?；D(zhuǎn)移反應(yīng)制備

3、DFA-PG條件，得出了適宜的反應(yīng)條件。有機(jī)溶媒為二氯甲烷，反應(yīng)溫度為28℃，底物甘油(Gl)與PC摩爾比(Gl∶PC)為190∶1，pH為5.5，兩相體積比（有機(jī)相∶水相）為2.5∶1。在此條件下進(jìn)行反應(yīng)，DFA-PG的產(chǎn)率達(dá)85.59％。在此基礎(chǔ)上，采用均勻試驗(yàn)進(jìn)行U12(121×63)混合水平試驗(yàn)設(shè)計(jì)考察因素間的交互作用，通過多元非線性回歸及響應(yīng)面分析進(jìn)一步優(yōu)選的反應(yīng)條件為:溫度30.5℃、底物摩爾比(Gl∶PC)190∶1、pH

4、5.5、兩相體積比（有機(jī)相∶水相）1.7∶1。在此條件下DFA-PG產(chǎn)率可達(dá)97.54％。
　　以100～200目柱層析硅膠為固定相，采用柱層析法對(duì)酶催化合成的DFA-PG進(jìn)行精制。優(yōu)化常溫常壓柱層析分離條件，結(jié)果顯示在洗脫液組成氯仿∶甲醇為2∶1(v/v)、上樣量為0.03g/g硅膠、流速為3mL/min、硅膠含水量為9％(wt)條件下得到的DFA-PG純度達(dá)97.6％，分離回收率為90.5％。同時(shí)，獲得純度達(dá)98.2％的高純P

5、C產(chǎn)品。通過氣相-質(zhì)譜聯(lián)用(GC-MS)分析DFA-PG和原料PC脂肪酸種類，結(jié)果表明，產(chǎn)物與原料均含有5種脂肪酸，且種類及含量一致。
　　表面活性劑特性表征顯示，Wilhelmy吊片法測定的DFA-PG臨界膠束濃度(CMC)為0.4904mg/mL，而純化的原料PC為1.4673mg/mL，水溶液表面張力分別為35.3mN/m和40.1mN/m，表明DFA-PG降低水表面張力的能力及效率均優(yōu)于PC;透射電鏡測試表明，DFA-PG