桑黃液體培養(yǎng)胞外酶產(chǎn)生及變化規(guī)律的研究

1、安徽農(nóng)業(yè)科學(xué) ， J o u r n a lo f A n h u iA． S c i ． 2 0 1 3 ， 4 1 ( 3 5 ) ： 1 3 4 7 2— 1 3 4 7 3 ， 1 3 5 0 9責(zé)任編輯 劉月娟 責(zé)任校對(duì) 李巖 桑 黃液 體培 養(yǎng)胞 外酶產(chǎn) 生及 變化 規(guī) 律 的研 究 許 謙( 菏 澤 學(xué) 院 生 命 科 學(xué) 系 ， 山 東 菏 澤 2 7 4 0 0 0 )摘要 [ 目的] 采用適 當(dāng)?shù)呐囵B(yǎng)基液體培養(yǎng)藥用真

2、菌桑黃， 每天固定時(shí)間測(cè)定培養(yǎng)液 中7種胞外酶酶活， 以了解不同酶的變化規(guī)律 ， 從而 推測(cè)桑黃對(duì)培養(yǎng)基中營(yíng)養(yǎng)物質(zhì)利用的能力。[ 方法] 利用分光光度計(jì) ， 采用不同酶的顯色反應(yīng)對(duì)各種酶的活性進(jìn)行測(cè)定。[ 結(jié)果] 在液 體培養(yǎng)過(guò)程 中， 桑黃不同胞外酶變化規(guī)律有所不同， 淀粉酶、 羧甲基纖維素酶、 纖維素酶、 果膠酶的酶活峰值分別出現(xiàn)在第 8 、 9 、 1 0 、 9天，漆酶、 愈創(chuàng)木酚酶、 多酚氧化酶的酶活峰值分別出現(xiàn)在第1 0

3、 、 1 O 、 1 1 天。[ 結(jié)論] 桑黃對(duì)不同營(yíng)養(yǎng)物質(zhì)的利用高峰不同。利用不同營(yíng)養(yǎng)物 質(zhì)的先后順序分別為淀粉、 半纖維素、 果膠、 纖維素及木質(zhì)素。這對(duì)桑黃培養(yǎng)基成分、 含量的確定及酶的獲得具有一定的指導(dǎo)意義。關(guān)鍵詞 桑黃； 液體培養(yǎng)； 胞外酶； 酶活 中圖分類 號(hào) S1 8 8文獻(xiàn)標(biāo)識(shí)碼 A文章編 號(hào) 0 5 1 7 — 6 6 1 1 ( 2 0 1 3 ) 3 5— 1 3 4 7 2 — 0 2F o r ma t i o

4、 no fE x o e n z y mea n dC h a n g i n gL a w si nL i q u i dC u l t u r eo fP h e U i n u s ~ i a r i u sX UQi a n ( D e p a r t m e n to fL i f eS c i e n c e s ， H e z eU n i v e r s i t y ， H e z e ， S h a n d o n g

5、2 7 4 0 0 0 )A b s t r a c t[ O b j e c t i v e ] T oa d o p tm o d e r a t ec u l t u r ef o rP h e l l i n u si g n i a r i u s ， t e s ta c t i v i t yo f7e x o e n z y m e si nl i q u i dc u l t u r ea tar e g u l a

6、rt i m e 。 o b —t a i nc h a n g el a w so fd i f f e r e n te n z y m e s ， a n di n f e rt h ec a p a c i t yo fP ．i g n i a r i u su s i n gn u t r i e n t si nl i q u i dc u h u r e ．[ Me t h o d ]U s es p e c t r o

7、p h o t o m e —t e r ， a n dc h r o m o g e n i cr e a c t i o no fd i f f e r e n te n z y m e st ot e s ta c t i v i t yo ft h ee n z y m e s ．[ R e s u l t ]I nl i q u i dc u l t u r e ， d i f e r e n te x o e n z y m

8、 e ss h o wd i f -f e r e n tc h a n g i n gl a ws ，a c t i v i t yp e a kv a l u eo fa my l a s e ， c a r b o x y me t h y lc e l l u l a s e ， c e l l u l a s ea n dp e c t a s ea p p e a r si nt h e8d a y ， 9d a y ，1

9、0d a y ，a n d9 恤 d a y ， t h a to fl a c c a s e ， g u a i a c o la n dp o l y p h e n o l o x i d a s ea p p e a r si nt h e1 0d a y，1 0 恤 d a y ， a n d11d a y ．[ C o n c l u s i o n ] P ．i g n i a r i u sU S e Sn u t r

10、 i e n t si nd i f e r e n tp e r i o d s ，a n dt h es e q u e n c ei ss t a rc h ，h e mi c e l l u l o s e ，p e c t i n ， c e l l u l o s e ， a n dl i g n i n ． T h es t u d yi ss i g n i f i c a n tf ord e f i n i n gc

11、 o m p o s i t i o n ，c o n t e n to fl i q u i dc u l t u r eo fi g n i a r i u s ，a n de n z y mea c q u i s i t i o n ．Ke ywo r d sP ． i g n i a r i u s ；L i q u i dc u l t u r e ；E x o e n z y me ；E n z y mea c t i v

12、 i t y桑黃菌( P h e l l i n u si g n i a r i u s ) 屬于擔(dān)子菌亞門層菌綱非褶 菌 目 刺革菌科針木層孔菌屬?。桑黃含有多糖、 黃酮、 三萜 類等生物活性成分 ] 。中醫(yī)用以治療血崩、 血淋、 帶下、 脾虛 泄瀉等 。它具有抑 制腫瘤 的生長(zhǎng) 、 轉(zhuǎn) 移且 低毒 等藥 理活 性 。桑黃提取物具有抗流感病毒的作用 。桑黃 由于 其特殊的生物學(xué)特性， 自然狀態(tài)下生長(zhǎng)周期長(zhǎng) ， 產(chǎn)量較低 ， 人

13、 工栽培技術(shù)要求也相對(duì)較高， 所以市場(chǎng)上桑黃子實(shí)體及其相 關(guān)產(chǎn)品出現(xiàn)供不應(yīng)求的局面。相關(guān)研究表明， 桑黃液體培養(yǎng) 的菌絲體與桑黃子實(shí)體有相似 的營(yíng)養(yǎng)成分 ， 菌絲體粗多 糖含量是子實(shí)體的 2 2 ． 4 8 倍¨。所以， 液體發(fā)酵生產(chǎn)桑黃菌 絲體成為桑黃研究利用的一個(gè)重要方 向。在桑黃液體培養(yǎng) 過(guò)程中各種胞外酶的產(chǎn)生及變化規(guī)律在一定程度上反 映桑 黃對(duì)培養(yǎng)基中各種營(yíng)養(yǎng)成分的利用規(guī)律。研究桑黃各種胞 外酶的產(chǎn)生及變化規(guī)律對(duì)桑黃各

14、種培養(yǎng)基成分的確定及對(duì) 各種酶 的準(zhǔn)確提取 具有一定 的指導(dǎo)意義 。1材料 與方 法 1 ． 1 試 驗(yàn)材料 1 ． 1 ． 1 菌種 。桑黃菌 ， 菏澤學(xué) 院微生物實(shí)驗(yàn) 室保藏 。1 ． 1 ． 2 培養(yǎng)基。P D A培養(yǎng)基： 馬鈴薯 2 0 0g ， 葡萄糖 2 og ， 瓊 脂 1 8g ， 蒸餾水 10 0 0m l ， p H 自然。液體培養(yǎng)基 ： 玉米粉 2 5g ， 麩皮 3 5g ， 硫酸鎂 0 ． 5g ， 磷酸二氫鉀

15、 1g ， p H自然。1 ． 2培養(yǎng)方法和樣品制備 1 ． 2 ． 1菌種活化 。將桑黃菌種接種在 P D A固體培養(yǎng)基平 板上， 在 2 8℃恒溫培養(yǎng)箱中連續(xù)培養(yǎng) 1 5d ?；痦?xiàng) 目菏澤學(xué) 院科研 基金科 技計(jì) 劃項(xiàng) 目( x y l O s w O 1 ) ； 菏 澤市科技 發(fā)展計(jì)劃項(xiàng) 目( 2 0 1 2 N 0 0 2 ) 。作者簡(jiǎn)介 許謙( 1 9 7 1 一) ， 女 ， 福 建闌侯人 ， 副教授 ， 從 事食 藥用茵

16、開(kāi)發(fā) 應(yīng) 用及微生物遺傳育種方面的研 究。收稿 日期 2 0 1 3 - 1 1 - 2 01 ． 2 ． 2菌絲培養(yǎng)。在 2 5 0m l 三角瓶 內(nèi)裝 1 0 0m l 液體培養(yǎng) 基 ， 向其中接人 2 8℃培養(yǎng) 1 5d的平板菌餅 2片( d= 1c m) ，1 6 0r ／ m i n ， 恒溫振 蕩培 養(yǎng) 。共 設(shè) 7個(gè)重 復(fù) ， 分 別從 不 同 的重 復(fù) 中取樣 。1 ． 2 ． 3粗 酶 液制 備 。每 天 用 5r n

17、 l 離心 管 定 時(shí)取 培養(yǎng) 液 4m l ， 封 口， 放 入離心機(jī) 中以 35 0 0r ／ m i n 離心 1 0w i n ， 上清液 為 粗酶液 。把粗酶液均分為 2 份 ， 一份直接用于酶活測(cè)定 ； 另 一 份在沸水中水浴 1 5w in 滅活 ， 冷卻后作為空白對(duì)照。1 ． 3酶活 的測(cè)定 1 ． 3 ． 1 淀粉酶酶 活 的測(cè)定。向試 管 中加 入 1 ． 5m l 濃 度 0 ． 5 ％的用 p H5 ． 8 ．

18、0 ． 1m o l ／ L乙酸鹽緩沖液配制的可溶性淀 粉溶液 ， 加 0 ． 5m l 粗酶液 ( 稀釋 1 O倍) ， 混勻 ， 3 8℃水浴 3 0m i n ， 取 出后立刻 加入 1 ． 5m lD N S試劑 ， 煮 沸 5m i n ， 取 出后冷卻 ， 加蒸餾水2 1 ． 5m 1 ， 混勻 ， 迅速用 7 2 3 型分光光度計(jì)在 5 2 0n m處測(cè) O D值 ， 以沸水滅 活 1 5w in的粗酶 液為對(duì) 照 ， 共

19、 設(shè) 3 個(gè)重復(fù)， 最后求平均值。酶活用樣品與底物反應(yīng) 3 0w in后 O D的改變值來(lái)表示。1 ． 3 ． 2羧 甲基纖維 素酶酶活 的測(cè)定 。 向試管 中加入 1 ． 5Ⅱ d濃度 0 ． 5 ％的用0 ． 1m o l ／ L 檸檬酸鹽緩沖液( p H4 ． 6 ) 配制的羧甲基纖維素鈉溶液， 加 0 ． 5H l 1 粗酶液 ( 稀釋 1 0 倍 ) ， 5 0℃ 水浴 3 0m i n ， 之后步驟同淀粉酶酶活的測(cè)定。1 ．

20、 3 ． 3纖維素酶酶活的測(cè)定。用濾紙測(cè)定纖維素酶的酶 活， 在試管內(nèi)放入一條新華 1 號(hào)濾紙， 然后加入 1 ． 0m l0 ． 1m o l ／ L 檸 檬酸緩 沖溶 液 ( p H4 ． 0 ) ， 加 1 ． 0r n l 粗酶 液 ， 5 0℃ 水 浴 6 0m i n ， 取出后立刻加入 1 ． 5m lD N S 試劑 ， 煮沸 5w i n ，取出后冷卻， 加蒸餾水至 2 5m l ， 混勻 ， 迅速用 7 2 3型分光

21、光 度計(jì)在 5 2 0n m處測(cè) O D值 ， 以沸水滅活 1 5m i n的粗酶液為 對(duì)照， 共設(shè) 3 個(gè)重復(fù)， 最后求平均值。酶活用樣品與底物反 應(yīng) 6 0m i n 后 O D的改變值來(lái)表示。4 l 卷 3 5期 蔣先林等 低緯高原馬鈴 薯脫毒 種薯標(biāo)準(zhǔn)化生產(chǎn)技術(shù) 4 ． 5 ． 4 ． 1捕殺成蟲。利用成蟲群集越冬 習(xí)性， 早春在越冬 場(chǎng)所可捕殺大量越冬成蟲。在 田間， 可利用成蟲的假死性 ，進(jìn)行人工捕殺。露地栽培可采用殺蟲燈

22、 以及性誘劑誘殺害 蟲。保護(hù)地栽培可采用防蟲網(wǎng)或銀灰膜避蟲 、 黃板( 柱) 以及 性誘劑誘殺害蟲。4 ． 5 ． 4 ． 2處 理 殘 株及 摘 除卵 塊 。及 時(shí)處 理 收 獲 后 的 馬鈴 薯、 茄子等殘株， 可消滅部分卵、 幼蟲和蛹。成蟲產(chǎn)卵及時(shí)摘 除卵塊可減輕危害。4 ． 5 ． 5化學(xué)防治。應(yīng)對(duì)癥下藥， 適期用藥， 交替使用適當(dāng)濃 度與藥量的不同的適用藥劑 ， 合理混配藥劑 ， 并確保農(nóng)藥施 用的安全間隔期。生育期內(nèi)經(jīng)常檢查

23、， 及時(shí)發(fā)現(xiàn)清除晚疫病 中心病株， 采用甲霜靈錳鋅灌塘并全 田噴霧防治， 病株燒毀 或遠(yuǎn)離 深埋 。根據(jù)各 點(diǎn)的蟲情 監(jiān)測(cè) 和 田間 系統(tǒng)調(diào) 查情 況 ， 及 時(shí)采用 1 0 ％吡蟲啉等藥劑防治蚜蟲。馬鈴薯田間主要病蟲 害藥劑防治方法見(jiàn)表 2 。馬鈴薯生產(chǎn)中， 禁止施用的高毒、 劇 表2 馬鈴薯 田閏主要病蟲害防治 防治對(duì)象 藥劑及劑量 防治時(shí)期 、 方法 毒、 高殘留和具有“ 三致” ( 致癌、 致畸、 致突變) 副作用的所有 農(nóng)藥

24、分別為甲胺磷、 甲基對(duì)硫磷 、 對(duì)硫磷、 久效磷 、 磷胺、 甲拌 磷 、 甲基異柳磷、 特丁硫磷、 甲基硫環(huán)磷、 治螟磷、 內(nèi)吸磷、 克 百威、 涕滅威、 滅線磷、 硫環(huán)磷、 蠅毒磷 、 地蟲硫磷、 氯唑磷、 苯 線磷等 。4 ． 6 收獲 、 包裝 、 貯存 嚴(yán)格按 照 “ 3 ． 4 ” 有關(guān)規(guī)定 執(zhí)行 。參考 文獻(xiàn) [ 1 ] 敖毅， 黃吉美， 王朝武， 等． 低緯度高海拔地區(qū) 產(chǎn) 技術(shù)[ J ] ． 中國(guó)馬鈴薯， 2 0 o

25、9 ( 4 ) ： 2 4 0 — 2 4 2 ．[ 2 ]黃吉美， 敖毅 ， 鐘文翠 ， 等． 滇東高原馬鈴薯脫毒種薯標(biāo)準(zhǔn)化生產(chǎn)技術(shù) [ J ] ． 中國(guó)種業(yè)， a ~ 9 ( 8 ) ： 7 1 - 7 2 ．[ 3 ] 虎彥芳． 滇東高原 [ J ] ． 現(xiàn)代農(nóng)業(yè)科技 ，2 0 o 9 ( 1 5 ) ： 1 0 5— 1 0 6 ．[ 4 ]吳慧中． 脫毒微型馬鈴薯生產(chǎn)技術(shù)研究[ J ] ． 天津農(nóng)林科技 ， 2 O L O

26、( 5 ) ： 5～ 7．[ 5 ] 黃吉美， 陳興龍， 饒彥章， 等． 滇馬鈴薯5 號(hào)無(wú)公害栽培技術(shù)[ c ] ／ ／ 中國(guó) 作物學(xué)會(huì)馬鈴薯專業(yè)委員會(huì)． 2 0 0 6 年中國(guó)作物學(xué)會(huì)馬鈴薯專業(yè)委員會(huì) 年會(huì)暨學(xué)術(shù)研討會(huì)論文集． 中國(guó)作物學(xué)會(huì)馬鈴薯專業(yè)委員會(huì) ， 2 0 0 6 ： 2 ．[ 6 ]劉衛(wèi)平． 馬鈴薯脫毒原原種的生產(chǎn)技術(shù) [ J ] ． 中國(guó)農(nóng)村小康科技 ， 2 O O 6( 8 ) ： 3 2 ， 5 0 ．[ 7 ]丁

27、俊杰． 佳木斯地區(qū)脫毒馬鈴薯原原種生產(chǎn)技術(shù)[ J ] ． 農(nóng)業(yè)與技術(shù) ， 2 0 0 6( 4 ) ： 1 2 0— 1 2 1 ．[ 8 ] 王麗紅． 網(wǎng)室脫毒馬鈴薯原原種生產(chǎn)管理技術(shù)[ J ] ． 農(nóng)村實(shí)用技術(shù) ， 2 O O 8( 1 ) ： 3 4— 3 5 ．[ 9 ]王正周． “ 會(huì)—2 號(hào)” 脫毒馬鈴薯原原種生產(chǎn)技術(shù) [ J ] ． 農(nóng)村實(shí)用技術(shù)，2 0 O 6 ( 5 ) ： 2 2 - 2 3 ．‘[ 1 O ] 顏謙

28、， 雷尊國(guó)， 黃萍， 等． 貴 { 、 嗎鈴薯脫毒原原種高效生產(chǎn)技術(shù)[ J ] ． 貴 帥 I 農(nóng)業(yè)科學(xué)， 2 O 0 9 ( 1 1 ) ： 3 0 — 3 1 ．[ 1 1 ] 劉慧萍， 李莉 ， 溫淑萍． 脫毒馬鈴薯原原種網(wǎng)室生產(chǎn)技術(shù)[ J ] ． 甘肅農(nóng)業(yè) 科技 ， 2 o o 4 ( 6 ) ： l 8 — 1 9 ．[ 1 2 ]孔德鵬． 脫毒馬鈴薯原原種栽培 基質(zhì)的研究與應(yīng)用 [ D ] ． 石河子 ： 石河 子大學(xué) ，

29、 2 01 1 ．( 上接 第 1 3 4 7 3頁(yè))[ 2 ] 齊欣． 珍稀藥用真菌—一桑黃[ M] ． 天津： 天津科技翻譯出版公司，2 0 0 9 ． 2 4 —3 0．『 3 ]H URJM． Y A N GCH。 H A NSH。 e ta 1 ． A n t i b a c t e r i a le f e c to fl i n u sz i n t e u sa g a i ns t m e t h i c i l l

30、i n — r e s i s t a n tS t a p h y l o c o c c u sa l l $ ' e l l ~ [ J ] ． F i t o t e r a p i a ，2 0 o 4 ． 7 5 ( 6 ) ： 6 0 3— 6 3 5 ．[ 4 IA J 刪 TA ， J A N A R D H A N A NKK ． C y t o t o x i ca n da n t i t u mo ra

31、 e t i v i t i e so f ap o l y p o r em a c m f u n g ns ， P h e l l i n u sr i m o s u s ( B e r k ) P i l a t [ J ] ． J o u r n a lo fE t l l —n o p h a r m a c o l o g y ， 2 0 O 3 ， 8 4 ( 2 ) ： 1 5 7 ．『 5 ]ⅪMHM， H A N

32、SB． O HGT． e ta 1 ． S t i mu l a t i o no fh u m o r a la n dc e l l m e d i a -t e di m m u n i t yb yp o l y s a c c h a r i d ef r o m m n sh r o o mf 2 i n n s2 i n t e u s『 J ] ． I n tJI mmu n o p h a r ma c o l 。 1

33、 9 9 6， 1 8： 2 9 5—3 0 4 ．[ 6 ] H A NSB ， L E ECW， J E 0 NYJ ， e ta 1 ．e i n h i b i t o r y e fe ct o fp o l y s a c e h a -r i d e s i s o l a t e d f r o mf 2 i n u s l i n t e u s o nt u m o rg r o w t ha ndme t

34、a s t a s i s lJI ．I mmu n o p h a nn a e o l o g y ， l 9 9 9． 41 ： 1 5 7—1 6 4 ．[ 7 1U G， I ( I MD， ⅪM T， e ta 1 ． P r o t e i n ． b o u n dp o l y s a c c h a r i d ef r o m 瓏M l i n t e u s i n d u c e s 2 ／ M

35、p h a s ea r r e 8 ta n da p o p t o s i si nS Wl 伽 h u ma n c o l o nc a n c e rc e l l s [ J ] ． C a nc e rL e t t ， 2 0 0 4 ， 2 1 6 ： 7 5 — 1 8 1 ．[ 8 ] I ( I MGY， L E EJ Y ， L E EJO ， e t a 1 ． P a r t i a lc h a r

36、 a e t e r i z a t i o na nd i m m u ne s —t i m u l a t o r ye f e cto f an o v e lp o l y s a c c h a r i d e — p r o t e i nc o m p l e xe x t r a c t e d f r o m m 岱l i n t e u s IJ1 ． B i o s c iB i o t e ch n o

37、lB i e c h e m， 2 0 O 6 ， 7 0 ： 1 2 1 8 — 1 2 2 6 ．『 9 ] s L I V AD ． K A W A S蝴 J ， S T A N L E YG 。 e ta 1 ．l ／ n t e u si n h i b i t sg r o w t ha n di n v a s i v eb e h a v i o ro fb r e a s tc a n c e rc e lst h r

38、 o u g ht h es u p p r e s s i o no fA k ts i g n a l i n g [ J ] ． F A S E BJ ， 2 0 O 6 ， 2 0 ： 5 5 9 — 5 6 0 ．f 1 0 1M0 R A D A U M F， M0 s ， n． A Ⅵ H， G H 0 D SS ， e ta 1． I m mu n o n o d u l a t i n ga nda n t i e

39、 a n c e ra g e n t si nt h er e a l mo fm a c r o m y c e t e s( m a c r o f u n g i )lJI ． I n tI m m u n o p h a r m a e o l ， 2 0 O 7 ， 7 ： 7 0 1 — 7 2 4 ．1l 1lD O N GW， N I N GL， L IW D， e ta 1 ． T u mo r - i n h i

40、 b i t o r ya ndl i v e r ． p r o t e c t i v ee f e c t so fl l i n u si g n i a r i u se x t r a c e l l u l a rp o l y s a c c h a r i d e s ¨] ． w0 r l dJMi e mb i o lB i o t e ch n o l ， 2 0 0 9 ， ( 2 5 ) ： 6 3

41、 3— 6 3 8 ．11 2lL E ES ， l ( I MJ ， H E OJ ， e ta 1 ．ea nt i — i n f l u e n z av i r u se f e cto fl l i n u si g n i a r i u se x t r a c t [ J ] ． J o u r n a lo f M i c r o b i o l o g y ， 2 01 3 ， 5 1 ( 5 ) ： 6 7 6

42、— 6 8 1 ．1 1 3 I ’ ⅪA 0J H， C H E NDX ， W A NW H ， e t a 1 ． E n ha nc e d s i m u l t a n e o u sp r o d u c ．t i o no f my c e l i aa n di n t r a c el l u la rp o l y s a c c h a r i d ei ns u b me r g e d c u l t

43、 i v a t i o no fC o r d y c e p sj i a n g x i e n s i su s i n gd e s i r a b i l i t yf u n c t i o n s [ J ] ． P r o c e s sB i o -c h e mi s t r y， 2 0 0 6． 41 ： 1 8 8 7—1 8 9 3 ．[ 1 4 ] 王莢輝 ， 許泓瑜 ， 敖宗華 ， 等． 桑黃發(fā)酵菌粉與

44、桑黃子實(shí)體成分分析比 較[ J ] ． 食品與發(fā)酵工業(yè)， 2 O O 8 ， 3 4 ( 2 ) ： 1 2 6 — 1 2 9 ．[ 1 5 ] 張龍翔． 生化實(shí)驗(yàn)方法和技術(shù)[ M] ． 北京： 人民教育出版社 ， 1 9 8 3： 9 一l 1 ． 3 7 1—3 7 5 ．[ 1 6 ] 謝麗源 ， 鄧科君 ， 張勇， 等． 桑黃深層發(fā)酵胞外酶 活性 的測(cè)定 與分析 [ N ] ． 食品工業(yè)科技報(bào)， 2 01 0 — 1 1 —

45、 0 7 ．11 7lS HO NYH， N A MKS ． A n t i mu t a g e n ic i t va ndi n d u c t i o no fa nt i c a r c i n o g e n i sp h a s e Ⅱ e n z y m e sb y b a s i d i o m y c et e s [ J ] ． J o u r n a lo fE t h n o p h a r m a c o

46、 l o g y ，2 0 0 1 ． 7 7： 1 0 3一l 0 9 ．[ 1 8 ]王宜磊．究[ J ] ． 微生物學(xué)雜志． 2 1 3 0 22 2 ( 1 ) ： 3 4— 3 5[ 1 9 ] 初洋 ， 倪新江 ， 楊桂文 ， 等． 姬菇和鮑魚菇生長(zhǎng)期間 8 種胞外酶活性變 化比較 [ J ] ． 煙臺(tái)大學(xué)學(xué)報(bào) ： 自然科學(xué) 與工程版 ， 2 O O 8 ， 2 1 ( 2 ) ： 1 3 8 —1 4 1 ．[ 2 o ]