鐮形棘豆中239;，439;二羥基查耳酮抗腫瘤作用機(jī)理初步研究及其含量測(cè)定

1、南京中醫(yī)藥大學(xué)碩士學(xué)位論文鐮形棘豆中2'，4'-二羥基查耳酮抗腫瘤作用機(jī)理初步研究及其含量測(cè)定姓名：樓成華申請(qǐng)學(xué)位級(jí)別：碩士專(zhuān)業(yè)：中藥學(xué)指導(dǎo)教師：蔡寶昌20090601——一一塑室! 墾塹奎堂墮主堂篁笙蘭A B S T R A C TI nt h i ss t u d y , f l a v o n o i d si s o l a t e df r o mO x y t r o p i s f a l c a t eh

2、 e r bw e r es c r e e n e do nh u m a nh e p a t o c e l l u l a r c a l l c e rS M M C 一7 7 2 1 c e l l s ，h u m a n g a s t r i c c a n c e r M G C ．8 0 3 c e l l s ．h u m a nc e r v i xc a n c e rH e l ac e l l s ，h

3、u m a nl u n gc a n c e rA 5 4 9c e i l s ，h u m a nc o l o n c a n c e rL o 、bc e I I sa n d h u m a nm a m m a r y a d e n o c a r c i n o m aM D A - M B 一2 3 1 t o s e a r c hf o ra n t i ．t u m o rd r u g s ．2 ’．4 &#

4、39; - d i h y d r o x yc h a l e o ，n ew a s f o u n d t ob em u c h e f f e c t i v et oh u m a n g a s t r i cc a n c e r M G C ．8 0 3c e l l s ．W ee x a m i n e dt h e a n t i —t u m o re f f e c t a n dp o s s i b l

5、em e c h a n i s m o f2 ，，4 ' - d i h y d r o x yc h a l c o n e i nh u m a n g a s t r i c c a n c e r M G C 一8 0 3c e l l s a n d i t sp o s s i b l em e c h a n i s m ．W es t u d i e di n h i b i t o r ye f f e c

6、to f 2 ’，4 ’．d i h 【y d r o x y c h a l c o n eo np r o l i f e r a t i o no f h 啪a I lg a s t r i cc a n c e rM G C 一8 0 3c e l l sw i t hd i f f e r e n tc o n c e n t r a t i o n ．A n dw ea l s os t u d i e da p o p t

7、 o s l ’so fh u m a n g a s t r i cc a n c e r M G C 一8 0 3c e l l s i n d u c e db y 2 ’，4 ' - d i h y d r o x yc h a l c o n ea n d f u r t h e ri n v e s t i g a t ei t sm o l e c u l a rm e c h a n i s m s ．T h e

8、i n h i b i t o r ye f f e c t so f 2 ’，4 ' - d i l a y d r o x yc h a l c o n ei nd i f f e r e n tc o n c e n t r a t i o ni nd i f f e r e n te x p o s u r et i m eo nh u m a n g a s t r i cc a n c e rM G C ．8 0 3

9、c e l l sw e r ea n a l y z e d b yM T T a s s a y ．A O ／E Bs t a i n i n g ，H o e c h s t 3 3 2 5 8s t a i n i n g ，t r a n s m i s s i o ne l e c t r o n m i c r o s c o p y ( T E M ) a n da g a r o s eg e le l e c t r

10、 o p h o r e s i s ( A G E ) w e r ep e r f o r m e dt oe v a l u a t e t h e i n h i b i t o r ya n d a p o p t o t i ce f f e c t s o f 2 ’，4 ' - d i h y d r o x yc h a l c o n e o nM G C ．8 0 3c e l l s ·C e

11、l lc y c l ea n d a p o p t o s i s r a t ew e r e a n a l y z e db yf l o wc y t o m e t r y ( F C M ) ．T r a n s c r i p t i o nl e v e lo f s u r v i v i nW a s d e t e c t e d b yR T - P C R ．F u r t h e r m o r e ，t

12、 h ea c t i v i t yo f c a s p a s e ．3w a s a l s od e t e c t e d ．R e s u l t ss h o w e dt h eg r o w t hi n h i b i t i o no f 2 ’，4 ' - d i h y d r o x yc h a l c o n eo nh u m a ng a s t r i cc a n c e rM G C

13、一8 0 3c e l l sW a s d o s e —d e p e n d e n t a n d t i m e ．d e p e n d e n t ，a n d t h e I C 5 0v a l u eo f 2 ’，4 ' - d i h y d r o x ye h a l c o n ea t4 8 h W a s 5 ．9 8 “g ／m 1 ．2 ’，4 ' - D i h y d r o x

14、 yc h a l c o n e w a s p r o v e dt oc a u s ea p o p t o s i so f h u m a n g a s t r i cc a n c e rM G C - 8 0 3c e l l s a n dm a n yt y p i c a la p o p t o t i cm o r p h o l o g i c a lf e a t u r e sw e r e f o u

15、 n d ，s u c h a ss h l ' t ／n ka n d d i s t o r t e dc e l l s ，t h er e d u c e d v o l u m e ．t h ea p o p t o t i cb o d i e s a n d t h ec r e s c e n to rp i e c el i k e c e l l n u c l e u s e s ．H o w e v e

16、r , D N A l a d d e rw a s n o t f o u n di na g a r o s eg e le l e c t r o p h o r e s i sp i c t u r e s ．A p o p t o s i sr a t e o fh u m a ng a s t r i cc a n c e rM G C 一8 0 3c e l l sw a s i n c r e a s e da l o

17、n g w i t h t h ei n c r e a s eo f 2 ，，4 ' - d i h y d r o x yc h a l c o n ec o n c e n t r a t i o n ．W h e nt r e a t e dw i t h51 ．t g ／m l ' - - 2 0 J _ t g ／r r d 2 ’，4 ' - d i h y d r o x yc h a l c o

18、 n ef o r4 8 h ，M G C - 8 0 3 c e l l s w e r e a r r e s t e d a t G 2 ／M p h a s e ．M e a n w h i l e ，s u r v i v i n e x p r e s s i o n a tt r a n s c r i p t i o n W a Sd e c r e a s e d i na d o s e - d e p e n d

19、e n t m a n n e LF u r t h e r m o r e ，t h e a c t i v i t y o fc a s p a s e - 3W a s i n c r e a s e d ．I n a d d i t i o n ，w e e s t a b l i s h e d a na n a l y t i c a l m e t h o df o r “ q u a n t i t a t i v e

20、l y d e t e r m i n i n g t h ec o n t e n to f 2 ’，4 ' - d i h y d r o x yc h a l c o n ei nT i b e t a nM e d i c i n eH e r b aO x y t r o p i sb yR P ．H P L C 。T h e a v e r a g e c o n t e n to f 2 ’，4 ' - d