蛋白激酶c調(diào)控人tenon39;s囊成纖維細(xì)胞增生的分子機(jī)制

1、中山大學(xué)碩士學(xué)位論文蛋白激酶C調(diào)控人Tenon's囊成纖維細(xì)胞增生的分子機(jī)制姓名：馬萍申請學(xué)位級(jí)別：碩士專業(yè)：眼科學(xué)指導(dǎo)教師：余克明20060501蛋白激酶C 調(diào)控人T e n o n ’S 囊成纖維細(xì)胞增生的分子機(jī)制 摘要與口錄M M C ( 0 ．4 m g f m l 、0 ．2 m g ／m l 、01m g ／m l 、O0 5 m g ／m 1 ) 和s i R N A - - P K C a ( 2 0 n M 、

2、5 0n M 、1 0 0 n M 、2 0 0 n M ) 分別作用于H T F 細(xì)胞，同時(shí)設(shè)有空白對(duì)照組，然后用M T T 法檢測M M C 作用及R N A 干擾后對(duì)成纖維細(xì)胞增殖能力的影響，繪制其量效曲線；并檢測s i R N A - - P K C 。轉(zhuǎn)染后部分細(xì)胞因了的改變。結(jié) 果1 、體外成功培養(yǎng)正常H T F 細(xì)胞，細(xì)胞呈長梭形，胞漿豐富，核大，生長能力強(qiáng)，呈旋渦狀或羽毛樣生長，V i m e n t i n 、F N

3、胞漿染色陽性，角蛋白染色I(xiàn) { } j 性。2 、發(fā)現(xiàn)H T F 細(xì)胞中1 2 種P K C 亞型在細(xì)胞、蛋白及基因3 種不同水平上均有基本相似的表達(dá)結(jié)果。L S C M 、R T - P C R 、W e s t e r n b l o t 發(fā)現(xiàn)在H T F 細(xì)胞中有P K C 。，P K C 6 ．P K C 。．P K C n ，P K C I ．P K C ^ ．P K C f , 和P K C u 等8 種亞型的分布，未見P

4、K C I j I ，P K C 口H ．P K C v ．P K C e 的表達(dá)；免疫細(xì)胞熒光方法同時(shí)可以看到表達(dá)蛋白在細(xì)胞中主要分布于胞漿部分。3 、設(shè)計(jì)合成的s i R N A 經(jīng)篩選獲得1 條較為高效的s i R N A ；體外培養(yǎng)的成纖維細(xì)胞經(jīng)R N A 干擾后2 4 小時(shí)，R T - P C R 檢測顯示：P K C 。的m R N A 受到了明顯抑制。4 、R T - P C R 檢測結(jié)果示：分別上調(diào)、下調(diào)P K C 。的

5、表達(dá)，發(fā)現(xiàn)C D K l 、C D K 2 、c y c l i n B 2 、c y c l i n D l 、c y c l i n D 3 、c y c l i n E l 、p 2 1 、p 1 9 、p 1 8 、R b 等細(xì)胞周期相關(guān)因子m R N A 水平發(fā)生了改變。5 、M T T 法結(jié)果顯示：M M C 和s i R N A - - P K C 。作用于體外培養(yǎng)的H T F 細(xì)胞后對(duì)細(xì)胞的增殖均有明顯抑制作用。M M

6、C 濃度為00 5 m g ／m l 、0 ．1 m g ／m l 、0 , 2m g ／m l 、O ．4 m g ／m l 時(shí)的抑制率分別為4 7 ．9 8 ％、5 98 1 ％、7 97 5 ％、8 50 5 ％，靶向R N A 干擾抑制P K C 。的轉(zhuǎn)染濃度為2 0 n M 、5 0n M 、1 0 0 n M 、2 0 0 n M 時(shí)的抑制率分別為4 2 1 ％、1 4 ．4 7 ％、3 91 9 ％、4 10 3 ％。但M