煙酰胺單核苷酸腺苷酰轉(zhuǎn)移酶1(nmnat1)對(duì)mes23.5帕金森病細(xì)胞模型的保護(hù)作用

1、煙酰胺單核苷酸腺苷酰轉(zhuǎn)移酶1 ( N M N A T l ) 對(duì)M E S 2 3 ．5 帕金森病細(xì)胞模型的保護(hù)作用目的：探討煙酰胺單核苷酸腺苷酰轉(zhuǎn)移酶1 ( 卜瓜刪A T l ) 基因表達(dá)對(duì)帕金森病( P D ) 細(xì)胞模型M E S 2 3 ．5 細(xì)胞軸突長(zhǎng)度及半胱氨酸蛋白酶3 ( C a s p a s e 3 ) 、超氧化物歧化酶I ( S O D l ) 表達(dá)的影響。方法：應(yīng)用細(xì)胞轉(zhuǎn)染、免疫熒光及W e s t e r n 印跡

2、分析等方法，在制作P D 細(xì)胞模型前向1 2 孔板內(nèi)分別轉(zhuǎn)染N M N A T l 高表達(dá)空載質(zhì)粒、N M N A T l 高表達(dá)質(zhì)粒、N M N A T l 干擾空載質(zhì)粒及N M N A T l 干擾質(zhì)粒，并檢測(cè)N M N A T l 高表達(dá)正常組、高表達(dá)陽(yáng)性組、高表達(dá)陰性組、N M N A T l 干擾正常組、干擾陽(yáng)性組和干擾陰性組以上6 組M E S 2 3 ．5 細(xì)胞軸突長(zhǎng)度變化及C a s p a s e 3 蛋白、S O D

3、 l 蛋白的半定量表達(dá)。結(jié)果：與N M N A T I 高表達(dá)( 干擾) 正常組比較，N M N A T l 高表達(dá)( 干擾) 陰性組細(xì)胞軸突長(zhǎng)度顯著縮短，且其C a s p a s e 3 表達(dá)量明顯增加，S O D l 表達(dá)量減少，差別具有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義；與N M N A T l 高表達(dá)( 干擾) 陰性組比較，N M N A T l 高表達(dá)陽(yáng)性組細(xì)胞軸突長(zhǎng)度明顯延長(zhǎng)，且C a s p a s e 3 表達(dá)量顯著下降，S O D l 表達(dá)

4、量增加，差別具有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義，N M N A T l 干擾陽(yáng)性組軸突長(zhǎng)度變短，C a s p a s e 3 表達(dá)量上升，S O D l 表達(dá)量下降，差別具有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義。結(jié)論：細(xì)胞凋亡及氧化應(yīng)激在P D 軸突損傷過(guò)程中發(fā)揮重要作用，而N M N A T l能夠有效抑制凋亡蛋白C a s p a s e 3 表達(dá)、增加S O D l 表達(dá)，并明顯延緩軸索損傷，從而在一定程度上具有神經(jīng)保護(hù)作用。碩士研究生：李春燕( 神經(jīng)病學(xué))指導(dǎo)教師 ：謝安

5、木教授關(guān)鍵詞：煙酰胺單核苷酸腺苷酰轉(zhuǎn)移酶1 ；基因高表達(dá)；帕金森?。惠S突損傷目 錄弓l 言??????????????????????????????????????????????????”l第一章煙酰胺單核苷酸腺苷酰轉(zhuǎn)移酶1 ( N M N A T l ) 對(duì)M E S 2 3 ．5 帕金森病細(xì)胞模型的保護(hù)作用?????????????????????????????????????????????????????·21

6、實(shí)驗(yàn)材料????????????????????????????????????????????????·21 ．1 M E S 2 3 ．5 細(xì)胞????????????????????????????????????????????”21 ．2 轉(zhuǎn)染質(zhì)粒????????????????????????????????????·21 ．3 實(shí)驗(yàn)試劑??????????????????????????????????

7、??21 ．4 實(shí)驗(yàn)儀器???????????????????????????????????????????????·32 實(shí)驗(yàn)方法?????????????????????????????????????32 ．1 M E S 2 3 ．5 細(xì)胞培養(yǎng)????????????????????????????????32 ．2 質(zhì)粒D N A 的轉(zhuǎn)化及小量提取???????????????????????????32 ．3 細(xì)

8、胞轉(zhuǎn)染????????????????????????????????????52 ．4 免疫印跡實(shí)驗(yàn)?????????????????????????????????”62 ．5 免疫熒光檢測(cè)和I 虱像分析????????????????????????????·92 ．6 統(tǒng)計(jì)學(xué)分析??????????????????????????????????”9第二章實(shí)驗(yàn)結(jié)果????????????????????????????

9、??????92 ．1 不同質(zhì)粒轉(zhuǎn)染M E S 2 3 ．5 細(xì)胞后N M N A T l 蛋白水平的變化??????????????”92 ．2 不同表達(dá)水平N M N A T l 對(duì)帕金森病細(xì)胞模型M E S 2 3 ．5 軸索長(zhǎng)度的影響????????·1 02 ．3N M N A T l 對(duì)M E S 2 3 ．5 細(xì)胞C a s p a s e 3 、S O D l 表達(dá)的影響???????????????l 1第三

10、章討論???????????????????????????????????·l 3結(jié) 論????????????????????????????????????????????????一1 5參考文獻(xiàn)????????????????????????????????????”l 6綜述??????????????????????????????????????????????????·1 8綜述的參考文獻(xiàn)??????

11、????????????????????????????2 3附 錄?????????????????????????????????????????????一3 0攻讀學(xué)位期問(wèn)發(fā)表的論文、參加的會(huì)議和參與的課題情況???????????????·3 1致 謝???????????????????????????????????????????????3 2學(xué)位論文獨(dú)創(chuàng)性聲明??????????????????????????