血管活性腸肽納米粒的制備及其對帕金森病細(xì)胞模型保護(hù)作用的研究.pdf

1、帕金森病是繼老年癡呆癥之后世界第二大威脅人類健康的神經(jīng)退行性疾病,已經(jīng)嚴(yán)重影響1～2％老年人口的生活質(zhì)量。隨著生物醫(yī)學(xué)技術(shù)的迅速發(fā)展,目前已經(jīng)發(fā)現(xiàn)許多對中樞疾病(如帕金森病、老年癡呆癥)具有治療活性的多肽和蛋白類藥物。但血腦屏障的存在,很大程度上限制了這些藥物的臨床給藥和治療作用的發(fā)揮。因此,研究多肽和蛋白類藥物的新型給藥系統(tǒng),具有很大的研究價值和社會意義。
　　 血管活性腸肽(VIP)是具有重要調(diào)節(jié)作用的神經(jīng)多肽,它對帕金森病

2、和老年癡呆癥的防治都有較好的作用。但是血管活性腸肽在體內(nèi)的半衰期較短,穩(wěn)定性差,不易透過血腦屏障,因此和其他內(nèi)源性多肽一樣,其臨床運(yùn)用受到限制。因此本課題目的在于研究包封血管活性腸肽的納米粒及其體外神經(jīng)保護(hù)作用。
　　 本論文主要包括以下內(nèi)容:
　　 1.VIP體外方法學(xué)的建立和穩(wěn)定性考察。利用高效液相色譜法對VIP的含量進(jìn)行測定,研究了VIP多肽的穩(wěn)定性。結(jié)果表明:VIP在-80℃下保存最穩(wěn)定,至少可保存一個月不降解,

3、故該藥制成制劑宜冷凍保存。在室溫(～25℃)范圍內(nèi)、pH值2.0～7.0之間以及攪拌速度為800～1000 rpm攪拌4 h的條件下,制備成的納米粒不會影響VIP的穩(wěn)定性。
　　 2.納米粒的制備。采用改良的乳化聚合法制備納米粒,對表面活性劑的種類和用量、載體材料的用量、藥物與材料比例、pH值等進(jìn)行單因素實(shí)驗(yàn)考察;采用正交設(shè)計優(yōu)化處方,確定最佳處方,得到粒徑為147.7 nm,包封率為95.3％,載藥量為4.77％的聚山梨酯-8

4、0(Polysorbate80,P80)修飾的VIP納米粒。同時制備了可以被SH-SY5Y細(xì)胞攝取的FITC納米粒,為下一步體外藥效學(xué)研究奠定基礎(chǔ)。
　　 3.VIP納米粒體外藥效學(xué)研究。在體外細(xì)胞模型實(shí)驗(yàn)中,以6-羥基多巴胺(6-OHDA)誘導(dǎo)SH-SY5Y細(xì)胞凋亡成功建立了帕金森病細(xì)胞模型。實(shí)驗(yàn)結(jié)果顯示:制備的聚山梨酯-80修飾的納米粒無細(xì)胞毒性。聚山梨酯-80修飾的VIP納米粒顯著提高了6-OHDA誘導(dǎo)的SH-SY5Y細(xì)胞