涼膈散經(jīng)膽堿能信號(hào)通路拮抗lps致raw264.7細(xì)胞損傷機(jī)制研究

1、南方醫(yī)科大學(xué)2 0 1 3 級(jí)碩士學(xué)位論文涼膈散經(jīng)膽堿能信號(hào)通路拮抗L P S 致R A W 2 6 4 ．7 細(xì)胞損傷機(jī)制研究L i a n g - - G e - - S a nA t t e n u a t e s I n f l a m m a t i o nt h r o u g h C h o l i n e r g i c A n t i —i n f l a m m a t o r y P a t h w a y i n

2、L P S —s t i m u l a t e dR A W 2 6 4 ．7M a c r o p h a g e C e l l s課題來源：國家自然科學(xué)基金資助項(xiàng)目( N o ．8 1 3 7 3 5 3 9 )學(xué)位申請(qǐng)人導(dǎo) 師 姓 名專 業(yè) 名 稱培 養(yǎng) 類 型培 養(yǎng) 層 次所 在 學(xué) 院韋細(xì)端余林中教授中藥學(xué)學(xué)術(shù)型碩士研究生中醫(yī)藥學(xué)院2 0 16 年4 月1 5 日廣州摘要涼膈散( 載于宋代《太平惠民和劑局方》) 為溫病治療

3、常用名方，由體現(xiàn)清法的黃芩、連翹、山梔子、薄荷和體現(xiàn)下法的大黃、芒硝、甘草組成，具有瀉火通便、清上瀉下功效。該方原用于臟腑積熱聚于胸膈所致的上中二焦火熱證候，是中醫(yī)方劑中“以瀉代清”的清熱瀉火名方。涼膈散臨床上常用于治療咽炎、口腔炎、扁桃體炎、肺炎等呼吸道炎癥，這與中醫(yī)上涼膈散用于上中二焦邪郁生熱癥相吻合?，F(xiàn)代藥理研究發(fā)現(xiàn)，中醫(yī)的清熱瀉火與西醫(yī)的抗炎有著異曲同工之妙。多年來，中醫(yī)藥研究者借助現(xiàn)代先進(jìn)的藥理手段尤其是免疫學(xué)和分子生物學(xué)的方

4、法，對(duì)涼膈散的抗炎藥理作用進(jìn)行深入研究。本課題組一直致力于對(duì)涼膈散的抗炎免疫機(jī)理進(jìn)行研究，發(fā)現(xiàn)該方能明顯抑制內(nèi)毒素( L P S ) 所致大鼠急性肺損傷，包括降低肺干濕重比例以及肺通透性，抑制肺水腫，調(diào)節(jié)肺泡灌洗液炎癥因子T N F ．伐、I L ．1 B 、I L ．6 的表達(dá)I l 4 1 。本文將進(jìn)一步研究涼膈散體外抗炎免疫機(jī)理，探討涼膈散經(jīng)由膽堿能抗炎信號(hào)通路拮抗L P S 誘導(dǎo)小鼠腹腔巨噬細(xì)胞R A W 2 6 4 ．7 產(chǎn)生

5、的炎癥損傷機(jī)制。目的通過體外培養(yǎng)小鼠腹腔巨噬細(xì)胞R A W2 6 4 ．7 ，利用L P S 誘導(dǎo)細(xì)胞產(chǎn)生炎癥模型，研究清熱瀉火經(jīng)典方劑涼膈散通過膽堿能抗炎信號(hào)通路對(duì)L P S 誘導(dǎo)的R A W 2 6 4 ．7 損傷的作用機(jī)制。方法1 ．噻唑藍(lán)法評(píng)價(jià)涼膈散的細(xì)胞毒性噻唑藍(lán)法( M T T ) 評(píng)價(jià)涼膈散對(duì)小鼠腹腔巨噬細(xì)胞R A W 2 6 4 ．7 的2 4 小時(shí)細(xì)胞毒性；以及L P S ( 1 g g ／m L ) 與非毒劑量涼膈散

6、共同作用2 4 小時(shí)后的細(xì)胞毒性。2 ．酶聯(lián)免疫吸附試驗(yàn)檢測(cè)炎癥因子表達(dá)酶聯(lián)免疫吸附法( E L I S A ) 檢測(cè)非毒劑量涼膈散( 2 5 ，5 0 ，1 0 0 ，2 0 0 ，4 0 0 g g ／m 1 )對(duì)細(xì)胞炎癥因子I L ．6 和T N F ．c 【表達(dá)的影響；非毒劑量涼膈散( 2 5 ，5 0 ，1 0 0 ，2 0 0 ，4 0 0 g g ／m 1 ) 與L P S ( 1p ．g ／m L ) 共同作用R A W