槲皮素抑制巨噬細(xì)胞raw264.7內(nèi)質(zhì)網(wǎng)應(yīng)激凋亡途徑的機(jī)制研究

1、泰山醫(yī)學(xué)院碩士學(xué)位論文槲皮素抑制巨噬細(xì)胞RAW264.7內(nèi)質(zhì)網(wǎng)應(yīng)激凋亡途徑的機(jī)制研究姓名：岳雯申請(qǐng)學(xué)位級(jí)別：碩士專(zhuān)業(yè)：病理學(xué)與病理生理學(xué)指導(dǎo)教師：王家富；商戰(zhàn)平2011-123 ．為確定c a v ．1 是否參與槲皮素對(duì)R A W 2 6 4 ．7 細(xì)胞內(nèi)質(zhì)網(wǎng)應(yīng)激的調(diào)節(jié)作用，采用不同處理濃度和時(shí)間的T G 誘導(dǎo)R A W 2 6 4 ．7 細(xì)胞，w e s t e m b l o t t i n g 法檢測(cè)細(xì)胞在內(nèi)質(zhì)網(wǎng)應(yīng)激過(guò)程中c a

2、v - 1 表達(dá)的變化；2 ．5 } L ∥m L 的f i l i p i n ( I I I ) 預(yù)處理3 0 m i n 阻斷c a v 一1 的表達(dá)后，與槲皮素( 1 6 0 } | m o l ／L ) 共同處理R A W 2 6 4 ．7 細(xì)胞2 4 h ，采用A I u l e x i nV - F I T C ／P I雙染法分別用流式細(xì)胞儀和激光共聚焦顯微鏡檢測(cè)T G 誘導(dǎo)的細(xì)胞凋亡水平變化，w e s t e mb l

3、 o t t i n g 法檢測(cè)C H O P 表達(dá)水平，觀(guān)察c a V ．1 是否參與調(diào)節(jié)T G 誘導(dǎo)的細(xì)胞凋亡以及c a v ．1 是否影響槲皮素對(duì)洲2 6 4 ．7 細(xì)胞內(nèi)質(zhì)網(wǎng)應(yīng)激的調(diào)節(jié)作用。結(jié)果1 ．巨噬細(xì)胞內(nèi)質(zhì)網(wǎng)應(yīng)激模型的建立：1 岫o l ／L 的T G 與R A W 2 6 4 ．7 細(xì)胞共同培養(yǎng)2 4 h ，細(xì)胞存活率為4 1 ．0 7 土3 ．3 5 ％，根據(jù)存活率< 5 0 ％作為細(xì)胞凋亡的標(biāo)志，此時(shí)細(xì)胞己轉(zhuǎn)變

4、為凋亡細(xì)胞。因此，選擇1 “m o l ／L 的T G 作用刪2 6 4 ．7 細(xì)胞2 4 h 建立內(nèi)質(zhì)網(wǎng)應(yīng)激凋亡細(xì)胞模型，進(jìn)行后續(xù)實(shí)驗(yàn)。2 ．槲皮素能夠抑制T G 誘導(dǎo)的R A W 2 6 4 ．7 細(xì)胞內(nèi)質(zhì)網(wǎng)應(yīng)激損傷，與T G 組相比，細(xì)胞存活率升高儼< o ．0 5 ) ，凋亡率降低妒< o ．0 5 ) ，凋亡形態(tài)變化減輕，[ c a 2 + 】i 降低( - 氏0 ．0 5 ) ，G R P 7 8 及C H O

5、P 表達(dá)減少( 尸< 0 ．0 5 ) ；L Y 2 9 4 0 0 2 單獨(dú)作用可抑制T G 誘導(dǎo)的G I 心7 8 及C H O P 表達(dá)上調(diào)( 尸< 0 ．0 5 ) ，但與槲皮素聯(lián)合應(yīng)用與二者單獨(dú)使用時(shí)抑制作用無(wú)統(tǒng)計(jì)學(xué)差異。3 ．T G 作用R A W 2 6 4 ．7 細(xì)胞可使c a V ．1 的表達(dá)呈山峰狀改變，T G 作用早期c a v ．1的表達(dá)升高，隨著T G 作用濃度和時(shí)間的增加，c a v ．1 的表達(dá)

6、降低；f i l i p i n ( I I I ) 預(yù)處理R A w 2 6 4 ．7 細(xì)胞可阻斷T G 誘導(dǎo)的c a v ．1 表達(dá)上調(diào)( 尸< 0 ．0 5 ) ，同時(shí)細(xì)胞凋亡率升高妒< O ．0 5 ) ，凋亡形態(tài)變化明顯，C H O P 表達(dá)水平增加∽< o ．0 5 ) ，并且減弱了槲皮素對(duì)T G 誘導(dǎo)的刪2 6 4 ．7 細(xì)胞凋亡和C H O P 表達(dá)水平的抑制作用。結(jié)論1 ．槲皮素可抑制T G 誘導(dǎo)的凡