選1課件20141229

1、命題趨向一1.“微生物的培養(yǎng)與利用”考點(diǎn)無疑是選修1中近幾年新課標(biāo)高考的最大熱點(diǎn)，如2014年全國卷Ⅰ和Ⅱ39、2013年全國卷Ⅱ39、2011年全國卷39、、2009遼寧、寧夏理綜40都考查了微生物的分離和培養(yǎng)技術(shù)與選擇培養(yǎng)基的作用以及利用微生物發(fā)酵來生產(chǎn)特定的產(chǎn)物。,從近幾年遼寧地區(qū)生物試題看,2007年海南卷32．（15 分） 某小組同學(xué)為調(diào)查湖水中細(xì)菌的污染情況而進(jìn)行了實(shí)驗(yàn)。實(shí)驗(yàn)包括制備培養(yǎng)基、滅菌、接種及培 養(yǎng)、菌落觀察計數(shù)

2、。請回答與此實(shí)驗(yàn)相關(guān)的問題。 （1）培養(yǎng)基中含有蛋白胨、淀粉分別為細(xì)菌培養(yǎng)提供了 和 。除此之外，培養(yǎng)基還必須含有的基本成分是 和 。 （2）對培養(yǎng)基進(jìn)行滅菌，應(yīng)該采用的方法是_______。 （3）為了盡快觀察到細(xì)菌培養(yǎng)的實(shí)驗(yàn)結(jié)果，應(yīng)將接種湖水樣品的平板置于___中培養(yǎng)，培養(yǎng)的 溫度設(shè)定在 37℃。要使該實(shí)驗(yàn)所得結(jié)果可靠，還應(yīng)該同時在另一平板上接種___作為對照進(jìn)行實(shí)驗(yàn)。 （4）培養(yǎng) 20 小時后

3、，觀察到平板上有形態(tài)和顏色不同的菌落，這說明湖水樣品中有__種細(xì)菌。 一般說來，菌落總數(shù)越多，湖水遭受細(xì)菌污染的程度越_______。 （5）如果提高培養(yǎng)基中 NaCl 的濃度，可以用于篩選耐_______細(xì)菌，這種培養(yǎng)基被稱為____。,【答案】 （1）氮源 碳源 水 無機(jī)鹽 （2）高壓蒸汽滅菌 （3）恒溫培養(yǎng)箱 無菌水 （4）多 高 （5） NaCl 選擇培養(yǎng)基,【答案】（1）溫度 酸堿度 易培養(yǎng) 生

4、活周期短（2）滅菌 消毒 損傷DNA的結(jié)構(gòu)（3）比例合適（4）鑒定(或分類)（5）將未接種的培養(yǎng)基在適宜的溫度下放置適宜的時間,觀察培養(yǎng)基上是否有菌落產(chǎn)生.（6）滅菌,2009全國卷新課卷39（15分）（1）在大腸桿菌培養(yǎng)過程中，除考慮營養(yǎng)條件外，還要考慮______、______和滲透壓等條件。由于該細(xì)菌具有體積小、結(jié)構(gòu)簡單、變異類型容易選擇、______、______等優(yōu)點(diǎn)，因此常作為遺傳學(xué)研究的實(shí)驗(yàn)材料。（2）在微生物培養(yǎng)

5、操作過程中，為防止雜菌污染，需對培養(yǎng)基和培養(yǎng)皿進(jìn)行________（消毒、滅菌）；操作者的雙手需要進(jìn)行清洗和______；靜止空氣中的細(xì)菌可用紫外線殺滅，其原因是紫外線能使蛋白質(zhì)變性，還能__________。（3）若用稀釋涂布平板法計數(shù)大腸桿菌活菌的個數(shù)，要想使所得估計值更接近實(shí)際值，除應(yīng)嚴(yán)格操作、多次重復(fù)外，還應(yīng)保證待測樣品稀釋的_______。（4）通常，對獲得的純菌種還可以依據(jù)菌落的形狀、大小等菌落特征對細(xì)菌進(jìn)行初步的___

6、_________。（5）培養(yǎng)大腸桿菌時，在接種前需要檢測培養(yǎng)基是否被污染。對于固體培養(yǎng)基應(yīng)采用的檢測方法是_______。（6）若用大腸桿菌進(jìn)行實(shí)驗(yàn)，使用過的培養(yǎng)基及其培養(yǎng)物必須經(jīng)過_______處理后才能丟棄，以防止培養(yǎng)物的擴(kuò)散。,2011全國高考卷39．（15分）有些細(xì)菌可分解原油，從而消除由原油泄漏造成的土壤污染。某同學(xué)欲從受原油污染的土壤中篩選出能高效降解原油的菌株?；卮饐栴}：（1）在篩選過程中，應(yīng)將土壤樣品稀釋液接種于

7、以 為唯一碳源的固體培養(yǎng)基上，從功能上講，該培養(yǎng)基屬于 培養(yǎng)基。（2）純化菌種時，為了得到單菌落常采用的接種方法有兩種，即 和 .（3）為了篩選出高效菌株，可比較單菌落周圍分解圈的大小，分解圈大說明該菌株的降解能力 。（4）通常情況下，在微生物培養(yǎng)過程中實(shí)驗(yàn)室常用的滅菌方法有灼燒滅菌、

8、 和 。無菌技術(shù)要求試驗(yàn)操作應(yīng)在酒精燈 附近進(jìn)行，以避免周圍環(huán)境中微生物的污染。,【答案】 ⑴原油 選擇 ⑵平板劃線法 稀釋涂布平板法 ⑶強(qiáng)。 ⑷干熱滅菌法 高壓蒸汽滅菌法 火焰,【答案】（1）平板劃線   稀釋涂布平板（或涂布）   （2）涂布   （3）敏感 

9、; 不敏感  該致病菌對C的敏感性比對A弱   耐藥菌   （4）A,（2013全國卷新課標(biāo)39）臨床試用抗生素前，有時需要做細(xì)菌耐藥實(shí)驗(yàn)。實(shí)驗(yàn)時，首先要從病人身上獲取少量樣本，然后按照一定的實(shí)驗(yàn)步驟操作，以確定某致病菌對不同抗生素的敏感性?；卮鹣铝袉栴}：（1）為了從樣本中獲取致病菌菌落，可用_______法或_________法將樣本接種于固體

10、培養(yǎng)基表面，經(jīng)過選擇培養(yǎng)、鑒別等步驟獲得。（2）取該單菌落適當(dāng)稀釋，用______法接種于固體培養(yǎng)基表面，在37℃培養(yǎng)箱中培養(yǎng)24h，使其均勻生長，布滿平板。（3）為了檢測該致病菌對于抗生素的敏感性，將分別含有A，B，C，D四種抗生素的濾紙片均勻置于該平板上的不同位置，培養(yǎng)一段時間后，含A的濾紙片周圍出現(xiàn)透明圈，說明該致病菌對抗生素A_______；含B的濾紙片周圍沒有出現(xiàn)透明圈，說明該致病菌對抗生素B_____；含C的濾紙片周圍的

11、透明圈比含A的小，說明________；含D的濾紙片周圍的透明圈也比含A的小，且透明圈中出現(xiàn)了一個菌落，在排除雜菌污染的情況下，此菌落很可能是抗生素D的________。（4）根據(jù)上述實(shí)驗(yàn)結(jié)果，為達(dá)到抗菌目的，最好應(yīng)選擇抗生素_______。,（2014全國卷新課標(biāo)Ⅰ39）植物秸稈中的纖維素可被某些微生物分解，回答下列問題：（1）分解秸稈中纖維素的微生物可以分泌纖維素酶，該酶是由3種組分組成的復(fù)合酶，其中葡萄糖苷酶可將

12、 分解成 。（2）在含纖維素的培養(yǎng)基中加入剛果紅時，剛果紅可與纖維素形成 色復(fù)合物。用含有剛果紅的這種培養(yǎng)基來培養(yǎng)纖維素分解菌時，培養(yǎng)基上會出現(xiàn)以該分解菌的菌落為中心的 。（3）為從富含纖維素的土壤中分離獲得纖維素分解菌的單菌落，某同學(xué)設(shè)計甲、乙兩種培養(yǎng)基（成分如下） 據(jù)表判斷，培養(yǎng)基甲 （能或不能）用于分離和鑒別纖維素分解菌，原因

13、 。培養(yǎng)基乙 （能或不能）用于分離和鑒別纖維素分解菌，原因 。,【答案】（1）纖維二糖 葡萄糖 （2）紅 透明圈 （3）不能 液體培養(yǎng)基不能用于分離單菌落 不能 培養(yǎng)基中沒有纖維素，不能與剛果紅形成復(fù)合物，即使出現(xiàn)單菌落也不能確定是纖維素分解菌,（2014全國卷新課標(biāo)Ⅱ39）為了調(diào)查某河流的水質(zhì)狀況，某研究小組測定該河流水樣中的細(xì)菌含量，

14、并進(jìn)行了細(xì)菌的分離等工作。回答下列問題：（1）該小組采用稀釋涂布平板法檢測水樣中的細(xì)菌含量。在涂布接種前，隨機(jī)取若干滅菌后的空白平板先行培養(yǎng)了一段時間，目的是 ；然后，取1ml水樣稀釋100倍，在3個平板上用涂布法分別接入0.1ml稀釋液；經(jīng)適當(dāng)培養(yǎng)后，3個平板上的菌落數(shù)分別39、38和37。據(jù)此可得出每升水樣中活菌數(shù)為 。（2）該小組采用平板劃線法分離水樣中

15、的細(xì)菌。操作時，接種環(huán)通過 滅菌，在第二次劃線時及以后的劃線時，總是從上一次劃線的末端開始劃線，這樣做的目的是 。（3）示意圖A和B中， 表示的使用稀釋涂布平板法接種培養(yǎng)后得到的結(jié)果。（4）該小組將得到的菌株接種到液體培養(yǎng)集中并混勻，一部分進(jìn)行靜置培養(yǎng)，另一部分進(jìn)行震蕩培養(yǎng)。結(jié)果震蕩培養(yǎng)比靜置培養(yǎng)細(xì)菌生長速度快。分析其原因是：震蕩培養(yǎng)能提高培養(yǎng)液中 的

16、含量，同時可使菌體與培養(yǎng)液充分接觸，提高 的利用率。,【答案】 ⑴檢測培養(yǎng)基平板滅菌是否合格  3.8×10 7 ⑵灼燒 將聚集的菌體逐步稀釋以便獲得單個菌落 ⑶B ⑷溶解氧 營養(yǎng)物質(zhì),我們分析高考題后可以看出，關(guān)于考查微生物培養(yǎng)和應(yīng)用的方向，主要圍繞在選擇培養(yǎng)和微生物的培養(yǎng)的基本知識上，這些知識其實(shí)在學(xué)生學(xué)習(xí)和復(fù)習(xí)過程中只要稍微用點(diǎn)心都能記住并理解。同時近年高考選修一的考查帶

17、有一定的能力的提升，但難度不大，學(xué)生有必修實(shí)驗(yàn)分析能力的訓(xùn)練就足夠完成選修的試題。,2.全國新課標(biāo)卷也考察其他考點(diǎn)，如2010年全國新課標(biāo)卷39考查了植物玫瑰精油的提取，2012年全國新課標(biāo)卷39考查了植物的組織培養(yǎng)。2013年新課標(biāo)全國卷Ⅰ39制作泡菜,命題趨向二,2008寧夏理綜 37、［生物—選修Ⅰ生物技術(shù)實(shí)踐］ （15分）根據(jù)從胡蘿卜中提取胡蘿卜素的相關(guān)知識及胡蘿卜素的性質(zhì)，回答下列問題。（1）胡蘿卜素是　　　色的結(jié)晶。從胡

18、蘿卜中提取胡蘿卜素，常用　　　　　　　　　作為溶劑，原因是　　　　　　　　　。（2）從胡蘿卜中提取胡蘿卜素常用的方法是 法。用這種提取胡蘿卜素的主要步驟是：粉碎、干燥、　　、 　、　　。（3）在胡蘿卜顆粒的加熱過程中，應(yīng)嚴(yán)格將　　　和　　控制在一定范圍內(nèi)，原因是　　　　　　　　　　　　　　。（4）提取胡蘿卜素可通過　　　　　　　法進(jìn)行鑒定，在鑒定過程中需要用　　　　　對照。（5）一般情況下，提取胡蘿卜素時，提取

19、效率與原料顆粒的含水量成　　　　　比 。,【答案】 （1）橘黃 石油醚 胡蘿卜素不溶于水，易溶于石油醚等有機(jī)溶劑。（2）萃取 萃取 過濾 濃縮（3）萃取時間 萃取溫度 溫度高時間長，物質(zhì)提取充分，萃取效果好 （4）紙層析 標(biāo)準(zhǔn)胡蘿卜素 （5）反,2010全國新課標(biāo)39．(15 分) 下列是與芳香油提取相關(guān)的問題，請回答（1）玫瑰精油適合用水蒸氣蒸餾法提取，其理由是 ，蒸餾時收集的蒸餾液

20、 (是、不是)純的玫瑰精油，原因是 。 （2）當(dāng)蒸餾瓶中的水和原料量一定時，蒸餾過程中影響精油提取量的主要因素有蒸餾時間和 。當(dāng)原料量等其他條件一定時，提取量隨蒸餾時間的變化趨勢是 。（3）如果蒸餾過程中不進(jìn)行冷卻，則精油提取量會 ，原因是 。（4）密封不嚴(yán)的瓶裝玫瑰精油保存時最好存放在 溫

21、度，目的是 。 （5）某植物花中精油的相對含量隨花的不同生長發(fā)育時期的變化趨勢如圖所示。提取精油時采摘花的最合適時間為 天左右。 (6)從薄荷葉中提取薄荷油時 (能、不能)采用從玫瑰花中提取玫瑰精油的方法，理由是 。,【答案】 （1）易揮發(fā)、難溶于水、化學(xué)性質(zhì) 穩(wěn)定 不是 蒸餾時玫瑰精油隨水蒸氣一起蒸餾出來，得到的是油水混合物。（2）溫度 一定時間內(nèi)隨蒸餾時間的延長而增加，一定時間后

22、蒸餾量不再增加（3）下降 部分精油會隨水蒸氣蒸發(fā)而流失 （4）較低 防止揮發(fā) （5）a （6）能 兩者化學(xué)性質(zhì)相似,2012全國卷新課標(biāo)卷39(15分）為了探究6-BA和IAA對某菊花品種莖尖外植體再生叢芽的影響，某研究小組在ＭＳ培養(yǎng)基中加入6-BA和IAA，配制成四種培養(yǎng)基（見下表），滅菌后分別接種數(shù)量相同、生長狀態(tài)一致、消毒后的莖尖外植體，在適宜條件下培養(yǎng)一段時間后，統(tǒng)計再生叢芽外植體的比率（m），以及再生叢芽外植體上的叢芽平

23、均數(shù)（n），結(jié)果如下表?；卮鹣铝袉栴}：（１）按照植物的需求量，培養(yǎng)基中無機(jī)鹽的元素可分為　　　和　　　兩類。上述培養(yǎng)基中，6-BA屬于　　　　　類生長調(diào)節(jié)劑。（２）在該實(shí)驗(yàn)中，自變量是　　 　，因變量是　　 　，自變量的取值范圍是　 　　。（３）從實(shí)驗(yàn)結(jié)果可知，誘導(dǎo)叢芽總數(shù)最少的培養(yǎng)基是　　　號培養(yǎng)基。（４）為了誘導(dǎo)該菊花試管苗生根，培養(yǎng)基中一般不加入　　　（填

24、“6-BA”或“IAA”）。,【答案】（１）大量元素　微量元素 細(xì)胞分裂素 （２）IAA濃度　　叢芽外植體的比率及叢芽平均數(shù) ０～０.５mg/L （３）１ （４）6-BA,（2013新課標(biāo)卷Ⅰ非遼寧卷）39回答下列有關(guān)泡菜制作的問題：（1）制作泡菜是，所用鹽水煮沸，其目的是 。為了縮短制作時間，有人還會在冷卻后的鹽水中加入少量陳泡菜液，加入陳泡菜液的目的是 。（2）泡菜制

25、作過程中,乳酸發(fā)酵過程即為乳酸菌進(jìn)行 的過程。該過程發(fā)生在乳酸菌的 中。（3）泡菜制作過程中影響亞硝酸鹽含量的因素有 、 和 等。（4）從開始制作到泡菜質(zhì)量最佳這段時間內(nèi)，泡菜液逐漸變酸，這段時間內(nèi)泡菜壇中乳酸菌和其他雜菌的消長規(guī)律是 ，原因是： 。,【答案】（1）消滅雜菌  增加乳酸菌含量

26、0;（2）無氧呼吸 細(xì)胞質(zhì) （3）溫度、食鹽用量、腌制時間 （4）乳酸菌數(shù)量增加，雜菌數(shù)量較少  乳酸菌比雜菌更為耐酸,通過對高考題的分析不難看出，關(guān)于這個考點(diǎn)考查方向不太相同，例如關(guān)于植物芳香油的試題多偏向教材上重點(diǎn)知識的填空，關(guān)于植物組織培養(yǎng)和傳統(tǒng)發(fā)酵由于與必修聯(lián)系緊密并帶有一定的分析，但難度也不大。只要學(xué)生跟緊教師的訓(xùn)練就可以達(dá)到相關(guān)的要求。,生物技術(shù)在食品加工及其他方面的應(yīng)用考點(diǎn)在其它

27、省市考查頻率主要集中在以下三個方面：①果酒和果醋的制作方法與應(yīng)用及腐乳的制作是本專題點(diǎn)的重要內(nèi)容，在高考出現(xiàn)的概率也相對較高，如2009浙江自選17考查食醋和泡菜的制作；、2010海南卷25、②植物組織培養(yǎng)的操作和應(yīng)用在近幾年高考中開始走高，如2010安徽理綜31(ⅠI)、2009山東理綜34都對植物組織培養(yǎng)技術(shù)進(jìn)行了考查。③生物材料中某些特定成分的提取在高考試題中也逐步熱化2011海南卷30考查了芳香油的提取技術(shù)。,,專題一傳統(tǒng)發(fā)酵

28、技術(shù)的應(yīng)用,一、傳統(tǒng)發(fā)酵有關(guān)的幾類微生物的比較,二、實(shí)驗(yàn)原理1．果酒的制作原理 酵母菌在有氧條件下能大量增殖，在無氧條件下，能通過無氧呼吸產(chǎn)生酒精，反應(yīng)式如下 2．果醋的制作原理 當(dāng)氧氣、糖源都充足時，醋酸菌將葡萄汁中的糖直接分解

29、成醋酸；當(dāng)缺少糖源時（氧氣還是充足），醋酸菌將乙醇變成乙醛，再將乙醛變?yōu)榇姿?，反?yīng)式如下,果酒、果醋的制作原理,三、實(shí)驗(yàn)流程：挑選葡萄→沖洗→榨汁→酒精發(fā)酵→醋酸發(fā)酵 四、 酒精檢驗(yàn)：果汁發(fā)酵后是否有酒精產(chǎn)生，可以用重鉻酸鉀來 檢驗(yàn)。在酸性條件下，橙黃色的重鉻酸鉀與酒精反應(yīng)呈現(xiàn)灰綠色。,充氣口是在醋酸發(fā)酵時連接充氣泵進(jìn)行充氣用的；排氣口是在酒精發(fā)酵時用來排出二氧化碳的；出料口是用來取樣的。排氣口要通過一個長而彎曲的膠管與瓶身

30、相連接，其目的是防止空氣中微生物的污染。使用該裝置制酒時，應(yīng)該關(guān)閉充氣口；制醋時，應(yīng)該充氣口連接氣泵，輸入氧氣。,,,果酒,果醋,五、裝置注意事項(xiàng),腐乳制作一、制作原理：毛霉等微生物產(chǎn)生的蛋白酶能將豆腐中的蛋白質(zhì)分解成小分子的肽和氨基酸；脂肪酶可將脂肪水解為甘油和脂肪酸。,二、制作流程：主要生產(chǎn)工序是將豆腐進(jìn)行前期發(fā)酵和后期發(fā)酵。,操作提示(1)操作過程的控制：①水的控制：含水量約70%，用含水量過高的豆腐制腐乳，不易成形。②鹽的控

31、制：鹽濃度過高會影響腐乳的口味，濃度過低不足以抑制微生物的生長，可能導(dǎo)致豆腐腐敗變質(zhì)。 ③酒的含量一般控制成12%左右。酒精含量量越高，對蛋白酶的抑制作用也越大，使腐乳成熟期過長。酒精含量過低，蛋白酶的活性高，加快蛋白質(zhì)的水解，雜菌繁殖快，豆腐易腐敗，難以成塊。④溫度的控制：溫度15～18℃ ，適合毛霉生長。發(fā)酵時間宜控制在6個月左右。,(2)防止雜菌污染：①用來腌制腐乳的玻璃瓶，洗刷干凈后要用沸水消毒。②裝瓶時，操作要迅速小心。加入鹵

32、湯后，要用膠條將瓶口密封。封瓶時，最好將瓶口通過酒精燈的火焰，防止瓶口被污染。,食鹽的作用：1.抑制微生物的生長，避免腐敗變質(zhì)2.析出水分，是豆腐變硬，在后期制作過程中不易酥爛3.調(diào)味作用。 酒的作用：1.防止雜菌污染2.賦予腐乳風(fēng)味3.酒精含量的高低與腐乳后期發(fā)

33、酵時間的長短有很大關(guān)系 香辛料的作用：1.調(diào)味作用2.殺菌防腐作用3.參與并促進(jìn)發(fā)酵過程,泡菜制作一、制作原理,二、制作流程,我國衛(wèi)生標(biāo)準(zhǔn)規(guī)定亞硝酸鹽的含量,影響泡菜品質(zhì)的因素,一、泡菜壇的選擇。二、腌制的條件，要注意控制腌制的時間、溫度和食鹽的用量。溫度過高、食鹽用量過低、腌制時間過短，容易造成細(xì)菌大量繁殖

34、，亞硝酸鹽含量增加。一般在腌制10天后，亞硝酸鹽的含量開始下降。,專題二微生物的培養(yǎng)與應(yīng)用,2、培養(yǎng)基配方及營養(yǎng)要素基本營養(yǎng)要素：各種培養(yǎng)基一般都含有水、碳源、氮源、無機(jī)鹽。此外還要滿足不同微生物生長對pH、特殊營養(yǎng)物質(zhì)以及氧氣的需求。,1、培養(yǎng)基分類,3、無菌技術(shù)(1)消毒和滅菌的區(qū)別,(2)無菌技術(shù)具體操作①對實(shí)驗(yàn)操作的空間、操作者的衣著和手進(jìn)行清潔和消毒。②將用于微生物培養(yǎng)的器皿、接種用具和培養(yǎng)基等進(jìn)行滅菌。③為避免周圍

35、環(huán)境中微生物的污染，實(shí)驗(yàn)操作應(yīng)在酒精燈火焰附近進(jìn)行。④實(shí)驗(yàn)操作時應(yīng)避免已經(jīng)滅菌處理的材料用具與周圍的物品相接觸。,4、純化大腸桿菌以及菌種的保藏(1)制備牛肉膏蛋白胨固體培養(yǎng)基：計算、稱量、溶化、滅菌、倒平板。(2)純化大腸桿菌①原理：在培養(yǎng)基上將細(xì)菌稀釋或分散成單個細(xì)胞，使其長成單個的菌落，這個菌落就是一個純化的細(xì)菌菌落。②方法：平板劃線法、稀釋涂布平板法。(3)菌種的保藏①短期保存：固體斜面培養(yǎng)基上4℃保存，菌種易被污

36、染或產(chǎn)生變異。②長期保存：－20℃甘油管在冷凍箱中保藏。,一、土壤中分解尿素的細(xì)菌的分離與計數(shù)1．選擇合適的培養(yǎng)基(1)根據(jù)培養(yǎng)基的用途可分為選擇培養(yǎng)基和鑒別培養(yǎng)基，這部分內(nèi)容中既用到選擇培養(yǎng)基又用到了鑒別培養(yǎng)基。兩個實(shí)驗(yàn)通過分別用尿素為唯一氮源、纖維素為唯一碳源的選擇培養(yǎng)基進(jìn)行篩選。實(shí)驗(yàn)后分別用酚紅指示劑顯紅色、剛果紅指示劑出現(xiàn)透明圈來鑒別兩種細(xì)菌。,2．統(tǒng)計菌落數(shù)目的方法

37、 (1)顯微鏡直接計數(shù)法----直接計數(shù)法 ①原理：利用特定細(xì)菌計數(shù)板或血細(xì)胞計數(shù)板，在顯微鏡下計算一定容積的樣品中微生物數(shù)量。

38、 ②方法：用計數(shù)板計數(shù)。 ③缺點(diǎn)：不能區(qū)分死菌與活菌。 (2)稀釋涂布平板法----間接計數(shù)法(活菌計數(shù)法)

39、 ①原理：當(dāng)樣品的稀釋度足夠高時，培養(yǎng)基表面生長著一個菌落，來源于樣品稀釋液中的一個活菌，通過統(tǒng)計平板上的菌落數(shù)，就能推測出樣品中大約含有多少活菌。,操作注意： a．設(shè)置重復(fù)組，增強(qiáng)實(shí)驗(yàn)的說服力與準(zhǔn)確性。b．為了保證結(jié)果準(zhǔn)確，一般

40、選擇菌落數(shù)在30～300的平板進(jìn)行計數(shù)。計算公式：每克樣品中的菌株數(shù)＝C/V×M，其中C代表某一稀釋度下平板上生長的平均菌落數(shù)，V代表涂布平板時所用的稀釋液的體積(mL)，M代表稀釋倍數(shù)。,3．細(xì)菌分離與計數(shù)的實(shí)驗(yàn)流程 土壤取樣→樣品稀釋→取樣涂布→微生物培養(yǎng)→觀察并記錄結(jié)果→細(xì)菌計數(shù)。,

41、4.對目的菌的鑒定 在細(xì)菌分解尿素的反應(yīng)中，細(xì)菌合成的脲酶將尿素分解成了氨。氨會是培養(yǎng)基的堿性增強(qiáng)，在培養(yǎng)集中加入酚紅指示劑，培養(yǎng)某種細(xì)菌后，如果PH升高，指示劑將變紅。,二、分解纖維素的微生物的分離1．纖維素酶是一種復(fù)合酶，它包括C1酶、Cx酶和葡萄糖苷酶，前兩種酶使纖維素分解成纖維二糖，第三種酶將纖維二糖分解成葡萄糖。2．纖維素分解菌的篩選原理(1)剛果紅可以與纖維素形成紅色復(fù)合物，但并不和水解后的纖維二糖和葡

42、萄糖發(fā)生這種反應(yīng)。(2)纖維素分解菌能產(chǎn)生纖維素酶分解纖維素，從而使菌落周圍形成透明圈。,3．土壤中纖維素分解菌的篩選(1)方案 土壤取樣→選擇培養(yǎng)（根據(jù)目的菌數(shù)量而定）→梯度稀釋→將樣品涂布到鑒別纖維素分解菌的培養(yǎng)基上→挑選產(chǎn)生透明圈的菌落。(2)選擇培養(yǎng)的目的：增加纖維素分解菌的濃度，確保能夠從樣品中分離到所需要的微生物。(3)涉及的微生物技術(shù)主要有：培養(yǎng)基的制作、無菌操作、稀釋涂布平板法、選擇培養(yǎng)基的作用、土壤取樣等。

43、,專題三 植物的組織培養(yǎng)技術(shù),1．原理(1)植物細(xì)胞全能性（理論基礎(chǔ)）的概念：高度分化的植物細(xì)胞，仍然具有發(fā)育成完整植株的潛能。(2)高度分化的植物細(xì)胞全能性表達(dá)的條件①離體條件；②無菌操作(防止雜菌污染)；③適宜物質(zhì)的誘導(dǎo)和調(diào)節(jié)(激素主要是生長素、細(xì)胞分裂素等)；④種類齊全、比例適合的營養(yǎng)物質(zhì)；⑤溫度、酸堿度、光照等條件的控制。,2．基本過程3．影響植物培養(yǎng)的因素(1)外植體的選?、俨煌参锏慕M織培養(yǎng)難度不同。

44、②對于同一種植物材料，材料的年齡，保存時間的長短等也會影響實(shí)驗(yàn)結(jié)果。生長旺盛的嫩枝生理狀況好，容易誘導(dǎo)脫分化和再分化。,(2)培養(yǎng)基的配制(MS培養(yǎng)基)①大量元素：C、H、O、N、P、K、Ca、Mg、S。②微量元素：B、Mn、Cu、Zn、Fe、Mo、I、Co。③有機(jī)物：甘氨酸、煙酸、肌醇、維生素、蔗糖等。④植物激素中生長素和細(xì)胞分裂素是啟動細(xì)胞分裂、脫分化和 再分化的關(guān)鍵性激素。,在培養(yǎng)基中需要添加生長素和細(xì)胞分裂素等植物激素

45、，其濃度、使用的先后順序、用量的比例等都影響結(jié)果。,不同的植物對各種條件的要求往往不同。菊花適宜條件：pH在5.8左右；溫度控制在18～22℃；每日日光燈光照12h。月季花藥培養(yǎng)條件： pH在5.8左右；溫度控制在25度左右；初期不需要光照。幼小植株形成后才需要光照。,植物組織培養(yǎng)技術(shù)和花藥培養(yǎng)技術(shù)比較,菊花莖與月季花藥組織培養(yǎng)的比較,注意：1、被子植物花粉的發(fā)育要經(jīng)歷小孢子四分體時期、單核期（包括單核居中期和單核靠邊期）和雙核期等階

46、段通過花藥培養(yǎng)產(chǎn)生花粉植株（即單倍體植株）一般有兩條途徑，途徑一：花藥中的花粉→愈傷組織→叢芽→生根→移栽，途徑二：花藥中的花粉→胚狀體→叢芽→生根→移栽但無論哪種方式，都要先誘導(dǎo)生芽，再誘導(dǎo)生根。 2、選花藥時一般要通過鏡檢來確定是否處于適宜的發(fā)育期。確定花粉發(fā)育時期的最常用的方法是醋酸洋紅法，對于某些花粉細(xì)胞核不易著色，需采用焙花青—鉻礬法，染成藍(lán)黑色。,專題六 植物有效成分的提取,①植物芳香油的提取方法有蒸餾、壓榨和萃