哺乳期TCDD低水平暴露對仔鼠心臟、腎臟和睪丸CYP1A1表達(dá)及凋亡的影響.pdf

1、目的:
　　 2，3，7，8一四氯二苯一對一二惡英（2，3，7，8-tetrachlorodibenzo-p-dioxin，TCDD）是毒性最強(qiáng)的化合物之一，國際癌癥研究中心將其列為Ⅰ級致癌物。長期接觸TCDD可在體內(nèi)蓄積，對機(jī)體造成嚴(yán)重的毒害作用。目前對TCDD的急性毒性作用及妊娠期暴露對子代的影響已深入研究，但關(guān)于哺乳期暴露對子代影響的研究甚少。
　　 本實(shí)驗(yàn)以小鼠為模型，于其分娩后立即腹腔注射低劑量TCDD，通過乳

2、汁使仔鼠染毒，觀察哺乳期暴露于TCDD對仔鼠發(fā)育，心臟、腎臟和睪丸中細(xì)胞色素P4501A1酶（cytochrome P4501A1，CYP1A1）、Bcl-2（B-Cell lymphoma/leukemia-2）和Bax（Bcl-associated x protein）表達(dá)的影響，為哺乳期暴露于低劑量TCDD對子代造成的毒性危害提供科學(xué)依據(jù)。
　　 方法:
　　 1.實(shí)驗(yàn)動(dòng)物
　　 選取4月齡健康成年昆明小鼠

3、，雌鼠24只，雄鼠8只，按3：1比例同籠受孕。分娩8-10只仔鼠的保留，調(diào)整使每窩仔鼠數(shù)為8只，雌雄對半，其余淘汰。
　　 2.實(shí)驗(yàn)試劑
　　 TCDD購買濃度為10μg/ml（TCDD/甲苯），純度為99％，注射前按TCDD：花生油=1：4的體積比配制，終濃度為2μg/ml。溶劑對照為1：4的甲苯和花生油混合液。
　　 3.實(shí)驗(yàn)分組
　　 將母鼠和仔鼠作為整體（窩）完全隨機(jī)分組，設(shè)2個(gè)實(shí)驗(yàn)組：40μg和

4、20μg TCDD/kg體重組；2個(gè)溶劑對照組：40μg和20μg溶劑/kg體重組；1個(gè)空白對照組；共5組，每組3窩（簡寫為40μg FCDD組、20μg TCDD組、40μg溶劑對照組、20μg溶劑對照組和空白對照組）。雌鼠分娩后，立即稱重并腹腔注射。母鼠哺乳仔鼠（即染毒）至出生后第21天，停止哺乳，此后仔鼠自由進(jìn)食。出生后第35天處死。
　　 4.仔鼠生長發(fā)育指標(biāo)的測定：仔鼠體重，腎臟、睪丸重量，睪丸下降時(shí)間。
　　

5、 5.仔鼠心臟、腎臟和睪丸中CYP1A1的測定。
　　 6.仔鼠心臟、腎臟和睪丸細(xì)胞凋亡的測定
　　 6.1用顯微鏡觀察H.E染色的仔鼠心臟、腎臟和睪丸組織的形態(tài)變化。
　　 6.2用免疫組織化學(xué)法對仔鼠心臟、腎臟和睪丸中Bcl-2和Bax的測定。
　　 結(jié)果:
　　 1.TCDD對仔鼠體重的影響
　　 出生時(shí)各組仔鼠體重?zé)o顯著差異（P>0.05）；出生后第7天，20μg TCDD組仔鼠平

6、均體重低于溶劑對照組和空白對照組（P<0.05）；7天后40μg和20μg TCDD組平均體重低于溶劑對照組和空白對照組（P<0.05），40μg TCDD組低于20μgTCDD組（P<0.05）；停止染毒后（出生后第28天和35天），平均體重仍低于溶劑對照組和空白對照組（P<0.05）。
　　 2.TCDD對仔鼠腎臟重量的影響
　　 40μg和20μg TCDD組雌性仔鼠腎臟絕對重量顯著低于溶劑對照組和空白對照組（P<

7、0.05），但雄性僅40μg TCDD組顯著低于溶劑對照組（P<0.05）；雌雄40μg和20μg TCDD組腎臟相對重量與其溶劑對照組均無顯著性差異（P>0.05），但雌性實(shí)驗(yàn)組顯著性低于空白對照組（P<0.05）。雌雄40μg TCDD組與20μg TCDD組腎臟絕對重量和相對重量均無差異（P>0.05），但雌性各項(xiàng)指標(biāo)均顯著性低于雄性（P<0.05）。
　　 3.TCDD對仔鼠睪丸重量的影響
　　 40μg和20μ

8、g TCDD組睪丸絕對重量和相對重量低于其溶劑對照組和空白對照組，40μgTCDD組低于20μg TCDD組，但僅40μg TCDD組與其溶劑對照組有顯著性差異（P<0.05）。
　　 4.TCDD對仔鼠睪丸下降時(shí)間的影響
　　 40μg和20μg TCDD組睪丸下降時(shí)間遲于溶劑對照組和空白對照組（P<0.05），40μg TCDD組明顯遲于20μg TCDD組（P<0.05）。
　　 5.TCDD對仔鼠心臟、腎

9、臟和睪丸CYP1A1表達(dá)的影響
　　 免疫組化的結(jié)果顯示，CYP1A1可表達(dá)于心肌血管內(nèi)皮細(xì)胞、腎臟和睪丸中。哺乳期低劑量暴露于TCDD，使仔鼠心肌細(xì)胞、腎臟和睪丸中CYP1A1表達(dá)量均明顯高于其對照組（P<0.05），心肌細(xì)胞中無性別差異（P>0.05），但腎臟中雌性顯著性高于雄性（P<0.05）。
　　 6.TCDD對仔鼠心臟、腎臟和睪丸組織細(xì)胞結(jié)構(gòu)的影響以及對組織Bcl-2和Bax表達(dá)的影響
　　 哺乳期低

10、劑量暴露于TCDD，使仔鼠心血管內(nèi)皮細(xì)胞的
　　 哺乳期低劑量暴露于TCDD，使仔鼠心血管內(nèi)皮細(xì)胞的完整性破壞、管壁增厚、肌纖維排列混亂；腎臟中腎小球數(shù)量增加、體積增大、炎性細(xì)胞浸潤；睪丸細(xì)胞皺縮等。
　　 抑制凋亡基因Bcl-2可表達(dá)于心肌細(xì)胞中，40μg TCDD組與20μg TCDD組無差異（P>0.05）；腎臟中Bcl-2主要表達(dá)于腎小球細(xì)胞中，40μg TCDD組顯著性低于20μg TCDD組（P<0.05）；

11、睪丸中Bcl-2主要表達(dá)于睪丸細(xì)胞中，40μg TCDD組與20μg TCDD組無差異（P>0.05）。心臟、腎臟和睪丸的實(shí)驗(yàn)組均明顯低于其溶劑對照組和空白對照組（P<0.05），心臟和腎臟中Bcl-2的表達(dá)無性別差異（P>0.05）。
　　 凋亡基因Bax可表達(dá)于心肌細(xì)胞中，40μg TCDD組與20μg TCDD組無差異（P>0.05），無性別差異（P>0.05）；腎臟中Bax主要表達(dá)于腎小管和腎小球，40μg TCDD組顯

12、著性高于20μg TCDD組（P<0.05），雌性高于雄性（P<0.05）；睪丸中Bax主要表達(dá)于睪丸細(xì)胞中，40μg TCDD組顯著性高于20μg TCDD組（P<0.05）。心臟、腎臟和睪丸的實(shí)驗(yàn)組均明顯高于其溶劑對照組和空白對照組（P<0.05）。
　　 雌雄仔鼠心臟、腎臟和睪丸中Bcl-2/Bax的比值顯著性低于溶劑對照組和空白對照組（P<0.05），無性別差異（P>0.05），腎臟中40μg TCDD組顯著性低于20μ

13、g TCDD組（P<0.05）。
　　 結(jié)論:
　　 哺乳期低劑量暴露于TCDD，可以：阻礙仔鼠體重的增長；阻礙仔鼠腎臟重量的增加，影響腎臟的生長發(fā)育；阻礙仔鼠睪丸重量的增加，使睪丸下降時(shí)間延長，抑制生殖器官的發(fā)育，影響生殖功能；誘導(dǎo)仔鼠心臟、腎臟和睪丸組織CYP1A1蛋白表達(dá)的增加，可能是TCDD導(dǎo)致子代腎臟和睪丸重量下降和睪丸發(fā)育遲緩的原因之一；誘導(dǎo)心臟、腎臟和睪丸細(xì)胞凋亡，使Bcl-2蛋白表達(dá)減低，Bax蛋白表達(dá)增