殼聚糖絮凝沉降法對(duì)葛根芩連湯中黃酮和生物堿類成分的影響

1、基金項(xiàng)目：國(guó)家科技重大專項(xiàng)“重大新藥創(chuàng)制”“山東省重大新藥創(chuàng)制中心建設(shè)”(2009ZX09301013)第一作者：孫星，在讀碩士研究生從事中藥炮制原理及中藥新藥的研究Tel：15953106416Email：sunxing_1234@通訊作者：林桂濤，教授，碩士生導(dǎo)師，（0531）89628590Email：linguitaoli@殼聚糖絮凝沉降法對(duì)葛根芩連湯中黃酮和生物堿類成分的影響孫星1，盛華剛，張超，林桂濤（山東中醫(yī)藥大學(xué)藥學(xué)院，

2、山東濟(jì)南250355）[摘要摘要]目的：目的：研究殼聚糖絮凝沉降法對(duì)葛根芩連湯中黃酮及生物堿類成分的影響。方法：方法：采用正交試驗(yàn)法，以葛根素、黃芩苷、鹽酸小檗堿、浸膏率作為考察指標(biāo)，研究藥液濃縮程度、殼聚糖用量、pH值對(duì)殼聚糖絮凝沉降法精制葛根芩連湯中黃酮和生物堿類成分的影響，并與乙醇沉淀方法進(jìn)行了比較。結(jié)果：結(jié)果：殼聚糖絮凝沉淀法的最佳條件是藥液濃度為0.78g生藥mL1、殼聚糖加入量為10%、藥液pH值調(diào)為6，并且通過比較不同沉淀

3、方法處理后藥液中指標(biāo)性成分的變化，可知?dú)ぞ厶堑某恋硇Ч罴?。結(jié)論：結(jié)論：殼聚糖可以有效保留藥液中有效成分，降低浸膏率，但是改變了藥液中成分的組成比例，因此選用此方法時(shí)還需慎重。[關(guān)鍵詞關(guān)鍵詞]殼聚糖；絮凝沉降法；葛根芩連湯；黃酮；異黃酮；生物堿；TheinfluenceoftheChitosanFlocculatingSettingMethodoftheflavonoidsalkaloidsofPuerariaescutellariae

4、coptidisdecoctionsoup[ABSTRACT]OBJECTIVE:TostudytheinfluenceoftheChitosanFlocculatingSettingMethodtotheflavonoidsalkaloidsofPuerariaescutellariaecoptidisdecoctionsoup.METHODS:BymeansofPuerarinbaicalinberberinehydrochlide

5、extractsrateadopttingthethogonaldesignmethodtostudytheeffectofthreefactsincludingthephysicliquconcentrateddegreepHValuetheamountofchitosanonrefiningtheextractofPuerariaescutellariaecoptidisdecoctionsoupbythechitosanflocc

6、ulatingsettingmethod.Tocomparetheeffectsofdifferentprecipitationmethodtothecompositionofflavonoidalkaloids.RESULTS:Theoptimumpurificationprocesswasthemassconcentrationcontained0.78gmL11%chitosansolution10%additionamountp

7、H6.BycomparingdifferentprecipitationmethodafterprocessingthechangeinthecompositionoftheindexesinsolutionitcanbeseenthattheFlocculatingSettingMethodisthebesteffect.CONCLUSIONS:Chitosancaneffectivelykeepsolutionofactiveing

8、redientsreducetherateofextract.Butthismethodchangesthesolutionofthecompositioncompositionproptionsochoosethemethodstillneedtobecautious.[KEYWDS]ChitosanFlocculatingSettingMethodPuerariaescutellariaecoptidisdecoctionsoup；

9、flavonoids；isoflavones；alkaloids；葛根芩連湯由葛根、黃芩、黃連、炙甘草4味中藥組成，具有解表清里，升清止痢之功效。近幾年來，殼聚糖絮凝沉淀法用于中藥提取液的澄清顯示了較好的效果[14]。為了進(jìn)一步研究殼聚糖絮凝沉淀法對(duì)含黃酮類及生物堿類成分中藥成分的影響，本實(shí)驗(yàn)選用含黃酮類成分的中藥葛根、黃芩和含生物堿類成分中藥黃連的葛根芩連湯進(jìn)行了研究，以有效成分的含量、浸膏率作為考察指標(biāo)，研究了殼聚糖絮凝沉降法的最佳

10、條件，并與傳統(tǒng)的乙醇沉淀法進(jìn)行了比較。1儀器與材料儀器與材料1.1儀器：Agilent1100高效液相色譜儀（美國(guó)安捷倫公司），色譜柱：KromasilC18(5m、4.6mm200mm)，日立UV3010紫外分光光度計(jì)，十萬分之一電子分析天平（梅特勒公司提供），離心機(jī)（LD510，北京醫(yī)用離心機(jī)廠），pH計(jì)（PHS3C，上海三信儀表廠），超聲處理器（KQ250E，江蘇昆山超聲儀器公司）。1.2材料：中藥材購(gòu)自濟(jì)南建聯(lián)中藥店，質(zhì)量均符合

11、2010年版《中國(guó)藥典》一部相應(yīng)品種項(xiàng)下的相關(guān)規(guī)定。殼聚糖（山東奧康生物科技有限公司提供）；葛根素對(duì)照品（批號(hào)：110752200511），黃芩苷對(duì)照品（批號(hào)：110715200514），鹽酸小檗堿對(duì)照品（批號(hào)：2.2.6回收率試驗(yàn)采用加樣回收率試驗(yàn)，結(jié)果葛根素，黃芩苷回收率分別為：97.5%，98.1%，表明測(cè)定方法能夠準(zhǔn)確的測(cè)定出樣品中兩種成分的含量。2.2.7殼聚糖絮凝沉淀液中葛根素、黃芩苷的測(cè)定吸取供試品溶液和對(duì)照品溶液20L注

12、入液相色譜儀，測(cè)定，結(jié)果見表22.3殼聚糖絮凝沉淀液中小檗堿的測(cè)定2.3.1色譜條件：以十八烷基硅烷鍵合硅膠為填充劑；二元梯度流動(dòng)相，A為磷酸緩沖鹽（0.02molKH2PO4998.6mlH3PO41.4mL）溶液，加三乙胺調(diào)pH6.0；B為乙腈；0~10min(A：90%，B：10%)，10~25min(A：90~75%，B：10~25%)，25~35min(A：75~65%，B：2535%)，35~45min(A：65~60%，B

13、：35~50%)，45~50min(A：50~10%，B：90~100%)，流速：1.0mLmin1，柱溫：25℃，檢測(cè)波長(zhǎng)：268nm。2.3.2供試品溶液的制備：供試品溶液同葛根和黃芩供試品溶液。2.3.3線性關(guān)系考察：吸取鹽酸小檗堿對(duì)照品甲醇溶液（89.6gmL1）0.2，0.4，0.8，1.2，1.6，2mL，置于5mL的量瓶中，加甲醇至刻度，搖勻。精密吸取各濃度的對(duì)照品溶液20L，注入高效液相色譜儀，按照上述色譜條件測(cè)定。以峰

14、面積Y對(duì)濃度進(jìn)行線性回歸，得回歸方程：Y=25.184X3.164r=0.9998（n=6）。結(jié)果表明在鹽酸小檗堿3.584~35.84gmL1范圍內(nèi)線性關(guān)系良好。2.3.4穩(wěn)定性試驗(yàn)：吸取供試品溶液，分別于0，2，4，8，12，24h如法測(cè)定，結(jié)果小檗堿24h均穩(wěn)定，峰面積RSD分別為2.36%。2.3.5重復(fù)性試驗(yàn)：對(duì)同一樣品，連續(xù)取樣5次，制備供試品溶液，如法測(cè)定，結(jié)果小檗堿測(cè)定結(jié)果的變異系數(shù)RSD分別為1.96%。2.3.6回收

15、率試驗(yàn)：采用加樣回收率試驗(yàn)，結(jié)果小檗堿回收率平均為98.6%，表明測(cè)定方法能夠準(zhǔn)確的測(cè)定出樣品中兩種成分的含量。2.3.7殼聚糖絮凝沉淀液中小檗堿的測(cè)定吸取供試品溶液和對(duì)照品溶液20L注入液相色譜儀，測(cè)定，結(jié)果見表2。表2殼聚糖絮凝沉淀試驗(yàn)結(jié)果殼聚糖絮凝沉淀試驗(yàn)結(jié)果試驗(yàn)號(hào)ABC葛根素mgg1黃芩苷mgg1小檗堿mgg1111118.0916.084.65212217.3215.645.81313317.0417.686.63421218