小鼠腦原位模型建立簡介-陶冶

1、1,小鼠腦原位模型建立和其他文獻分享,陶冶 2019-05-22,,2,背景簡介,3,手術(shù)方法,實驗器材和用具：手術(shù)刀， 1%戊巴比妥鈉，定位儀，微量注射泵，顱骨鉆、酒精，雙氧水，棉簽，鑷子，U87-MG-LUC細胞，3M組織膠，電熱毯,4,手術(shù)方法,1%戊巴比妥鈉(85.7mg/公斤)將小鼠麻醉;將其頭部固定于定位儀上，上顎牙齒掛到定位儀上，旋動頭部螺旋使其剛好壓住老鼠的鼻子，將兩側(cè)小棒插入到小鼠雙耳中，約7格,使其頭部穩(wěn)定,

2、5,手術(shù)方法,消毒，碘酒擦拭，然后用酒精擦，共三遍；用手術(shù)刀從頭部中央劃開一個小口，用鑷子剪將傷口剪大；用傷口夾將傷口處皮膚拉向兩側(cè)，3%的雙氧水將筋膜去除，找到腦骨中線偏右側(cè)2mm附近定點。,6,手術(shù)方法,電鉆打孔；注射：抽取5µL 濃度為0.2x105的U87-MG-LUC細胞將微量注射泵固定于定位儀上，小心將針頭下降至頭顱鉆孔水平面，插入2.5mm，馬上回退0.5mm，使得顱內(nèi)保持有空腔方便細胞的吸收。注射速度為

3、1µL/min,7,手術(shù)方法,細胞注射完后，要將其靜止3分鐘后，慢慢將針頭退出,以便病毒很好的被吸收用捏子將傷口兩側(cè)皮膚扯到一塊，用3M組織膠粘合傷口，敷上抗生素，將小鼠放在熱毯上，便于蘇醒；.,8,實驗結(jié)果,可見光活體成像技術(shù)主要采用生物發(fā)光（bioluminescence）與熒光（fluorescence）兩種技術(shù)。生物發(fā)光是用熒光素酶（Luciferase）基因標記細胞或DNA，而熒光技術(shù)則采用熒光報告基團（GFP、R

4、FP, Cyt及dyes等）進行標記。利用一套非常靈敏的光學檢測儀器，讓研究人員能夠直接監(jiān)控活體生物體內(nèi)的細胞活動和基因行為。通過這個系統(tǒng)，可以觀測活體動物體內(nèi)腫瘤的生長及轉(zhuǎn)移、感染性疾病發(fā)展過程、特定基因的表達等生物學過程。傳統(tǒng)的動物實驗方法需要在不同的時間點宰殺實驗動物以獲得數(shù)據(jù), 得到多個時間點的實驗結(jié)果。相比之下，可見光體內(nèi)成像通過對同一組實驗對象在不同時間點進行記錄，跟蹤同一觀察目標（標記細胞及基因）的移動及變化，所得的數(shù)據(jù)更

5、加真實可信。另外, 這一技術(shù)對腫瘤微小轉(zhuǎn)移灶的檢測靈敏度極高，不涉及放射性物質(zhì)和方法, 非常安全。因其操作極其簡單、所得結(jié)果直觀、靈敏度高等特點,9,,多種腫瘤模型小鼠上的實驗結(jié)果顯示，靶向該調(diào)控因子的特異性抑制劑不僅可以減緩腫瘤生長，與免疫檢查點抑制劑聯(lián)合使用還能幫助消除腫瘤。中性粒細胞是人體內(nèi)數(shù)量最多的一類白細胞，正常情況下在對抗感染時沖鋒陷陣。然而在癌癥等病理條件下，有些中性粒細胞被腫瘤“帶壞”，轉(zhuǎn)變?yōu)樗柙匆种萍毎∕DSC），包

6、括多形核粒細胞性髓源抑制細胞（PMN-MDSC）。這種免疫抑制細胞非但不能發(fā)揮殺敵作用，還會直接抑制免疫系統(tǒng)的攻擊力，促進腫瘤進展和轉(zhuǎn)移，是造成腫瘤患者預(yù)后不理想的重要原因之一。他與同事們注意到，無論是從腫瘤模型小鼠還是腫瘤患者體內(nèi)分離出的PMN-MDSC中，脂肪酸轉(zhuǎn)運蛋白家族（FATP）中的FATP2表達水平顯著增高。這對免疫抑制細胞有什么影響呢？,顧名思義，脂肪酸轉(zhuǎn)運蛋白的一個重要作用是幫助脂肪分子穿過細胞膜。在酵母中發(fā)現(xiàn)，F(xiàn)AT

7、P2可以激活脂肪酸并將其帶進細胞內(nèi)。然后，脂肪酸在細胞內(nèi)經(jīng)過代謝或嵌入細胞膜?！熬拖窦毎ど嫌幸簧瓤刂浦|(zhì)進入的閘門，你轉(zhuǎn)動這扇閘門，就可以影響它的下游?！边@扇門在代謝系統(tǒng)中發(fā)揮至關(guān)重要的作用。而在免疫抑制細胞PMN-MDSC中，研究人員發(fā)現(xiàn)，過量表達的FATP2為細胞打開了更多的脂肪酸攝入之門，導致了細胞內(nèi)脂質(zhì)的積累，包括花生四烯酸（AA）。而花生四烯酸的增多及其下游產(chǎn)物的合成對PMN-MDSC的抑制活性起到重要作用。既然如此

8、，如果堵住FATP2這道門，是不是可以幫助PMN-MDSC解除抑制？當把腫瘤細胞注射進敲除了FATP2基因的小鼠體內(nèi)，研究人員發(fā)現(xiàn)腫瘤細胞的生長速度明顯慢于野生型小鼠，這一結(jié)果提示研究人員，調(diào)控FATP2或許可以達到抑制腫瘤生長的效果。,,發(fā)現(xiàn)了一種有效抑制FATP2的化合物lipofermata，可以消除培養(yǎng)組織中的脂肪堆積，并在小鼠體內(nèi)顯著減少脂肪吸收。這次，研究人員試著將lipofermata注射到腫瘤小鼠體內(nèi)。幾周以后，他們欣

9、喜地發(fā)現(xiàn)，這種小分子抑制劑可以起到顯著減緩腫瘤生長的作用，并且這一效果在淋巴瘤、肺癌、結(jié)腸癌和胰腺癌四種不同的腫瘤模型小鼠中都得到了重復(fù)?！蔼毺刂?，也是令人興奮之處在于，這種方法不只是針對某一種癌癥，”DiRusso教授說：“能靶向不同癌癥中普遍存在的某些細胞是特別令人期待的?！备档米⒁獾氖?，科學家們進一步嘗試了提高療效的辦法：聯(lián)合用藥。當把小分子抑制劑lipofermata與免疫檢查點抑制劑抗CTLA-4抗體結(jié)合起來使用，在8