新生小鼠腦白質(zhì)損傷模型的建立.pdf

1、目的：隨著醫(yī)療技術(shù)發(fā)展,早產(chǎn)兒存活率明顯增加,早產(chǎn)兒由于腦不成熟性極易發(fā)生損傷,引起早產(chǎn)兒遠(yuǎn)期不良預(yù)后如腦癱、認(rèn)知障礙等。早產(chǎn)兒腦損傷主要表現(xiàn)為腦白質(zhì)損傷即腦室周圍白質(zhì)軟化(periventricular leukomalacia,PVL),并伴隨灰質(zhì)的損傷。在早產(chǎn)兒腦白質(zhì)損傷高發(fā)的胎齡24-32周,腦室周圍白質(zhì)中少突膠質(zhì)前體細(xì)胞含量豐富并具有選擇易損性,少突膠質(zhì)前體細(xì)胞是早產(chǎn)兒腦白質(zhì)損傷中的靶細(xì)胞。圍產(chǎn)期缺氧缺血與感染/炎癥是導(dǎo)致少突

2、膠質(zhì)前體細(xì)胞損傷的兩個主要上游機(jī)制,小膠質(zhì)細(xì)胞激活、興奮氨基酸毒性、氧化應(yīng)激是導(dǎo)致少突膠質(zhì)前體細(xì)胞損傷的三個主要下游機(jī)制,生命早期的缺氧被認(rèn)為導(dǎo)致腦的缺氧缺血(HI)并導(dǎo)致早產(chǎn)兒腦損傷。在嚙齒動物中少突膠質(zhì)前體細(xì)胞(O4+O1-)在生后2-5天豐富,嚙齒動物HI模型即Vannucci模型是研究新生兒腦損傷最常用模型,常建立在生后7-9天的大鼠或小鼠,也有建立在生后3-6天的大鼠與生后6-7天的小鼠,但是缺少建立在少突膠質(zhì)前體細(xì)胞較為豐富

3、的生后2-5天的小鼠HI模型。本試驗?zāi)康膽?yīng)用5日齡小鼠缺血缺氧模型,觀察小鼠腦損傷情況,選擇合適的缺氧缺血時間,建立與早產(chǎn)兒腦白質(zhì)損傷病理改變相似的小鼠缺氧缺血模型。
　　 方法：新生5日齡C57BL/6日齡小鼠結(jié)扎左側(cè)頸總動脈,術(shù)后在恒溫箱中給予吸入10％氮氧混合氣體,試驗共分2組,缺氧缺血組和正常對照組,缺氧缺血組根據(jù)缺氧時間分為缺氧50分鐘組,70分鐘組與80分鐘組。試驗動物在缺氧缺血后3、7天后處死取腦行免疫組化染色,評

4、估不同缺氧缺血時間對腦損傷體積、腦損傷部位及炎癥反應(yīng)的影響。
　　 結(jié)果：缺氧缺血50分鐘組小鼠于缺氧缺血后3天處死,發(fā)現(xiàn)僅有3/12(25%)出現(xiàn)腦損傷,損傷的部位位于動脈結(jié)扎側(cè)海馬,可見CA1-CA3區(qū)神經(jīng)元丟失,動脈結(jié)扎對側(cè)沒有損傷,僅有2/12(17%)小鼠在動脈結(jié)扎側(cè)表現(xiàn)輕微的局限的腦白質(zhì)損傷;缺氧缺血后7天,腦白質(zhì)體積沒有明顯變化。缺氧缺血70分鐘組小鼠,在缺氧缺血后3天有13/14(93%)的小鼠表現(xiàn)腦損傷,損傷的

5、特點為結(jié)動脈扎側(cè)海馬的萎縮伴隨局限性白質(zhì)損傷同時也出現(xiàn)小面積皮層損傷,損傷部位可見激活的小膠質(zhì)細(xì)胞;缺氧缺血后7天,皮層下白質(zhì)體積減少14.0±4.2%,較對照組明顯減少。缺氧缺血80分鐘組小鼠,缺氧缺血后3天14/16(88%)的小鼠表現(xiàn)腦損傷,6/16(37.5%)的小鼠在動脈結(jié)扎側(cè)皮層、海馬、白質(zhì)與丘腦出現(xiàn)嚴(yán)重梗死。在所有HI的小鼠中,皮層下白質(zhì)中激活的小膠質(zhì)細(xì)胞均增多。
　　 結(jié)論：出生后5日齡小鼠缺氧缺血70分鐘產(chǎn)生局