氙氣對(duì)3日齡新生大鼠腦白質(zhì)損傷腦組織CLIC4 mRNA、Bcl-2蛋白表達(dá)的影響.pdf

1、目的：腹腔內(nèi)注射脂多糖聯(lián)合缺氧缺血制作3日齡新生大鼠腦白質(zhì)損傷模型，并對(duì)腦白質(zhì)損傷新生大鼠給予氙氣干預(yù)。通過檢測(cè)其腦組織中CLIC4 mRNA、Bcl-2蛋白的表達(dá),探討氙氣對(duì)新生大鼠腦白質(zhì)損傷的神經(jīng)保護(hù)作用機(jī)制。
　　方法：將3日齡SD新生大鼠120只隨機(jī)分為空白對(duì)照組（n=24），腦損傷組（n=24）和氙氣干預(yù)組（n=72）?？瞻讓?duì)照組腹腔注射生理鹽水（0.05mg/kg），僅游離右側(cè)頸總動(dòng)脈不做低氧處理；腦損傷組腹腔注射脂多

2、糖（lipopolysaccharide，LPS，0.05mg/kg），游離并結(jié)扎右側(cè)頸總動(dòng)脈并進(jìn)行低氧處理，但不進(jìn)行氙氣處理；氙氣干預(yù)組腹腔注射LPS（0.05mg/kg），游離并結(jié)扎右側(cè)頸總動(dòng)脈并進(jìn)行低氧處理及氙氣吸入處理（50%氙氣+30%氧氣+20%氮?dú)獾某錆M20L恒溫密閉箱，0.5L/min緩慢維持，持續(xù)處理3小時(shí)）。根據(jù)腦損傷后氙氣延遲干預(yù)的時(shí)間（0小時(shí)、2小時(shí)和5小時(shí)），將氙氣干預(yù)組分為C1、C2、C3三個(gè)亞組（n=24）

3、。各組大鼠分別于0h、24h、48h、72h各取6只行多聚甲醛灌注后斷頭取腦組織，進(jìn)行腦組織病理檢測(cè)、蛋白質(zhì)印跡法（Western Blot,WB）檢測(cè)B淋巴細(xì)胞瘤-2（B-cell lymphoma-2，Bcl-2）蛋白含量、逆轉(zhuǎn)錄-聚合酶鏈反應(yīng)（reverse transcriotion-polymerase chain reaction，RT-PCR）檢測(cè)氯離子通道蛋白4（Chloride Intracellular Channe

4、l4，CLIC4）mRNA的表達(dá)。采用獨(dú)立樣本t檢驗(yàn)、單因素方差分析和Bonferroni法進(jìn)行統(tǒng)計(jì)學(xué)分析。
　　結(jié)果：（1）實(shí)驗(yàn)新生鼠行為學(xué)監(jiān)測(cè)：腹腔注射脂多糖及缺氧缺血處理后，腦損傷組和氙氣干預(yù)組的新生鼠出現(xiàn)肢體抖動(dòng)、煩躁、紫紺、呼吸急促等行為學(xué)異常；在氙氣處理之后，C1組新生鼠的癥狀在約2小時(shí)后消失；而腦損傷組、C2組和C3組的癥狀約在5小時(shí)后消失；空白對(duì)照組新生鼠未出現(xiàn)明顯異常反應(yīng)。
　?。?）HE染色觀察腦組織病理

5、變化：腦損傷組新生鼠可見腦白質(zhì)蒼白，結(jié)構(gòu)疏松，細(xì)胞腫脹，核膜不清楚，細(xì)胞核固縮，可檢測(cè)到細(xì)胞變性和壞死，神經(jīng)纖維無序，膠質(zhì)細(xì)胞數(shù)量增加；氙氣干預(yù)組腦白質(zhì)染色淡染，結(jié)構(gòu)相對(duì)較完整，較少細(xì)胞變性壞死，各亞組之間無明顯差異；而空白對(duì)照組腦組織結(jié)構(gòu)正常，染色清晰，細(xì)胞排列整齊。
　?。?）WB檢測(cè)Bcl-2蛋白含量:在相同時(shí)間點(diǎn)，各組Bcl-2蛋白的表達(dá)量相比較，差異有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義（P＜0.05）；與腦損傷組相比，C1組和C2組中Bcl-2

6、蛋白的表達(dá)在各時(shí)間點(diǎn)均顯著增加，差異有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義（P＜0.05），但在C3中組的Bcl-2蛋白的表達(dá)在48h和72h與腦損傷組比較差異無統(tǒng)計(jì)學(xué)意義（P＞0.05）；與C1組相比，C2組和C3組Bcl-2蛋白表達(dá)在48h和72h顯著降低，差異有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義（P＜0.05）。
　?。?）RT-PCR檢測(cè)CLIC4 mRNA含量：與空白對(duì)照組相比較，在各時(shí)間點(diǎn)腦損傷組中新生鼠腦室周圍白質(zhì)CLIC4 mRNA的表達(dá)水平增加，差異有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義

7、（P＜0.05）；與腦損傷組相比較，氙氣干預(yù)各亞組中CLIC4 mRNA表達(dá)均明顯減少，差異有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義（P＜0.05）。
　　結(jié)論：
　?。?）腹腔內(nèi)注射LPS聯(lián)合缺氧缺血可成功制作新生兒大鼠腦白質(zhì)損傷模型；
　?。?）氙氣吸入干預(yù)可減輕新生兒大鼠腦白質(zhì)損傷，減少細(xì)胞壞死；
　　（3）新生大鼠腦白質(zhì)損傷后Bcl-2蛋白表達(dá)水平升高，氙氣可使其表達(dá)可下降，表明氙氣可能通過抑制神經(jīng)元凋亡進(jìn)而減輕白質(zhì)損傷作用；