臨床免疫學(xué)質(zhì)量控制

1、臨床免疫學(xué)檢驗質(zhì)量控制,評價情況總結(jié),,,,,,,,,臨床檢驗科全面質(zhì)量管理系統(tǒng),,,,內(nèi)容提要,分析前質(zhì)量控制分析中質(zhì)量控制分析后質(zhì)量控制,一、分析前質(zhì)量控制,培訓(xùn)實驗室工作人員；建立臨床實驗室質(zhì)量管理體系；實驗室規(guī)范設(shè)置；試劑盒的選擇、評價、使用與保存儀器的校準(zhǔn)、評價、維護(hù)和保養(yǎng)；標(biāo)本采集、運輸、核收、登記、處置與保存；質(zhì)控品、校準(zhǔn)品的選擇、評價和使用。,1、試劑盒的選擇、評價、使用與保存,乙肝等試劑盒

2、 生產(chǎn)批準(zhǔn)文號； 生產(chǎn)許可證 經(jīng)營許可證 藥品經(jīng)營許可證 批批檢定合格； 貼有防偽標(biāo)簽。 未作規(guī)定的試劑，應(yīng)從如下方面進(jìn)行評價： 靈敏度、特異性、精密度、穩(wěn)定性、簡便性、安全性及經(jīng)濟(jì)性等。,試劑盒的評價,真實性和可靠性 1、真實性：指測量值與實際值符合的程度（診斷試驗應(yīng)能提供哪些人確實有?。ㄕ骊栃裕┖湍男┤舜_實無?。ㄕ骊幮裕┑闹笜?biāo)）。 評價指

3、標(biāo) 相對靈敏度：是試驗檢出有病（即陽性）的人數(shù)占患者總數(shù)的比例，即真陽性率。相對靈敏度是衡量真陽性率的尺度。 相對特異性：是試驗檢出無?。搓幮裕┑娜藬?shù)占無病者總數(shù)的比例，即真陰性率。相對特異性是衡量真陰性率的尺度。,評價試劑盒相關(guān)指標(biāo)一覽表,相對靈敏度= TP /(TP + FN)； 相對特異性= TN/(FP + TN)； 相對符合率=(TP + TN)/(TP + FP + FN +TN)。

4、 2、可靠性：是指在相同條件下重復(fù)試驗獲得相同結(jié)果的穩(wěn)定程度。如試驗結(jié)果為均數(shù)，可用變異系數(shù)表示。 公式為：CV=s / x × 100% S為標(biāo)準(zhǔn)差，x 為平均值。,,列舉范例（資料參考）,（1）標(biāo)準(zhǔn)品來源：中國藥品生物制品檢定所。 （2）標(biāo)準(zhǔn)品模式： 抗HCV預(yù)期陽性100份,預(yù)期陰性98份。 （3）試劑來源于H廠家。 （4）在一次對丙肝試劑評價試

5、驗中，通過使用該試劑對198份標(biāo)準(zhǔn)品進(jìn)行檢測，發(fā)現(xiàn)抗HCV預(yù)期陽性100份標(biāo)本中，檢出陽性98份、陰性2份：預(yù)期陰性98份標(biāo)本中，檢出陰性96份，陽性2份。,評價丙肝試劑盒相關(guān)指標(biāo)一覽表,經(jīng)分析：  相對靈敏度 = TP /(TP + FN) =98/100=98% 相對特異性 = TN/(FP + TN) =96/98=97.96% 相對符合率 = (TP + TN)/(TP + FP + FN

6、 +TN) =98+96/198=97.98%,試劑的正確使用與保存,按說明書操作，不能想當(dāng)然； 詳實記載----批號、有效期、使用情況及更換試劑記錄等； 索要試劑商相關(guān)證件并有效保存，特別是批批檢報告書； 試驗用試劑 冰箱內(nèi)？ 使用時？ 多余部分如何處置？

7、 ……,,,,,存在的問題: （1）將試劑盒從冰箱中拿出即用 后果是：溫育時間不夠，對一些弱陽性標(biāo)本的檢測出現(xiàn)假陰性，尤其是冬天沒有空調(diào)的環(huán)境里。 要求： 試劑盒從冰箱中拿出室溫放置20min以上，與室溫平衡，然后再進(jìn)行測定。 目的： 在后面的溫育反應(yīng)中，能使反應(yīng)孔內(nèi)的溫度較快地達(dá)到所要求的高度，以滿足要求。,（2）商品化ELISA試劑盒中,洗板液由所提供的濃

8、縮液稀釋配置而成，故所用的蒸餾水或去離子水應(yīng)保證質(zhì)量。 （3）OPD底物溶液必須在反應(yīng)顯色前臨時配制。,2、目前免疫學(xué)檢驗所要控制的儀器,（1）移液器 利用稱重法校準(zhǔn)：吸取刻度指示量的水，萬分之一天平稱重后計算吸量是否正確，一般應(yīng)在±10%以內(nèi)。 （2）水浴箱、溫箱、冰箱 使用標(biāo)準(zhǔn)溫度計，經(jīng)常檢查水浴箱溫度計所示的溫度與水中（或溫箱內(nèi)）實測溫度是否一致，允許有±1℃

9、的誤差。,,,,,,,,,,,,,,,,,,,,,,,,,,,,,,,,,,,,,,,,,,,,,,,,,,,,,,,（3）洗板機(jī) 設(shè)置洗板后的殘留液一般不超過2ul；人工扣板時，墊紙不濕；定期檢查管孔是否堵塞。 （4）酶標(biāo)儀 經(jīng)常維護(hù)其光學(xué)部分，防止濾光片霉變；定期檢查校準(zhǔn)，使其保持良好的工作性能。,,3、臨床標(biāo)本的收集與保存 免疫試驗標(biāo)本十分廣泛， 體

10、 液：如血清、血漿、各種積液； 分泌物：如唾液、腦脊液； 排泄物：糞便、尿液； 均可用于測定其中的抗原或抗體成分，一般使用血清。,可能影響測定結(jié)果的標(biāo)本因素,患者標(biāo)本中有可能會含有干擾酶免疫測定導(dǎo)致假陽性和假陰性結(jié)果的干擾因素，其分為兩類： 1、內(nèi)源性干擾因素：類風(fēng)濕因子、補(bǔ)體、高濃度的非特異性免疫球蛋白、異嗜性抗體、某些自身抗體、因使用鼠抗體治療或誘導(dǎo)的抗鼠Ig抗體、交叉反應(yīng)等

11、。,2、外源性干擾因素：如標(biāo)本溶血、細(xì)菌污染、儲存時間過長、標(biāo)本凝固不全、冷凍保存標(biāo)本反復(fù)凍融等。 （1）盡量避免溶血 紅細(xì)胞破裂釋放出具有過氧化物酶活性物質(zhì)，增加非特異性顯色而成假陽性。 （2）血清標(biāo)本宜在新鮮時檢測 如有細(xì)菌污染，菌體中可能含有內(nèi)源性HRP，也會產(chǎn)生假陽性。 （3）盡量不用抗凝血，尤其不能用肝素抗凝血。 抗凝不完全的標(biāo)本因纖維蛋白原的干擾也可產(chǎn)生假陽性。 （4）標(biāo)本在

12、冰箱中保存不宜過長 易導(dǎo)致血清IgG聚合，使間接法試劑本底加深。 （5）盡量避免污染,4、建立臨床實驗室質(zhì)量管理體系 最重要的一點： “實驗室質(zhì)量管理文件”的書寫文件包含：質(zhì)量手冊、程序性文件、作業(yè)指導(dǎo)書和相關(guān)表格、報告等質(zhì)量記錄。 程序性文件：包括管理性和技術(shù)性文件兩種。 作業(yè)指導(dǎo)書：包括檢測細(xì)則、標(biāo)準(zhǔn)操作程序(SOP) 以文件形式存在，便于查閱，并

13、確保得到實施。,（二）分析中質(zhì)量控制 1、如何做好病毒性肝炎酶免檢驗質(zhì)控物定值的選擇？ 2、質(zhì)控品的正確使用； 3、ELISA檢測方法的注意事項； 4、室內(nèi)質(zhì)控的實際操作步驟；,1.如何做好病毒性肝炎酶免檢驗質(zhì)控物定值的選擇？ 質(zhì)控物：高值、中值、低值及陰性值； 設(shè)置臨界于cut-off(CO值)的低值弱陽性質(zhì)控物是室內(nèi)質(zhì)控的關(guān)鍵； 低值

14、弱陽性臨界值質(zhì)控物 是室內(nèi)質(zhì)控精密度觀察的最敏感的窗口，是提示試驗成功與否的最重要標(biāo)志； 不是判斷陰陽性的標(biāo)準(zhǔn)。,,現(xiàn)有的室內(nèi)質(zhì)控血清 項目 梅毒螺旋體抗體 質(zhì)控血清 抗HIV 國家二級標(biāo)準(zhǔn)物質(zhì) 抗HCV 國家二級標(biāo)準(zhǔn)物質(zhì) 抗HAVIgM

15、 質(zhì)控血清 HBcAbIgM 質(zhì)控血清 HBcAb 質(zhì)控血清 HBeAb 質(zhì)控血清 HBeAg 質(zhì)控血清 HBsAb 質(zhì)控血清 HBsAg 國家二級標(biāo)準(zhǔn)物質(zhì) 由國家質(zhì)量監(jiān)督檢驗檢疫總局批準(zhǔn)，

16、可在國家標(biāo)準(zhǔn)物質(zhì)信息平臺上檢索到，網(wǎng)址：http：//www.ncrm.org.cn,,,,2、質(zhì)控品的正確使用,用 途：靈敏度控制、精密度控制 。 穩(wěn)定性： 1、室溫（20-25 ℃，相對濕度20-25%）可穩(wěn)定兩周； 2、高溫高濕度（37 ℃，相對濕度60-80% ）條件下，可穩(wěn)定3天； 3、在冰箱內(nèi)冷藏（2-8 ℃）保存，可穩(wěn)定一年； 4、-20℃保存可穩(wěn)定一年以上。,室內(nèi)質(zhì)控

17、血清的規(guī)格,HBeAg質(zhì)控血清 定值 適用試劑1NCU/ml 進(jìn)口的試劑2NCU/ml 國產(chǎn)試劑4NCU/ml 國產(chǎn)試劑 新的4NCU/ml≈原0.25 NCU/ml,,

18、,,HBeAb質(zhì)控血清 定值 適用試劑 1NCU/ml 進(jìn)口的試劑 2NCU/ml 進(jìn)口的試劑 4NCU/ml 國產(chǎn)試劑,,,,3、 檢測方法的注意事項,? 結(jié)果判

19、讀 衛(wèi)藥發(fā)（1995）第32號及（1996）第25號文要求： 凡開展ELISA檢測項目的單位，必須使用酶標(biāo)儀判讀結(jié)果，不準(zhǔn)使用目測法。,? ELISA測定的“灰區(qū)”,是指ELISA測定時，吸光度處于Cut—off值周圍的一定區(qū)域，其結(jié)果應(yīng)為“可疑”。需重復(fù)實驗或換試劑重測以確定其陰、陽性，如仍落在灰區(qū)范圍內(nèi)則報告±值。 ? 灰區(qū)概念對血站系統(tǒng)的

20、獻(xiàn)血員篩查尤為重要 灰區(qū)的設(shè)置有兩種 （1）C.O×（1±CV），CV為該試劑的批內(nèi)CV（一般在15%--20%間）。如：HBsAg 1.05 ×（1±18%） （2）C.O±2s，s為實驗室做室內(nèi)質(zhì)控OCV的s。如：HBsAg 1.05±2 × 0.189,? 原始記錄,（1）分類別、客觀、如實、準(zhǔn)確、及時登記，項目齊全、書寫清晰、

21、規(guī)范； （2）陰、陽性與可疑結(jié)果不能用“ +、- 、±”表示，必須用漢字書寫或蓋印章； （3）ELISA試驗每次檢測必須有原始酶標(biāo)儀打印結(jié)果，其S/c.o值應(yīng)與原始登記結(jié)果一一對應(yīng)； （4）定量試驗結(jié)果必須采用法定的國際計量單位；,4、室內(nèi)質(zhì)控的實際操作步驟,1）設(shè)定靶值和控制限 2）特殊情況的處理：如Crubbs氏法 3）更換試

22、劑及質(zhì)控品： 應(yīng)在“舊”批號質(zhì)控品使用結(jié)束前與“新”批號質(zhì)控品一起測定，設(shè)立新的靶值和控制限。 4）繪制質(zhì)控圖及記錄質(zhì)控結(jié)果：根據(jù)質(zhì)控圖的靶值和控制限繪制Levey---Jennings控制圖，將原始質(zhì)控結(jié)果記錄在質(zhì)控圖表上，保留打印的原始質(zhì)控記錄。,5）質(zhì)控規(guī)則的應(yīng)用： 判斷每一分析批是在控還是失控。 6）失控情況處理： 失控----填寫失控報告單----交專業(yè)室

23、主管（組長）---- 作出是否發(fā)出檢驗報告的決定。,7）失控原因分析 操作失誤、試劑、校準(zhǔn)物、質(zhì)控品的失效，儀器維護(hù)不良以及采用的質(zhì)控規(guī)則、控制限范圍、一次測定的質(zhì)控標(biāo)本數(shù)等。 失控信號出現(xiàn)：意味著與測定質(zhì)控品相關(guān)的那批病人標(biāo)本報告可能作廢。 8）查明失控原因 隨機(jī)挑選5%或10%的患者標(biāo)本進(jìn)行重測，依既定標(biāo)準(zhǔn)判斷先前測定結(jié)果是否可接受，對失控做出正確判斷。,

24、（三）分析后質(zhì)量控制,1、實驗結(jié)果報告 （1）統(tǒng)一的報告形式，包含必要的信息，應(yīng)有核對制度，當(dāng)天的報告應(yīng)由主管或主管委托人審核，簽字或蓋章后方能發(fā)出。 （2）各項目原始數(shù)據(jù)及測定結(jié)果應(yīng)保存3—10年，便于查詢。 （3）如遇危及生命的“緊急值”，應(yīng)立即通知臨床診治醫(yī)師予以處置。,,2、室內(nèi)質(zhì)控數(shù)據(jù)管理（1）每月室內(nèi)質(zhì)控數(shù)據(jù)處理；（2）每月室內(nèi)質(zhì)控數(shù)據(jù)保存；（3）每月上報的室內(nèi)質(zhì)控數(shù)據(jù)圖表。