緒論臨床免疫學(xué)和病原學(xué)檢查

1、實(shí)驗(yàn)診斷學(xué)概論 福建醫(yī)科大學(xué)附屬協(xié)和醫(yī)院,實(shí)驗(yàn)診斷學(xué)的概念,以臨床檢驗(yàn)學(xué)為基礎(chǔ)，將檢驗(yàn)學(xué)提供的結(jié)果或數(shù)據(jù)，由醫(yī)師結(jié)合臨床病史/家族史、癥狀/體征、影像資料/病例檢查等，應(yīng)用于臨床診斷、鑒別診斷、療效觀察和預(yù)后判斷；也可以為科學(xué)研究、預(yù)防疾病、健康普查和遺傳咨詢等提供實(shí)驗(yàn)依據(jù)?；A(chǔ)醫(yī)學(xué)向臨床醫(yī)學(xué)過度的橋梁課程,實(shí)驗(yàn)診斷學(xué)的應(yīng)用范圍和局限性,應(yīng)用范圍：隨著醫(yī)學(xué)模式由疾病診治單

2、一模式向多方向轉(zhuǎn)化而逐漸拓寬和不斷充實(shí) 1.為臨床醫(yī)學(xué)服務(wù)： （1）確定診斷：白血病的血細(xì)胞和骨髓象檢查 病毒的核酸和某些抗體的檢查 寄生蟲查到蟲卵/成蟲 （2）鑒別診斷：細(xì)菌和病毒感染的鑒別等 （3）輔助診斷：肝、腎、內(nèi)分泌功能的檢查 （4）療

3、效觀察、預(yù)后判斷和復(fù)發(fā)監(jiān)測等,實(shí)驗(yàn)診斷學(xué)的應(yīng)用范圍和局限性,應(yīng)用范圍： 2. 為預(yù)防醫(yī)學(xué)服務(wù)：通過流行病學(xué)調(diào)查、及時(shí)發(fā)現(xiàn)傳 染源，制定預(yù)防和控制措施 3. 為健康普查服務(wù)：早期發(fā)現(xiàn)、早期診斷、早期治療 4. 為遺傳咨詢服務(wù)：優(yōu)生優(yōu)育、杜絕遺傳性疾病,實(shí)驗(yàn)診斷的影響因素,實(shí)驗(yàn)診斷學(xué)的影響因素1. 實(shí)驗(yàn)（分析）前的影響因素（75%以上） 生理因素：人種、民族、性別、年齡等

4、 生活狀態(tài)：運(yùn)動、體位、進(jìn)食等 環(huán)境因素：居住條件、地區(qū)和海拔高度等 標(biāo)本的采集、保存和運(yùn)送 藥物的影響2. 實(shí)驗(yàn)（分析）中的影響因素3. 實(shí)驗(yàn)（分析）后的影響因素,實(shí)驗(yàn)診斷學(xué)的質(zhì)量管理,室內(nèi)質(zhì)量控制： 控制精密度， 由實(shí)驗(yàn)室自己實(shí)施 針對實(shí)驗(yàn)室內(nèi)部影響質(zhì)量的所有環(huán)節(jié)室間質(zhì)量評估 控制準(zhǔn)確性、可比性，由權(quán)威機(jī)構(gòu)組織全面質(zhì)量控制 就建立

5、全面的質(zhì)量管理體系 參加實(shí)驗(yàn)室認(rèn)可：15189，CAP,分析前的質(zhì)量管理,患者的準(zhǔn)備標(biāo)本的控制,標(biāo)本因素對檢驗(yàn)質(zhì)量的影響,標(biāo)本的類別 1. 血標(biāo)本：全血、血漿和血清等。 全血：臨床血液學(xué)檢查 血漿：血栓和止血檢查 血清：生化和免疫檢查 靜脈血、動脈血和毛細(xì)血管血，分別適合不同的檢測 真空采血管,標(biāo)本因素對檢驗(yàn)質(zhì)量的影響,標(biāo)本的類別 2.

6、 尿液標(biāo)本：尿液檢驗(yàn)的檢查結(jié)果是否準(zhǔn)確與標(biāo)本正 確收集直接相關(guān) 隨機(jī)尿：門急診患者的常規(guī)檢驗(yàn) 首次晨尿：濃縮尿，細(xì)胞和管型等形態(tài)完整，適合有形成分的檢測 24小時(shí)尿：定量分析 中段尿：培養(yǎng)用的尿液 3. 糞便：應(yīng)新鮮、干凈的容器以免污染，常規(guī)5－10g， 寄生蟲留取全部或24小時(shí)糞便，培養(yǎng)應(yīng)留取可疑陽性 部分,標(biāo)本因素對檢驗(yàn)質(zhì)量的影響,標(biāo)本的類別

7、 4. 腦脊液：收集三份于無菌小瓶中，每瓶1－2ml 第一瓶常混有血液：培養(yǎng) 第二瓶做化學(xué)檢查 第三瓶做細(xì)胞檢查 5. 漿膜腔液：胸腔、腹腔、心包腔和關(guān)節(jié)腔等 6. 羊水：不同的檢查目的采取不同的穿刺時(shí)間和量 診斷胎兒性別和遺傳?。?6－20周，20－30ml 了解胎兒成熟度：晚期妊娠，10－20ml,標(biāo)本因素對檢驗(yàn)質(zhì)量的影響,標(biāo)本的類別 7. 前列腺和精

8、液： 8. 痰液和支氣管灌洗液 9. 其他：胃及十二指腸液等,標(biāo)本因素對檢驗(yàn)質(zhì)量的影響,標(biāo)本的采集 1. 患者的準(zhǔn)備及患者身份識別： 飲食狀態(tài)，精神狀態(tài)，運(yùn)動狀態(tài)等 條形碼，身份證等 2. 采集時(shí)間 清晨空腹標(biāo)本：受各種因素影響小，減少晝夜節(jié)律影響，重復(fù)性好 隨機(jī)或急診標(biāo)本：無法限定時(shí)間；體內(nèi)代謝比較穩(wěn)定、影響因素少 指定時(shí)間標(biāo)本：糖耐量、培養(yǎng)等,標(biāo)本因素

9、對檢驗(yàn)質(zhì)量的影響,標(biāo)本的采集 3. 采血的體位：當(dāng)人體從臥位到直立或者坐位時(shí)會導(dǎo) 致液體從血管內(nèi)向組織間隙擴(kuò)散約12%，許多指標(biāo)影 響較大 4. 止血帶的使用,標(biāo)本因素對檢驗(yàn)質(zhì)量的影響,標(biāo)本的采集 5. 正確使用添加劑 6. 采集標(biāo)本的順序：通常血常規(guī)的管子是最后采集的 排除EDTAK2對生化檢查的污染 7. 充分混勻 8. 避免溶血,標(biāo)本因素對檢驗(yàn)質(zhì)量的影響,標(biāo)本的運(yùn)送 盡早

10、送檢，特殊樣本還需冰浴， 不能及時(shí)檢測應(yīng)妥善保存標(biāo)本的保存 不同的檢測項(xiàng)目采用不同的保存條件 大多項(xiàng)目在4 ℃可保存三天，－20 ℃可保存1個(gè)月，－80 ℃或液氮可保存3個(gè)月以上，甚至長期保存標(biāo)本的及時(shí)分離和檢測,分析中的質(zhì)量控制,方法的選擇 標(biāo)準(zhǔn)操作規(guī)程的的制定和執(zhí)行室內(nèi)質(zhì)控室間質(zhì)評,分析后的質(zhì)量控制,分析后的質(zhì)量管理是檢驗(yàn)全面質(zhì)量管理的最終環(huán)節(jié)，是檢驗(yàn)結(jié)果轉(zhuǎn)化為臨床診療信息的過程

11、數(shù)據(jù)的處理：制式的改變，圖形的處理等 檢驗(yàn)結(jié)果的審核：復(fù)查、危急值的處理等報(bào)告單的發(fā)放：應(yīng)注意疫情、患者的隱私臨床咨詢、報(bào)告解釋和抱怨處理等，持續(xù)改進(jìn)的輸入,實(shí)驗(yàn)診斷的臨床應(yīng)用和評價(jià),正確選擇實(shí)驗(yàn)室檢查項(xiàng)目 1. 滿足臨床診斷、治療和預(yù)防的需求（篩選、診斷、鑒別診斷、特異性、敏感性） 2. 符合詢證醫(yī)學(xué)和實(shí)驗(yàn)項(xiàng)目優(yōu)化組合的要求 3. 減輕患者的負(fù)擔(dān)和痛苦 4. 必須在詳細(xì)詢問病史、全

12、面的體格檢查的基礎(chǔ)上,實(shí)驗(yàn)診斷的臨床應(yīng)用和評價(jià),診斷性實(shí)驗(yàn)的評價(jià)指標(biāo)（如定性和細(xì)菌培養(yǎng)等） 金標(biāo)準(zhǔn) 疾病 非疾病

13、 ＋ a（真陽性） b（假陽性） a+b 診斷性實(shí)驗(yàn) － c（假陰性） d（真陰性） c+d 總數(shù) a+c=n1 b+d=n2 n1. 敏感度或者真陽性率：金標(biāo)準(zhǔn)診斷為有病的人中，診斷性試驗(yàn)陽性者的比例：a/

14、(a+c)2.特異度或者真陰性率：金標(biāo)準(zhǔn)診斷為無病的人中，診斷性試驗(yàn)陰性者的比例：d/(b+d)3. 陽性預(yù)測值：診斷性試驗(yàn)陽性者中有病者所占的比例，即患者診斷性試驗(yàn)陽性，其患病 的可能性。a/(a+b)4. 陰性預(yù)測值：診斷性試驗(yàn)陰性者中，無病者所占的比例，即診斷性試驗(yàn)為陰性時(shí)，不患 病的可能性。d/(d+c),實(shí)驗(yàn)診斷的臨床應(yīng)用和評價(jià),常用診斷性實(shí)驗(yàn)的評價(jià)指標(biāo) 1. 診斷靈敏度

15、 指某檢驗(yàn)項(xiàng)目對某種疾病具有鑒別、確認(rèn)的能力， 為所有病人中獲得真陽性結(jié)果的百分?jǐn)?shù)。 2. 診斷特異性 指某檢驗(yàn)項(xiàng)目確認(rèn)無某種疾病的能力，為非病人中 獲得真陰性結(jié)果的百分?jǐn)?shù),實(shí)驗(yàn)診斷的臨床應(yīng)用和評價(jià),常用診斷性實(shí)驗(yàn)的評價(jià)指標(biāo) 3. 診斷準(zhǔn)確度 指某檢驗(yàn)項(xiàng)目在實(shí)際使用中，所有檢驗(yàn)結(jié)果中診斷 準(zhǔn)確結(jié)果的百分比。 4. 使用檢驗(yàn)項(xiàng)目臨床性能評價(jià)的ROC曲

16、線尋找最佳判 斷限界及其診斷靈敏度和特異性,實(shí)驗(yàn)診斷的臨床應(yīng)用和評價(jià),ROC曲線的臨床應(yīng)用 ROC為“信號接受特性圖”（receiving operating charateristics )，是最常用有效的對檢驗(yàn)項(xiàng)目臨床性能評價(jià)的定量資料進(jìn)行歸納分析的統(tǒng)計(jì)學(xué)方法。 1. 病人和非病人的定量數(shù)據(jù)以分布圖形式表示 2. 所有數(shù)據(jù)列表以不同的的限值為判斷限，計(jì)算各組數(shù)據(jù)的真陽性率 和假陽性

17、率。 3. 假陽性率為橫坐標(biāo)、真陽性率為縱坐標(biāo)，將數(shù)據(jù)點(diǎn)于圖上并連接各 點(diǎn)，繪制ROC曲線。 4. 常用于兩種以上診斷性檢驗(yàn)的診斷價(jià)值比較和尋找界點(diǎn)。,實(shí)驗(yàn)診斷的參考值范圍與醫(yī)學(xué)決定水平,參考范圍 參考值：是指在特定條件下（健康人群）抽樣的個(gè)體進(jìn)行某項(xiàng)目檢 測所測得的值 參考范圍：95%抽樣所測值的平均值 （ x ）加減其標(biāo)準(zhǔn)差（s）而構(gòu)

18、 成，影響因素多，應(yīng)建立自己的參考值，或進(jìn)行驗(yàn)證 醫(yī)學(xué)決定水平 指不同于參考值的另一些限值，通過觀察測定值是否高于或者低于這些限值，可在疾病診斷中起排除或確認(rèn)的作用 危急值： 是指某些結(jié)果出現(xiàn)異常，超過這一界定值可危及患者生 命，醫(yī)生必須 緊急處理（報(bào)告）,實(shí)驗(yàn)診斷學(xué)的學(xué)習(xí)重點(diǎn)和方法,以常見病為基礎(chǔ)，以重點(diǎn)器官為中心，重點(diǎn)抓住反映他們的實(shí)驗(yàn)診斷項(xiàng)目學(xué)習(xí)以

19、檢驗(yàn)項(xiàng)目為中心，深入聯(lián)系理論基礎(chǔ)、廣泛聯(lián)系臨床疾?。ㄔ怼C(jī)制、臨床意義和一些重要的概念）,臨床免疫學(xué)測定 前言,生活水平提高改變生活方式兩大新興產(chǎn)業(yè)：保?。ㄌ岣呙庖吡Γ┖兔廊萑绾卧u判免疫力：太低－－感染、腫瘤 太高－－自身免疫性疾病 最主要的因素：機(jī)體的免疫系統(tǒng)怎樣從實(shí)驗(yàn)室的角

20、度來衡量？,臨床常用免疫學(xué)和病原學(xué)檢查 福建醫(yī)科大學(xué)附屬協(xié)和醫(yī)院,,隨著現(xiàn)代免疫學(xué)理論和技術(shù)的飛速發(fā)展，臨床免疫學(xué)的檢測項(xiàng)目也日趨增多。某些檢測項(xiàng)目可為臨床診斷、鑒別診斷、療效觀察和預(yù)后判斷提供特異的和敏感的信息，以下就一些常用的免疫學(xué)檢查作一些介紹。,第一節(jié) 體液免疫檢查,一、免疫球蛋白的檢測（一）概念：免疫球蛋白是指具有抗體活性和/或抗體樣結(jié)構(gòu)的球蛋白，由漿細(xì)胞產(chǎn)生

21、，存在于機(jī)體的血液、體液、外分泌液和某些細(xì)胞的膜上。按其重鏈性質(zhì)分為IgG、A、M、D和E五大類，在血清中IgG、A、M的含量為g/L水平，而IgD、IgE和血清以外的IgG、A、M僅為mg/L，因此不同類的免疫球蛋白需要選擇不同敏感度的方法。（二）常用的檢測方法 1．單向瓊脂擴(kuò)散法： 2．免疫比濁法： 3．酶聯(lián)免疫吸附法（ELISA法）：,（三）免疫球蛋白的分類,IgG: 為人體中含

22、量最多和最主要的免疫球蛋白，占總免疫球蛋白的70－80％，屬再次免疫應(yīng)答抗體；也是唯一能通過胎盤的Ig，新生兒可被動獲得免疫。IgA:分為血清型和分泌型。分泌型的IgA（S IgA）由呼吸道、消化道、泌尿生殖道的淋巴樣組織合成，參與這些部位的局部免疫。IgM：初次免疫應(yīng)答反應(yīng)中的Ig，最早出現(xiàn)的抗體，也是分子量最大的Ig。,（三）免疫球蛋白的分類,IgE：是血清中含量最少的一種Ig，與變態(tài)反應(yīng)、寄生蟲感染及皮膚過敏等有關(guān)。I

23、gD ：妊娠末期和吸煙者含量升高6. M蛋白：或稱單克隆免疫球蛋白，是一種單克隆B細(xì) 胞增殖產(chǎn)生的具有相同結(jié)構(gòu)和電泳遷移率的免疫球蛋白分子及其分子片斷，見于多發(fā)性骨髓瘤、巨球蛋白血癥、重鏈病和輕鏈病等,（三）、檢測的臨床意義 1．低Ig血癥 （1）先天性低Ig血癥 見于體液免疫缺陷和聯(lián)合免疫缺陷。如先 天 性無丙種球蛋白血癥，IgG〈1g/L，A和M僅為正常值的

24、 1%。先天性IgA缺乏癥患者容易反復(fù)呼吸道感染、IgG缺乏 易患化膿性感染，而IgM缺乏易引起革蘭氏陰性桿菌敗血癥 （2） 獲得性低Ig血癥 淋巴肉瘤、腎病綜合征、中毒性骨髓瘤等 可造成血清中Ig明顯降低。 2．高Ig血癥 （1）非特異性多株峰免疫球蛋白增高癥 慢性細(xì)菌感染、結(jié)核、 慢性支氣管

25、炎、風(fēng)濕時(shí)IgG升高，急性感染早期可IgM升高， 自身免疫性疾病、膠原病、類風(fēng)濕、關(guān)節(jié)炎、SLE可見IgG、 A、M升高，肝病和肝硬化時(shí)可呈現(xiàn)IgG、A升高。 （2）特異性單株峰免疫球蛋白增高癥(巨球蛋白血癥IgM升高）,3．IgD 妊娠末期和吸煙者含量升高。IgD骨髓瘤 患者血清IgD水平比正常人高10000倍，是唯 一明確可作為確診的證據(jù)。

26、4．血清總IgE 對特異性疾病的診斷、治療和探 索發(fā)病機(jī)制有重要意義。寄生蟲感染時(shí)IgE升 高。特異性哮喘、過敏性鼻炎等患者血清中 IgE含量升高與發(fā)病和緩解呈平行關(guān)系。,二、補(bǔ)體的檢測（一）概念：補(bǔ)體是人或動物血清中的一組具有酶活性 的蛋白質(zhì)，在機(jī)體免疫系統(tǒng)中發(fā)揮抗感染和免疫 調(diào)節(jié)的作用，也參與免疫病理反應(yīng)。,（二）常用的檢測方法和臨床意義

27、 1．血清總補(bǔ)體溶血活性（CH50）測定： 主要反應(yīng)補(bǔ)體經(jīng)典激活途徑的溶血功能，其結(jié)果與 C1-C9各組分的量和活性均有關(guān)，但并非完全相關(guān)，一 般以50％溶血作為檢測終點(diǎn)，因此又稱為CH50。此方 法不能測定補(bǔ)體蛋白的絕對值，也不能測定備解素系 統(tǒng)中的成分。 臨床意義： CH50增高見于急性腎炎、組織損傷、惡性腫瘤 等；而降低見于急

28、性腎小球腎炎、SLE活動期、類風(fēng) 關(guān)、 亞急性細(xì)菌性心內(nèi)膜炎、嚴(yán)重肝病尤其是肝壞死 CH50降低甚至測不出來，有助于判斷肝受損的程度。,2．補(bǔ)體成分C3、C4的測定 C3、C4是補(bǔ)體級聯(lián)反應(yīng)的關(guān)鍵成分，其中C3是補(bǔ)體系統(tǒng)中含量最高的 （1）C3、C4的含量測定：單向瓊脂擴(kuò)散法和免疫比濁法 （2）C3、C4的活性測定：免疫溶血法 （3）臨床意義

29、：補(bǔ)體 C3 、C4 減低常見于： ①補(bǔ)體合成能力下降：慢性活動性肝炎、肝硬化、肝壞死等； ②消耗或丟失過多：大多數(shù)急性腎小球腎炎、鏈球菌感染后腎炎、狼瘡性腎炎患者，還見于大面積燒傷、活動性SLE和類風(fēng)濕關(guān)節(jié)炎活動期等； ③合成原料不足，如兒童營養(yǎng)不良性疾?。?④先天性補(bǔ)體缺乏。,第二節(jié) 細(xì)胞免疫檢查,人體的淋巴細(xì)胞分為T、B和NK等細(xì)胞群，它們又可以分為若干個(gè)亞群，各有其特異的表面標(biāo)志和功能。臨床上各種免

30、疫疾病均可出現(xiàn)不同群淋巴細(xì)胞數(shù)量和功能上的變化，對它們進(jìn)行檢測可以判斷細(xì)胞免疫功能。,一、T淋巴細(xì)胞的檢測（一）數(shù)量的檢測： 1．花環(huán)形成實(shí)驗(yàn) 2．T細(xì)胞分化抗原測定： CD3：總T細(xì)胞； CD4：輔助性T細(xì)胞 CD8：抑制性T細(xì)胞 檢測方法：免疫熒光法和流式細(xì)胞檢測法（二）功能的檢測：淋巴細(xì)胞轉(zhuǎn)化試驗(yàn)

31、 1． 形態(tài)學(xué)方法 2．3H-TdR摻入法,（三）臨床意義 1．降低：見于免疫缺陷性疾病，如惡性腫瘤、免疫 性疾病、某些病毒感染、大面積燒傷等。 2．升高：見于甲亢、甲炎、重癥肌無力、慢活肝、 SLE活動期和器官移植排斥反應(yīng)等。 3．CD

32、3降低：見于自身免疫性疾病如SLE、類風(fēng)濕 關(guān)節(jié)炎等； CD4降低：見于惡性腫瘤、愛滋病、遺傳性免疫 缺陷癥、應(yīng)用免疫抑制劑等。 CD4/CD8減低常見于愛滋病，而在器官移植時(shí) CD4/CD8增高預(yù)示可能發(fā)生排斥反應(yīng)。,二、B

33、淋巴細(xì)胞的檢測（一）數(shù)量的檢測 1．B細(xì)胞膜表面免疫球蛋白測定： 免疫熒光法和 (SmIg) 流式細(xì)胞檢測法 2．B細(xì)胞分化抗原檢測：CD19/20/22（二）功能的檢測 1．溶血空斑試驗(yàn) 2．抗體的檢測（三）臨床意義

34、 1．降低見于各種原發(fā)性和繼發(fā)性免疫缺陷病 2．升高見于淋巴增殖性疾病如慢粒和多毛細(xì) 胞白血病等。,三、自然殺傷（NK）細(xì)胞免疫檢測 NK細(xì)胞是一種異質(zhì)性、多功能的T細(xì)胞亞群，NK細(xì)胞介導(dǎo)天然免疫應(yīng)答，并不依賴抗體和補(bǔ)體，是人體抵御外來侵略的第一道防線。 NK細(xì)胞的測定包括活性測定和抗體依賴性細(xì)胞介導(dǎo)的細(xì)胞毒測定 NK細(xì)胞活性可作為判

35、斷機(jī)體抗腫瘤和抗病毒感染的指標(biāo)之一，減低見于腫瘤、免疫缺陷病、艾滋病和某些病毒感染；增高見于宿主抗移植物反應(yīng)。,四、細(xì)胞因子檢測 細(xì)胞因子是一類由免疫細(xì)胞和相關(guān)細(xì)胞產(chǎn)生的具有調(diào)節(jié)細(xì)胞功能的高活性、多功能和低分子的分泌性蛋白質(zhì)，細(xì)胞因子的檢測是判斷機(jī)體免疫功能的一個(gè)重要指標(biāo)。 1. IL-2：由活化T細(xì)胞產(chǎn)生，是具有多向性作用的細(xì)胞因子，在機(jī)體的免疫應(yīng)答和抗病毒感染中起重要作用。 2. TNF：分為TN

36、Fα和TNF β兩型，前者來源于單核細(xì)胞和吞噬細(xì)胞，后者來源于T淋巴細(xì)胞。兩型的結(jié)構(gòu)雖然不同，但生物活性類似，都具有引起腫瘤組織出血、壞死和殺傷作用，都可引起抗感染的炎癥反應(yīng)效應(yīng)，并對免疫細(xì)胞具有調(diào)節(jié)誘生作用。 3. IFN-γ：具有抗病毒、抗腫瘤、控制細(xì)胞增殖和免疫調(diào)節(jié)作用，增高見于SLE、急性病毒感染、非活動性類風(fēng)濕性關(guān)節(jié)炎；減低見于乙肝及攜帶者、活動性類風(fēng)濕性關(guān)節(jié)炎。,第三節(jié) 感染免疫檢測,病原體（細(xì)菌、病毒、立克次體

37、、寄生蟲等）及其代謝產(chǎn)物刺激人體免疫系統(tǒng)，產(chǎn)生相應(yīng)的免疫產(chǎn)物，后者進(jìn)入血液或其他體液當(dāng)中，這些產(chǎn)物可利用凝集試驗(yàn)、補(bǔ)體結(jié)合試驗(yàn)、ELISA、免疫熒光和放射免疫法等免疫學(xué)手段進(jìn)行檢測，從而輔助疾病的診斷和判斷機(jī)體的免疫狀態(tài)。,一、肝炎標(biāo)志物的檢測： 1．甲型肝炎病毒標(biāo)志物的檢測 （1）甲型肝炎病毒抗原和RNA測定： ELISA和RT-PCR法 （2）甲型肝炎病毒抗體測定：ELISA （3）甲型肝炎病毒抗體I

38、gM陽性表明機(jī)體 正在感染甲肝，它是早期診斷甲肝的 特異性指標(biāo)。而IgG陽性提示既望感 染，可作為流行病學(xué)調(diào)查的指標(biāo)。,2．乙型肝炎病毒標(biāo)志物的檢測 （1）乙肝兩對半的檢查：ELISA （2）乙肝病毒DNA的測定：PCR法和斑 點(diǎn)雜交試驗(yàn) （3）臨床意義：乙肝兩對半的檢

39、測反應(yīng) 機(jī)體對乙肝病毒的免疫 狀態(tài)，而乙肝病毒DNA 是診斷乙型肝炎的佐證。,HBsAg HBsAb HBeAg HBeAb HBcAb 1 + - - - -

40、攜帶者 2 + - + - - 急性感染早期,HBV復(fù)制活躍 3 + - + - + 急性或慢性感染,復(fù)制活躍 4 + - - + + 急性或慢性感染,復(fù)制減弱或停止 5 - -

41、 - + + 既往感染,未出現(xiàn)表抗,窗口期 6 - - - - + 既往感染,未出現(xiàn)表抗,窗口期 7 - + - + + 恢復(fù)期 8 - + - - + 恢復(fù)期

42、 9 - + - - - 病后或接種疫苗后獲得性免疫 10 + + + - + 不同亞型的感染,,,3．丙型肝炎病毒標(biāo)志物的檢測 （1）丙型肝炎病毒RNA測定：斑點(diǎn)雜交法和

43、 RT-PCR法 （2）丙型肝炎病毒抗體測定：ELISA和RIA法 （3）急性丙肝患者，發(fā)病后1-4周丙型肝炎病 毒抗體IgM即可陽性，可持續(xù)1-4周。6個(gè) 月痊愈者，抗-HCVIgM轉(zhuǎn)陰，反之將轉(zhuǎn) 為慢性丙型肝炎； 而IgG陽性表明已有 HCV感染，輸血后肝炎有80%-90%患者 抗-HC

44、VIgG陽性。,4．丁型肝炎病毒標(biāo)志物的檢測(缺陷RNA病毒） （1）丁型肝炎病毒抗原和RNA測定：ELISA和RT- PCR法 （2）丁型肝炎病毒抗體測定：ELISA （3）抗-HDVIgG只能在HBsAg陽性的血清中檢測 到，是診斷丁型肝炎的可靠指標(biāo)，抗-HDV

45、 IgM出現(xiàn)較早，可用于早期診斷。5．戊型肝炎病毒標(biāo)志物的檢測：ELISA檢測抗體6．庚型肝炎病毒標(biāo)志物的檢測：ELISA檢測抗體， 也多見于輸血后感染,小結(jié),肝炎病毒的檢測方法:抗原的檢測: ELISA法或免疫熒光法抗體的檢測: ELISA法或免疫熒光法基因的檢測: DNA病毒用PCR法 RNA病毒用RT-PCR法,二、細(xì)菌感染的免

46、疫檢測 （一）血清抗鏈球菌溶血素“O”試驗(yàn) 溶血素“O” 是一種A群溶血性鏈球菌的毒素，屬蛋白質(zhì)，能溶解紅細(xì)胞，殺傷白細(xì)胞和血小板，它具有抗原性，可使人產(chǎn)生相應(yīng)抗體，稱抗鏈球菌溶血素“O”，也叫抗O或 ASO。一般當(dāng)機(jī)體受到A群溶血性鏈球菌感染2-3周， 血清中出現(xiàn)抗O，這種抗體滴度直至病愈后數(shù)月到半年才下降至正常水平。 檢測方法： 膠乳凝集法和ELISA,臨床意義： 1

47、. 抗O升高（滴度大于1：400）表示近期內(nèi)有A群溶血性鏈球菌感染，常見于活動性風(fēng)濕熱、風(fēng)濕性心臟病、風(fēng)濕性關(guān)節(jié)炎、急性腎小球腎炎、急性上感、皮膚和軟組織感染等。 2.抗體有高滴度逐漸下降時(shí)，可認(rèn)為疾 病緩解，抗體恒定在高水平時(shí)，多為活動期。,（二）傷寒和副傷寒沙門菌免疫測定 人體被傷寒沙門菌感染后，該菌體“O”抗原和鞭毛“H”抗原，刺激人體產(chǎn)生相應(yīng)抗體。副傷寒分為甲（A）乙（B）丙（C）三型，它們均有各自的菌體抗原和鞭

48、毛抗原，這些抗原也可在人體內(nèi)刺激機(jī)體產(chǎn)生各自相應(yīng)的抗體。,1．肥達(dá)氏反應(yīng)（Widal reaction，WR） WR是利用傷寒和副傷寒沙門菌液為抗原，檢測病人血清中有無相應(yīng)抗體的一種凝集試驗(yàn)。 參考值 :直接凝集法 傷寒WR“H”低于1：160；“O”低 于1：80。副傷寒WR 甲（A）乙

49、 （B）丙（C）都低于1：80。 臨床意義：WR陽性一般出現(xiàn)在傷寒發(fā)病后一周，陽性率10%；第二周上升為60-70%；第四周可達(dá)90%以上。單份血清抗體效價(jià)“O”大于1：80及“H”大于1：160者有診斷意義；若動態(tài)觀察，WR持續(xù)超過參考值或較原效價(jià)升高4倍以上者更有價(jià)值。,2．傷寒和副傷寒沙門菌抗體IgM測定 參考值: ELISA法正常人為陰性或滴度〈1

50、：20 臨床意義：發(fā)病后一周即可出現(xiàn)升高，有早期診斷價(jià) 值若其滴度〉1：20對診斷傷寒帶菌者也 有意義。本測定的敏感性和特異性均優(yōu)于 肥達(dá)氏反應(yīng)。3．傷寒和副傷寒沙門菌可溶性抗原測定 傷寒沙門菌在體 內(nèi)繁殖、破裂， 患者血及尿液內(nèi)出現(xiàn)傷寒沙

51、門菌抗 原。用相應(yīng)的抗血清致敏膠乳，與患者血及尿液中傷 寒沙門菌可溶性抗原反應(yīng)，可產(chǎn)生凝集。 參考值 ： 膠乳凝集法為陰性 臨床意義：陽性對確診沙門菌感染更有重要意義,三、其他病毒感染免疫檢測,（一）巨細(xì)胞病毒的檢測：巨細(xì)胞病毒是一種皰疹病毒，核酸呈雙鏈DNA，由于它能使感染的細(xì)胞變大，故稱巨細(xì)胞病毒。1．檢測方法 抗體：IFA（免疫熒光法）和ELISA

52、 DNA：分子雜交或PCR法2．臨床意義 IgM陽性提示現(xiàn)癥感染或處于病毒活動期；IgG陽性則提示既往感染或潛伏感染，人群中有90%以上可呈陽性反應(yīng)；若雙份血清效價(jià)有4倍以上增長則提示近期有感染活動，DNA陽性提示現(xiàn)癥感染。先天性感染一般由母嬰通過胎盤或產(chǎn)道感染，后天性則主要通過接觸傳播。巨細(xì)胞病毒的檢測一般對孕婦或新生兒比較有意義。因?yàn)榫藜?xì)胞病毒感染易導(dǎo)致流產(chǎn)、畸胎和死胎，對嬰幼兒來說易導(dǎo)致發(fā)育不良或弱智。,

53、（二）柯薩奇病毒的檢測：,柯薩奇病毒是一種單鏈的小RNA病毒，可分為A、B兩群，A群又有24個(gè)血清型，B群則有6個(gè)血清型。 1．檢測方法 抗體：間接血凝法、IFA法或ELISA法 RNA：用RT-PCR法 2．臨床意義 IgM陽性提示現(xiàn)癥感染，IgG則為既往感染，RNA陽性對柯薩奇病毒感染的診斷更有意義，也提示現(xiàn)癥感染。A群主要引起無菌性腦膜炎、新生

54、兒肺炎、皮疹和普通的感冒；B群則主要引起心肌炎、無菌性腦膜炎、上感和成人的肺炎。,（三）輪狀病毒的檢測： 輪狀病毒屬胃腸病毒科，是雙鏈RNA病毒，是引起人病毒性胃腸炎最常見的病原體，嬰幼兒腹瀉50%是由輪狀病毒所致。檢測的方法基本和柯薩奇病毒相似，這里就不再祥述了。,四、寄生蟲感染免疫的檢測,弓形蟲的檢測：弓形蟲感染為人畜共患疾病，可引起中樞神經(jīng)系統(tǒng)、眼的疾病，也可以引起流產(chǎn)、先天畸形等。 1．檢測

55、方法 抗體：間接血凝法、IFA法或 ELISA法 DNA：用PCR法 2．臨床意義 IgM陽性是近期感染的指標(biāo)，IgG則提示既往感染，雙份血清抗體滴度4倍以上增高或單份抗體滴度大于1：512時(shí)，提示近期感染可能性大。DNA陽性對弓形蟲病的診斷有重要意義。,五、性

56、傳播疾病免疫檢測 （－）人類獲得性免疫缺陷病毒抗體及RNA測定 人類獲得性免疫缺陷病毒是愛滋?。ˋIDS）的病原體，它是一種逆轉(zhuǎn)錄病毒，是一種單鏈RNA病毒，可分為HIV-1和HIV-2型，當(dāng)機(jī)體感染HIV數(shù)周到半年后絕大多數(shù)患者體內(nèi)可出現(xiàn)抗HIV抗體。 參考值： （1）篩選試驗(yàn)：ELISA法和快速蛋白印跡法 均為

57、陰性 （2）確認(rèn)試驗(yàn)：蛋白印跡試驗(yàn)和RT-PCR檢 HIV-RNA均為陰性 臨床意義： 篩選試驗(yàn)敏感性高，但特異性不高，故有假陽性，所以篩選試驗(yàn)陽性時(shí)需用確診試驗(yàn)證實(shí)。確診試驗(yàn)陽性，特別是RT-PCR法檢測HIV-RNA陽性，對肯定診斷和早期診斷頗有價(jià)值。,（二）梅毒螺旋體抗體檢

58、測,人體感染梅毒螺旋體后，血清中可出現(xiàn)特異性抗體（針對密螺旋體抗原），還出現(xiàn)非特異性抗體（反應(yīng)素）（針對類脂抗原） 1．初篩試驗(yàn) 即檢測非特異性抗體（反應(yīng)素）的試驗(yàn) （1）檢測方法：快速血漿反應(yīng)素試驗(yàn)（RPR） 不加熱血清反應(yīng)素試驗(yàn)（USR） 美國性病研究實(shí)驗(yàn)室實(shí)驗(yàn)（VDRL）

59、（2）臨床意義 初篩試驗(yàn)適用于梅毒的篩選。這些試驗(yàn)一般在感染梅毒螺旋體后1-2周為76％，二期梅毒為95-100%，晚期梅毒為70-95%，隱性感染期為70-80%，但定性試驗(yàn)易出現(xiàn)假陽性反應(yīng)，見于SLE、瘧疾、結(jié)核、瘤型麻風(fēng)病等。初篩實(shí)驗(yàn)可定量，用于療效觀察。,2．確認(rèn)試驗(yàn) 即檢測梅毒螺旋體的特異性抗體的試驗(yàn)（1）檢測方法： 梅毒螺旋體血凝試驗(yàn)（TPHA） 熒光螺旋體抗體吸

60、收試驗(yàn)（FTA-ABS）（2）臨床意義 篩選試驗(yàn)陽性的情況下必須做確認(rèn)試驗(yàn)，陽性可肯定梅毒的診斷。確認(rèn)試驗(yàn)靈敏度高，特異性強(qiáng)，不受藥物治療的影響，特異性抗體可持續(xù)數(shù)年甚至終身。不能用于療效觀察。,六、TORCH感染免疫檢測,TORCH是指一組病原微生物的英文名稱縮寫。T即剛地弓形蟲或弓形蟲 (toxoplasma gondii)，O即其它病原微生物 (others)，R即風(fēng)疹病毒(rubella virus)，C即巨細(xì)胞病毒(cyto

61、megalovirus)，H即單純皰疹病毒 (herpes simplex virus)。這組病原體?？赏ㄟ^胎盤傳給胎兒，引起圍生期感染，導(dǎo)致流產(chǎn)、死胎、早產(chǎn)、先天畸形和智力障礙等各種異常結(jié)果，因此受到廣泛關(guān)注。TORCH感染的抗體檢查在許多地區(qū)已作為孕期檢查的常規(guī)項(xiàng)目。,風(fēng)疹病毒抗體測定,風(fēng)疹病毒(rubella virus)直徑為60nm，具單股RNA。是兒童風(fēng)疹的 病原體，一般癥狀較輕。但孕婦若在妊娠頭3個(gè)月內(nèi)感染風(fēng)疹

62、病 毒，易引起胎兒畸形， 因此， 對早孕婦女進(jìn)行風(fēng)疹病毒特異性 IgM、IgG抗體監(jiān)測有重要意義。 參考值 ELISA：陰性 RT-PCR法：陰性 臨床意義 風(fēng)疹病毒易感人群為1一5歲的兒童及孕婦，據(jù)統(tǒng)計(jì)，孕婦在懷孕 1一6周時(shí)感染風(fēng)疹者約50%可致流產(chǎn)、死胎、早產(chǎn)；若胎兒存活 出生，也可能發(fā)生先天性風(fēng)疹綜合征，表現(xiàn)為先天性白內(nèi)障，先

63、 天性心臟病， 神經(jīng)性耳聾， 小頭崎形和智力障礙等。 風(fēng)疹病毒 IgM抗體陽性，提示有近期感染，必要時(shí)應(yīng)終止妊娠。風(fēng)疹病毒 IgG抗體陽性，表示機(jī)體已受過風(fēng)疹病毒感染，具有免疫力。,單純皰疹病毒抗體測定,單純皰疹病毒(herpes simplex virus，HSV)為雙鏈DNA，根據(jù)限制 性內(nèi)切酶切點(diǎn)不同，分HSV-I和HSV-II二型。HSV原發(fā)感染后， 機(jī)體最先出現(xiàn)IgM，隨后出現(xiàn)

64、IgA及IgG，抗體能防止病毒播散， 但不能阻止復(fù)發(fā)。臨床上常用間接血凝試驗(yàn)和ELISA等進(jìn)行輔助 診斷。檢出特異性IgM陽性或雙份血清特異性IgG抗體效價(jià)上升4 倍或4倍以上，可提示HSV近期感染。 參考值 間接血凝試驗(yàn)，ELISA：陰性 臨床意義 HSV主要引起皰疹性口腔炎，皰疹性角膜結(jié)膜炎，皰 疹性腦膜炎， 皰疹性外陰陰道炎，濕疹性皰疹，新生兒皰疹等。

65、生殖器官以外部位的HSV感染多由 HSV-I型引起 (占95%)，而生殖 器官的HSV感染主要由HSV-II型引起 (占78%)。 IgM抗體陽性提示 近期有HSV感染。孕早期感染HSV者可導(dǎo)致流產(chǎn)，妊娠中、晚期 感染者，可引起胎兒和新生兒發(fā)病。,七、其他免疫檢測 C反應(yīng)蛋白檢測：是一種由肝臟合成的、能與肺炎雙球菌細(xì)胞壁C－多糖起反應(yīng)的急性時(shí)相反應(yīng)蛋白。 臨床意義： 1. 升高見

66、于：化膿性感染、組織壞死（特別是手術(shù)和創(chuàng)傷）、惡性腫瘤、器官移植排斥反應(yīng)等 2. 鑒別細(xì)菌性和非細(xì)菌性感染 3. 鑒別風(fēng)濕熱活動期和穩(wěn)定期 4. 鑒別器質(zhì)性和功能性疾病,第四節(jié)、腫瘤標(biāo)志物的檢測 概念：腫瘤標(biāo)志物是指在腫瘤發(fā)生和增殖過程中，由腫瘤細(xì)胞本身合成、釋放或者是由機(jī)體對腫瘤細(xì)胞反應(yīng)而產(chǎn)生的一類物質(zhì)。它能反應(yīng)腫瘤的存在和生長，對腫瘤的診斷、療效和復(fù)發(fā)的監(jiān)測、預(yù)后的判斷具有一定的價(jià)值。與正常組

67、織相比，標(biāo)志物明顯增高，并存在于血液、細(xì)胞、組織或體液中。 主要檢測方法：放射免疫法（RIA）、酶聯(lián)免疫吸附法 （ELISA）和化學(xué)發(fā)光法 腫瘤標(biāo)志物檢測的意義：腫瘤普查、輔助診斷、觀察 療效和判斷預(yù)后。,早期發(fā)現(xiàn)、早期診斷、早期治療最主要的是早期發(fā)現(xiàn)：腫瘤特

68、異性標(biāo)志物高危人群 標(biāo)本 DNA PCR 基因檢測 變異基因分析 特異性蛋白表達(dá) 單抗 檢測試劑盒或檢測芯片,,,,,,,,,常用的腫瘤標(biāo)志物及其主要的臨床意義：,1．甲胎蛋白（AFP）：是一種胎兒早期由肝臟合成的糖蛋白原發(fā)性 肝癌時(shí)可明顯升高，在病毒性肝炎、肝硬化時(shí)AFP也有不同程度 的升

69、高，但升高的程度不如原發(fā)性肝癌明顯。 2．癌胚抗原（CEA）：是一種含多糖的蛋白復(fù)合物，胎兒早期的消 化管及某些組織均有合成CEA的能力，但孕后6個(gè)月以后含量減 少，出生后含量極底。胰腺癌、結(jié)腸癌3．前列腺特異抗原（PSA）：PSA是一種由前列腺細(xì)胞分泌的單鏈 糖蛋白，它具有前列腺特異性，但不具前列腺癌特異性，一般前 列腺癌時(shí)，血清PSA水平明顯升高，但一部分前列腺增生的病人