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文檔簡(jiǎn)介
1、病源性球菌與桿菌,一、實(shí)驗(yàn)?zāi)康?.掌握鏈球菌、腦膜炎雙球菌、結(jié)核桿菌、白喉?xiàng)U菌的形態(tài)特征和染色特性。2.熟悉腸道桿菌培養(yǎng)特征、生化反應(yīng)及動(dòng)力學(xué)等特性。3.了解三種葡萄球菌產(chǎn)生的色素。4.了解乙型溶血型鏈球菌在血瓊脂平板上的菌落特點(diǎn)及溶血性。5熟悉抗“o”試驗(yàn)的方法及臨床意義。,二、實(shí)驗(yàn)內(nèi)容1.自己動(dòng)手觀察鏈球菌、腦膜炎雙球菌的形態(tài);示教觀察結(jié)核桿菌、白喉?xiàng)U菌的形態(tài)。2.觀察腸道桿菌的雙糖發(fā)酵,鑒別培養(yǎng)基(ss培養(yǎng)基)的生化
2、反應(yīng)。3.化膿性球菌的鑒定⑴三種葡萄球菌的色素觀察⑵乙型鏈球菌的溶血現(xiàn)象觀察⑶抗“O”實(shí)驗(yàn)。,三、作業(yè):1.鏡下繪出4種形態(tài)圖2.根據(jù)生化特性及產(chǎn)生色素,葡萄球菌分為哪幾種類型?,,,,,,,,,,,,,,,,Salmonella -Shigella Mediun,主要成分 基礎(chǔ)營(yíng)養(yǎng) 乳糖 指示劑 抑制劑,分解乳糖,不分解乳糖,產(chǎn)酸,PH,指示劑變紅色,,紅色
3、大菌落,,,大腸桿菌等,無明顯變化,無色半透明小菌落,志賀菌等,,大腸桿菌,痢疾桿菌,,,結(jié)核分枝桿菌,抗酸染色,乙型溶血性鏈球菌,溶血環(huán),白喉棒狀桿菌,異染顆粒,實(shí)驗(yàn)四 病原性球菌,1. 五類病原性球菌的形態(tài)、排列及染色性2. 葡萄球菌、鏈球菌的培養(yǎng)物3. 血漿凝固酶試驗(yàn)--玻片法 試管法4、抗鏈球菌溶血素”O(jiān)”(ASO)乳膠試驗(yàn)5、膿汁中葡萄球菌的分離鑒定,(操作,1人/組),,(操
4、作,1人/組),肺炎球菌特殊染色可見的莢膜,G+球菌:,金葡菌,鏈球菌,肺炎雙球菌,1. 五類病原性球菌的形態(tài)、排列及染色性,G-球菌:,淋球菌,腦膜炎球菌,2. 葡萄球菌、鏈球菌的培養(yǎng)物,,普通瓊脂平板 血平板 菌落形狀 色素 溶血性 金葡 圓形凸起光滑中等大小 金黃色 +檸葡 同上 檸檬色
5、 - 白葡 同上 白色 -,,,,,,表1,血平板甲型鏈球菌 針尖小菌落、草綠色狹窄溶血環(huán)乙型鏈球菌 針尖小菌落、透明寬大溶血環(huán),巧克力血平板腦膜炎雙球菌 菌落透明似露滴狀,表2,,,,表3,,,,3. 血漿凝固酶試驗(yàn)--玻片法,(操作,1人/組),原理:,方法:,,,,兔血漿 兔血漿 生理鹽水,,,,1,2,3,金葡 白
6、葡 金葡,+ + +,,,,凝集(+),不凝集(-),不凝集(-),4、血漿凝固酶試驗(yàn)(試管法),,,金葡菌 白葡菌 + + 兔血漿 兔血漿 37℃30′水浴觀察,凝集為陽性,不凝集為陰性,,凝固酶實(shí)驗(yàn)(試管法),五、抗鏈球菌溶血素“O”(ASO)
7、 快速膠乳法 高滴度病人血清被適量溶血素中和了正常水平 的抗體后,還有多余ASO,這些多余抗體即與SLO膠乳 試劑反應(yīng),出現(xiàn)清晰、均勻的凝集顆粒。,,,(操作,1人/組),原理:,,,,,,,陽性對(duì)照 陰性對(duì)照 待測(cè)血清 各加溶血素“O” 1滴輕搖1min 再加SLO膠乳1滴輕搖3
8、min,,,,觀察結(jié)果,方法:,稀釋度 ASO (IU/ml)1:15 4001:30 8001:60 1600,ASO≤250 IU/ml 陰性,結(jié)果判定:,注意事項(xiàng):,液體量要一樣,菌量一樣。血漿多挑幾環(huán)(一滴的量),菌少挑點(diǎn), 不
9、能干。3. 涂菌時(shí)間一樣,出現(xiàn)凝集為陽性,再涂 凝集物可被涂散,變陰性。,,腸道桿菌,一、腸道桿菌的形態(tài)及染色性 二、腸道桿菌的培養(yǎng)特性 三、腸道桿菌的生化反應(yīng)特點(diǎn) 四、Widal實(shí)驗(yàn),腸道桿菌的形態(tài)及染色片,腸道菌的菌落形態(tài),EMB 大腸:菌落呈紫黑色,有金屬光澤。 傷寒 痢疾:菌落無色半透明。 SS D大腸:大而不透明的紅色菌落。 傷寒 痢疾:中等大小淡黃色菌落。,,大腸桿菌(EMB培養(yǎng)基),,,腸道致
10、病菌(SS培養(yǎng)基),糞便標(biāo)本中致病性腸道桿菌的分離與鑒定,生化反應(yīng)1——單糖發(fā)酵,葡萄糖及乳糖發(fā)酵 一)實(shí)驗(yàn)?zāi)康呐c原理 了解糖發(fā)酵試驗(yàn)方法 二)實(shí)驗(yàn)材料 1、菌種:大腸桿菌、傷寒桿菌、痢疾桿菌培養(yǎng)物 2、培養(yǎng)基:乳糖及葡萄糖發(fā)酵管 三)實(shí)驗(yàn)方法 1、用接種環(huán)將大腸桿菌、傷寒桿菌分別各接種于葡萄糖及乳糖發(fā)酵管中(方法同前)。 2、37孵育18~24小時(shí),取出觀察結(jié)果。,動(dòng)力檢測(cè),常見腸道桿菌的生化反應(yīng)鑒別
11、表,鐵質(zhì)雙糖瓊脂基上各種腸道桿菌的生長(zhǎng)情況,腸道桿菌在KI培養(yǎng)基上的培養(yǎng)特性,Indol實(shí)驗(yàn),生化反應(yīng)2——Indol實(shí)驗(yàn),2. 腸道桿菌在SS培養(yǎng)基上的生長(zhǎng)現(xiàn)象,大腸桿菌 傷寒桿菌SS平板 紅色大菌落 無色透明小菌落,,,,基礎(chǔ)培養(yǎng)基,乳糖(底物),膽鹽、煌綠(抑制非致病菌),中性紅(指示劑)。,SS培養(yǎng)基:,3. 五類腸道桿菌的生化反應(yīng)及動(dòng)力,大腸桿菌 ⊕
12、 ⊕ - - + + + /⊕變形桿菌 ⊕ - + + +/- + - /⊕乙型副傷寒桿菌 ⊕ - ++
13、 - - + -/⊕傷寒桿菌 + - +/- - - + -/+痢疾桿菌 + - - - +/- -
14、 -/+,葡萄糖 乳糖 H2S 尿素 靛基質(zhì) 動(dòng)力 雙糖鐵,,,,4. 腸道桿菌未知菌1和未知菌2的鑒定,(操作,2人/組),未知菌,雙糖鐵培養(yǎng)基(乳糖/固體/上,葡萄糖/半固體/下),生化反應(yīng),葡萄糖發(fā)酵乳糖發(fā)酵尿素酶試驗(yàn)H2S試驗(yàn)靛基質(zhì)試驗(yàn)(蛋白胨水液體培養(yǎng)基)動(dòng)力試驗(yàn)(半固體培養(yǎng)基),(微量發(fā)酵管),,,方法:,血清學(xué)鑒定(玻片凝集反應(yīng)),,,,,(37℃
15、5;18~24h),,,,傷寒診斷血清 傷寒診斷血清 + + 未知菌1 未知菌2,血清學(xué)鑒定(玻片凝集反應(yīng)),,,? ?,結(jié)果:,雙糖鐵 葡 乳 尿 H2S 靛 動(dòng)力 血清學(xué) 未知菌1未知菌2,,,,結(jié)論:,未知
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